国家自然科学基金(81100306)
- 作品数：7 被引量：5H指数：1
- 相关作者：杭化莲卞建民夏强禹亚彬张玉玲更多>>
- 相关机构：南京医科大学上海交通大学医学院附属仁济医院遵义医学院附属医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金南京市医学科技发展项目更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 过表达肝细胞核因子4α脐带间充质干细胞促进小鼠大部肝切后肝再生被引量：1
- 2015年
- 目的：探讨人源性脐带间充质干细胞（UC-MSC）以及过表达肝细胞核因子4α（HNF4α）的UC-MSC能否促进小鼠大部肝切后肝再生。方法体外分离、培养、鉴定人UC-MSC，慢病毒转染过表达HNF4α。体外收集细胞培养上清液，将L02与上清液共培养，通过细胞增殖实验试剂盒（CCK8）检测细胞增殖活性。体内实验建立肝大部切除模型（约70%），分别经尾静脉向肝切除小鼠移植0.9%生理盐水（NS）、MSC、MSC-HNF4α。48h后比较3组肝切后肝再生的变化，通过免疫组化来观察肝标本Ki67的表达。结果成功分离鉴定UC-MSC，并且成功建立稳定过表达HNF4α的MSC。体外实验MSC组和MSC-HNF4α组中L02的增殖能力都明显高于NS组（P＜0.01），MSC组高于MSC-HNF4α组（P＜0.05）。同样体内实验相对于NS组，经MSC或MSC-HNF4α细胞处理的肝脏，其Ki67的表达明显高于NS组（ P＜0.01），同样MSC组高于MSC-HNF4α组（P＜0.05）。结论 UC-MSC和过表达HNF4α的MSC都分泌一系列因子促进肝再生。
- 吴宁马永翟秀宇张玉玲张勇张祺祺杭化莲夏强卞建民
- 关键词：小鼠肝再生间充质干细胞肝细胞核因子4Α
- 成人原代肝细胞微囊化冷冻
- 2014年
- 目的 建立一种稳定的成人肝细胞冷冻方法,为构建永生化肝细胞系提供充足的肝细胞来源,为肝细胞移植、生物人工肝支持系统治疗急、慢性肝病及肝细胞体外应用模型提供潜在的肝细胞资源.方法 20例供肝采用离体两步胶原酶灌注技术分离成人原代肝细胞.选择7个预置时间点（2、6、12、24、36、48、72 h）,在4℃人无血清培养基预置12 ～ 24 h后,使用海藻酸钠-多聚赖氨酸微球微囊化肝细胞,液氮保存.分析预置微囊冷冻组及对照组肝细胞的形态学、病理结构、白蛋白水平、尿素合成、细胞周期、肝细胞特异性功能基因mRNA和蛋白表达水平.各组间数据比较均采用方差分析,计数资料采用Fisher ＆#39;s exact test检验.结果 在部分肝叶切除后使用离体两步胶原酶灌流技术分离所得肝细胞活率和贴壁率分别是75.0％＆#177;4.6％和72.0％＆#177;6.0％.4℃预置12h或24h细胞的白蛋白分泌高于其他时间点,F=40.3,P值均＜0.05,差异有统计学意义.4℃预置12h或24h与立即冷冻（IC）组比较,解冻后贴壁肝细胞白蛋白和尿素合成水平明显增高,且肝细胞特异性功能基因mRNA和蛋白水平明显增高,此两个时间点是最适预置时间.预置微囊冷冻（PMC）组细胞与IC组比较,肝细胞形态保持的更为完整,细胞增殖周期、糖原染色及肝细胞功能特异性基因的mRNA和蛋白表达水平均明显增强.PMC组细胞在贴壁培养后第2、3、4天的白蛋白分泌分别与直接培养（DC）组分别比较,P值均＞ 0.05,差异均无统计学意义;而PMC组细胞在贴壁培养后第2、3、4天,与IC组的白蛋白水平比较（119.2 ng/ml对比101.2 ng/ml,110.0 ng/ml对比87.6 ng/ml,98.2 ng/ml对比73.8 ng/ml）和尿素合成比较（7.83μg/ml对比6.79 μ g/ml,6.83 μ g/ml对比5.89μg/ml,5.85 μg/ml对比4.83 μg/ml）均较IC组明显增高,两组比较,F值分别为22.1、31.1,P值均＜0.05,差异均有统计学意义.结论 部分�
- 杭化莲禹亚彬卞建民夏强
- 关键词：肝细胞细胞培养技术冷冻微囊化
- HNF4α真核表达载体的构建及其在人脐带间充质干细胞中的表达被引量：2
- 2012年
