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一水草酸钙晶体介导巨噬细胞炎症反应的体外研究被引量：2: 2015年; 目的研究一水草酸钙晶体(calcium oxalate monohydrate,COM)引起的不同表型巨噬细胞的炎症反应。方法在大鼠草酸钙结石模型中研究肾脏巨噬细胞的浸润情况,明确是否存在肾脏炎症。体外分离培养小鼠骨髓源巨噬细胞,流式细胞仪鉴定其细胞表面标志。将巨噬细胞体外分化为M1和M2,Real-time PCR鉴定细胞标志。Real-time PCR检测COM及损伤标志分子ATP对巨噬细胞IL-1β表达的影响,ELISA法检测其IL-1β的分泌。结果在大鼠草酸钙结石模型肾脏切片中,可见大量巨噬细胞浸润,显著多于对照大鼠。体外分离小鼠巨噬细胞,流式细胞仪鉴定表面标志符合巨噬细胞表型,Real-time PCR鉴定M1和M2的标志也符合其相应表型。M1高表达IL-1β、CCL2,低表达MR、ARG;M2高表达MR、ARG,低表达IL-1β、CCL2。COM及其损伤分子ATP均可使M1高表达IL-1β。结论在草酸钙大鼠模型中,巨噬细胞浸润明显,COM和ATP可加重巨噬细胞炎症,并可加重M1的促炎症作用。; 吴柏霖李森茂胡嘏余虓; 关键词：巨噬细胞肾结石炎症反应

一水草酸钙晶体对肾小管上皮细胞毒性作用的体外研究被引量：2: 2015年; 目的:研究一水草酸钙(COM)晶体对肾小管上皮细胞的毒性作用。方法:以永生化的肾小管上皮HK-2细胞作为研究对象,用不同浓度的COM处理细胞,再以DAPI染色并细胞计数研究COM对HK-2细胞增殖的作用;检测细胞培养上清中的LDH含量,说明COM对HK-2的毒性;应用MTS法绘制HK-2细胞增殖曲线;使用流式细胞术检测COM对HK-2细胞的凋亡和坏死的作用。结果:DAPI染色后并细胞计数后HK-2细胞增殖能力经0.1mmol/L的COM处理后便受到抑制,并与对照组比较,差异有显著统计学意义,并随COM浓度的升高,抑制作用更加显著。1mmol/L的COM可使HK-2上清中的LDH显著升高,并在5mmol/L更加明显。1mmol/L的COM处理HK-2细胞后,细胞增殖曲线显著低于对照组,5mmol/L的COM在处理HK-2细胞的第6天几乎全部死亡。0.1mmol/L的COM可使HK-2细胞凋亡显著增加,1mmol/L的COM可使HK-2细胞坏死显著增加,并随浓度的升高而增加。结论:0.1mmol/L的COM刺激HK-2细胞即可使细胞出现生长抑制,浓度达到1mmol/L后,则可出现细胞死亡。; 吴柏霖郭小林王博涵王博涵刘军夏丁杨欢陈志强徐华叶章群; 关键词：肾结石肾小管上皮细胞毒性作用

人KLF4基因克隆及重组KLF4慢病毒表达载体的构建被引量：1: 2013年; 背景:KLF4基因在细胞分化过程中有重要作用。目的:构建KLF4基因慢病毒过表达载体。方法:聚合酶链反应扩增(PCR)目的基因KLF4后插入慢病毒表达载体pCDH中,构建重组载体pCDH-KLF4。通过PCR、双酶切和DNA测序方法对其鉴定,共同转染293NT细胞包装病毒,荧光显微镜观察报告基因的表达情况,收集病毒上清,测定病毒的滴度。将重组的慢病毒感染5637细胞,RT-PCR检测KLF4mRNA的表达。结果与结论:重组慢病毒表达载体质粒经限制性酶切和DNA测序分析证实重组慢病毒载体pCDH-KLF4的插入序列完全正确,重组慢病毒载体感染5637细胞后,细胞内KLF4mRNA高表达。结果证实,实验成功构建KLF4基因慢病毒过表达载体。; 王博涵余虓余淦李恒肖巍徐华叶章群; 关键词：慢病毒载体 DNA测序泌尿系肿瘤

透明质酸合成酶2在肾癌中的表达及临床意义: 2013年; 目的:研究透明质酸合成酶2在肾癌中的表达,并探讨其潜在的临床意义。方法:运用实时定量聚合酶链反应(qPCR)方法检测五种肾癌细胞(ACHN、Caki-1、OS-RC-2、786-O、SN12PM6)透明质酸合成酶三种亚型(HAS1、HAS2、HAS3)mRNA的表达,运用Western blot方法进一步检测mRNA表达含量高的HAS亚型在五种肾癌细胞系及肾透明细胞癌(ccRCC)组织中的蛋白表达。结果:在五种肾癌细胞系中HAS2mRNA表达水平均明显高于正常肾小管上皮细胞(HK-2),其中在肾癌SN12PM6细胞系中表达水平最高(均P<0.05),HAS1mRNA的表达水平均明显低于正常肾小管上皮细胞(均P>0.05),而HAS3mRNA表达水平除肾癌Caki-1细胞系外均低于正常肾小管上皮细胞(P>0.05)。在五种肾癌细胞系中HAS2蛋白均明显表达,而正常肾小管上皮细胞无明显表达。在肾透明细胞癌组织中HAS2蛋白表达也明显高于相应癌旁组织。结论:透明质酸合成酶2在多种肾癌细胞系和肾透明细胞癌组织中均明显表达,提示透明质酸合成酶2可能在肾癌尤其在肾透明细胞癌发生发展过程中起着至关重要的某种作用,并可能成为新的肾透明细胞癌分子标志物。; 刘军王博涵卢鹏丰水强许盛飞余虓杨为民; 关键词：肾癌透明质酸

草酸钙结石小鼠模型的构建被引量：2: 2015年; 目的构建小鼠肾脏草酸钙结石模型.方法使用8周龄雄性C57BL/6小鼠,每天接受不同草酸代谢前体物质腹腔注射处理,包括乙醇酸80 mg/kg和120 mg/kg、乙醛酸80 mg/kg和120 mg/kg、草酸钠140 mg/kg和210 mg/kg,观察小鼠生存情况及体质量变化,肾脏切片行Pizzolato＇s染色观察肾脏内草酸钙晶体形成情况.结果乙醇酸80 mg/kg和乙醛酸80 mg/kg腹腔注射对小鼠的生存影响最小,乙醛酸80 mg/kg腹腔注射对小鼠的体质量影响最小.乙醇酸腹腔注射无法在小鼠肾脏形成草酸钙晶体,而乙醛酸和草酸钠可在肾脏切片上观察到晶体形成.草酸钙晶体在0～6d逐渐增加,6～9d处于平台期,9～15d逐渐减少.结论乙醛酸80 mg/kg腹腔注射是诱导小鼠肾脏草酸钙结石的最佳剂量,小鼠存在结石的形成期和清除期.; 吴柏霖郭小林王博涵刘军夏丁杨欢陈志强叶章群徐华余虓; 关键词：草酸钙结石小鼠模型乙醛酸

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国家自然科学基金(81000292)