国家高技术研究发展计划(2007AA02Z225)
- 作品数：5 被引量：12H指数：3
- 相关作者：许建和李素霞赵健范立强吴娇娇更多>>
- 相关机构：华东理工大学更多>>
- 发文基金：国家高技术研究发展计划国家重点实验室开放基金更多>>
- 相关领域：生物学化学工程更多>>
- 正交试验优化黏质沙雷菌脂肪酶包涵体复性条件被引量：3
- 2010年
- 目的优化黏质沙雷菌脂肪酶复性条件。方法采用正交试验研究影响脂肪酶复性的关键因素,包括复性液的离子强度、pH、复性温度和复性液尿素浓度;进一步优化筛选出的关键因素。结果最佳复性液组成为20 mmol/L Tris-HCl(pH7.0),1 mmol/L Ca2+,复性液中尿素浓度0.8 mol/L,复性温度30℃。复性12 h后脂肪酶活性可达3 500 U/L。结论影响脂肪酶复性的关键性因素为复性液pH及离子强度。Ca2+可以促进脂肪酶复性。
- 庞怀宇吴娇娇李素霞许建和赵健范立强
- 关键词：脂肪酶复性正交试验
- 包涵体蛋白质的品质被引量：3
- 2009年
- 包涵体(inclusion body,IB)曾被认为缺乏正确的分子结构。近年来,傅里叶变换红外光谱(FT-IR)成为对包涵体蛋白质进行结构分析的有效手段,利用傅里叶变换红外光谱对包涵体蛋白质进行结构分析,表明IB蛋白质含有天然或类天然结构。所谓的包涵体蛋白质的品质,是指与复性率相关的IB蛋白质状态,主要反映为包涵体蛋白质构象的差异性。影响包涵体蛋白质品质的,既有内因也有外因,分析其影响因素,将有助于调整重组蛋白质生产的最佳培养条件。活性包涵体是近年来包涵体研究领域最具意义的成就之一。对包涵体蛋白质品质的研究将对包涵体蛋白质的复性以及活性包涵体的研究和应用具有重要意义。
- 王亚辉辛爱洁李素霞许建和
- 关键词：傅里叶变换红外光谱
- 酿酒酵母甲酸脱氢酶在大肠杆菌中的高效表达、纯化及其酶学性质
- 2011年
- 目的克隆酿酒酵母甲酸脱氢酶(Formate dehydrogenase,FDH)基因,在大肠杆菌中表达、纯化重组蛋白,并进行酶学性质分析。方法以酿酒酵母基因组DNA为模板,采用温度梯度PCR法扩增fdh基因,重叠PCR技术校正fdh中的移码突变,构建重组表达质粒pET-28a-fdh,转化至大肠杆菌BL21(DE3)中,分别采用37℃IPTG诱导、15℃IPTG诱导和37℃乳糖自诱导表达,镍金属螯合亲和层析纯化重组FDH蛋白,并分析重组FDH的酶学性质。结果成功克隆了1 100 bp的fdh基因,碱基突变纠正了基因缺失和置换引起的编码错误;表达的重组FDH相对分子质量约为43 000,37℃乳糖诱导表达的重组FDH主要以可溶形式表达,表达量约占菌体总蛋白的30%;纯化的重组蛋白比活为7.69 U/mg;重组FDH的最适反应温度和pH分别为30℃和7.5,热稳定性较好,米氏常数分别为:KmNAD+=49μmol/L,Km甲酸=4.5 mmol/L。结论已在大肠杆菌中表达并纯化了重组FDH蛋白,为进一步研究酿酒酵母FDH,利用其构建NAD(P)H辅酶再生体系奠定了基础。
- 倪敏君范立强王怡张锐赵健李素霞
- 关键词：酿酒酵母NADH
- 黏质沙雷菌ECU1010脂肪酶新基因lipB的克隆和表达被引量：2
- 2011年
- 目的克隆黏质沙雷菌ECU1010脂肪酶基因lipB于大肠杆菌中表达后研究其酶学性质。方法 PCR克隆脂肪酶基因,与质粒pET-28a（＋）连接后转化至大肠杆菌BL21（DE3）。硫酸铵沉淀法纯化表达产物,研究酶的稳定性等酶学性质。结果成功克隆了S.marcescens ECU1010中脂肪酶基因lipB（GenBank：HM440338）,在E.coli中高效表达。LipB最适反应温度40℃,最适pH 8.5。该酶能在pH 5-7条件下保持稳定,Ca2＋有促进酶活性的作用。LipB对不同有机溶剂的耐受性与黏质沙雷菌脂肪酶LipA有明显差异。结论 lipB基因克隆丰富了脂肪酶基因资源,分析LipB的酶学性质表明,此酶在食品工业和手性药物的拆分等领域有广阔的应用前景。
- 吴娇娇李素霞赵健范立强许建和
- 关键词：黏质沙雷菌脂肪酶克隆
- 地尔硫卓手性中间体合成进展被引量：4
- 2009年
- 地尔硫卓是重要的心血管药物,在其分子结构中含有2个手性中心,可产生4个立体异构体,其中只有(2S,3S)-异构体具有药理活性,因此其立体选择性合成具有很大的挑战性。研究人员采用多种方法合成单一构型的地尔硫卓手性中间体,其中包括化学拆分、化学不对称合成以及化学-酶法合成等方法。对地尔硫卓手性中间体的制备方法进行了综述。
- 潘江许建和叶勤
- 关键词：地尔硫卓手性中间体拆分