- 目的:构建pcDNA3.1/HNF4α重组质粒,转染人脐带间充质干细胞(human umbilical cord mesenchymal stem cells,HUMSCs),并检测其在HUMSCs中的表达。方法:采用基因重组技术构建载体pcDNA3.1/HNF4α,经酶切和DNA测序鉴定,通过脂质体法转染HUMSCs后,进行RT-PCR和Western blot分析,免疫荧光检测转染后1周肝特异性生化指标。结果:成功构建真核表达质粒pcDNA3.1/HNF4α,转染人脐带间充质干细胞后,RT-PCR示转染后HNF4αmRNA表达,Western blot分析见HNF4α蛋白表达,免疫荧光示转染1周后HNF4α促进了HUMSCs向肝细胞方向分化。结论:成功构建真核表达载体,并在HUMSCs中正确表达,为进一步研究HNF4α在干细胞向肝细胞分化中作用提供了实验基础。
- 禹亚彬杭化莲卞建民
- 关键词：质粒构建人脐带间充质干细胞肝细胞分化
- 人脐带间充质干细胞促进肝癌细胞的增殖和转移被引量：1
- 2014年
- 目的:研究人脐带来源的间充质干细胞(human umbilical cord mesenchymal stem cells,UC-MSCs)在体内、体外实验中对人肝癌细胞株HepG2的增殖和转移作用。方法:将UC-MSCs在无血清DMEM/F12培养基中培养48 h,收集上清液(MSCsCM)。加入到HepG2的培养基中,使其在HepG2培养基的终浓度为25%、50%和75%作为实验组,DMEM/F12作为对照组,采用CCK-8法检测细胞增殖效应。其后使用Transwell法检测细胞的侵袭效应。建立裸鼠皮下肿瘤模型,健康雌性裸鼠12只随机分为A(HepG2细胞单/左侧皮下成瘤)、B(UC-MSCs+HepG2预混单/左侧皮下成瘤)、C(左侧HepG2、右侧UC-MSCs+HepG2皮下成瘤)3组(n=4),每隔7 d监测成瘤体积变化,50 d后统一处死称量肿瘤湿重。结果:经各浓度MSCs-CM处理后HepG2细胞增殖能力较对照组明显增高(P<0.05);实验组侵袭能力明显高于对照组(P<0.01)。50 d后皮下肿瘤湿重测得A组(0.054 2±0.011 2)g、B组(0.292 0±0.156 9)g、C组[左侧(0.089 4±0.024 2)g、右侧(0.332 6±0.102 9)g],并且从定期体积测量数据发现,两组体积的差异随着时间的推移逐渐增大(P<0.05)。结论:UC-MSCs能促进HepG2的生长和转移,并且这种对肿瘤的增殖和侵袭促进作用可能与UC-MSCs分泌的一些因子有关。
- 吴宁杭化莲张玉玲戴绘娟夏强卞建民
- 关键词：脐带间充质干细胞肝癌HEPG2肿瘤增殖肿瘤转移
- 肝细胞核因子4α:肝脏疾病研究与治疗的新方向
- 2014年
- 肝脏是人体内最大的实质性器官,是人体的“化工厂”.肝脏组织60％～ 80％由肝细胞组成,肝细胞通过特异性地表达一系列功能与分化相关基因,为肝脏发挥重要的生物学功能提供保障.肝细胞核因子4α（HNF4α）是细胞核受体超家族成员,在分化成熟的肝细胞中高表达,能与成熟肝脏中12％的基因的启动子结合,对促进正常的肝细胞分化和维护正常的肝细胞生物学功能发挥着重要的调控作用.近年来,人们开始研究HNF4α与各种肝脏疾病间的关系,并且取得了一定的研究成果,为肝脏疾病的进一步研究和临床治疗提供了新的思路.
- 刘新育杭化莲吕成余
- 关键词：肝细胞核因子4Α肝脏疾病脂肪肝肝母细胞瘤病毒性肝炎
- 肝细胞核因子4α促进人脐带间充质干细胞向肝细胞分化的研究被引量：1
- 2013年
- 我们在前期添加细胞因子诱导人脐带间充质干细胞（HUMSCs）的条件下，后期转染肝细胞核因子40L（HNF4a）并检测诱导效果，寻找一种新的肝细胞种子来源。
- 禹亚彬杭化莲丁爱兴黄庆峰卞建民
- 关键词：脐带间充质干细胞肝细胞核因子肝细胞分化细胞因子诱导
- 胆道疾病的手术并发症被引量：1
- 2013年
- 胆道手术并发症与胆道疾病类型、手术方法及围手术期处理关系甚为密切。随着影像学的发展、手术方法的更新、临床医师经验的积累，胆道手术并发症的发病率总体上在下降。然而实际临床诊疗过程中胆道疾病的手术并发症仍然居高不下，
- 杭化莲夏强
- 关键词：胆道手术并发症胆道疾病围手术期处理疾病类型诊疗过程
