国家自然科学基金(3170893)
- 作品数：16 被引量：54H指数：5
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- 激光照射对Jurkat细胞CD59活化途径的影响被引量：1
- 2010年
- 目的研究低功率He-Ne激光照射对Jurkat细胞CD59活化途径的影响。方法将前期培养的Jurkat细胞随机平均分为3组：A组细胞不做任何处理,B组细胞每日定时进行7 min的He-Ne激光照射,C组细胞每日定时进行10 min的He-Ne激光照射。1周后用CD59单克隆抗体作用Jurkat细胞,用MTT法检测Jurkat细胞增殖情况,激光共聚焦方法观察细胞内Ca2＋浓度变化,流式细胞术检测Jurkat细胞CD25表达。结果B、C组Jurkat细胞增殖率、Ca2＋浓度和CD25表达均高于A组（F=41.390~63.938,q=10.907~24.497,P〈0.01）;B组和C组间比较差异无显著性（P〉0.05）。结论低功率He-Ne激光照射可以促进Jurkat细胞经由CD59单克隆抗体刺激后的活化,增强活化信号的传导。
- 徐鹤高美华
- 关键词：JURKAT细胞激光
- CD59锚定蛋白对CD55介导的T细胞信号转导的增强效应被引量：6
- 2011年
- 目的:研究糖基磷脂酰肌醇(GPI)锚定蛋白CD59对CD55介导T细胞信号转导的增强效应。方法:实验分为未转染的Jurkat细胞组(Ⅰ组)、转染空质粒的Jurkat细胞组(Ⅱ组)及转染CD59干扰质粒的Jurkat细胞组(Ⅲ组)。用RT-PCR检测3组细胞中的CD59基因表达水平。用噻唑蓝(MTT)比色法、免疫印迹技术和激光共聚焦扫描显微镜分别检测CD55与CD59联合作用对3组Jurkat细胞的增殖效应,Src家族酪氨酸激酶(SrcPTK)磷酸化的水平及细胞内钙离子的变化。结果:稳定转染后,Ⅲ组细胞CD59分子的表达被成功抑制。Ⅰ组和Ⅱ组细胞CD55与CD59联合作用后增殖能力,SrcPTK磷酸化水平及钙离子浓度均明显高于Ⅲ组(P<0.05);但Ⅰ组和Ⅱ组之间无差异。结论:CD59可增强CD55对T细胞信号转导的效应。
- 聊菲高美华张蓓
- 关键词：CD59CD55JURKAT细胞信号转导
- 荷瘤小鼠T细胞表面CD59分子的表达与T细胞信号转导的相关性研究被引量：2
- 2008年
- 孙庆燕张蓓高美华
- 关键词：CD59T淋巴细胞CD25
- CD59与CD55锚固蛋白对T细胞活化信号转导的作用被引量：1
- 2011年
- 目的研究糖基磷脂酰肌醇（GPI）锚固蛋白CD59、CD55在脂筏介导T细胞信号转导通路中的作用。方法应用siRNA技术,构建针对CD55与CD59基因的重组载体pSUPER-siCD55、pSUPER-siCD59。实验分为未转染的Jurkat细胞组（Ⅰ组）、转染pSUPER-siCD59重组质粒的Jurkat细胞组（Ⅱ组）及转染pSUPER-siCD55重组质粒的Jurkat细胞组（Ⅲ组）。RT-PCR方法检测转染细胞中CD55和CD59基因mRNA的表达。噻唑蓝（MTT）比色法和激光共聚焦扫描显微镜分别检测CD55与CD59联合作用对3组Jurkat细胞的增殖效应以及细胞内钙离子的变化。结果与Ⅰ组比较,Ⅱ组细胞CD59和Ⅲ组细胞CD55 mRNA的表达均明显减少（F=595.14、699.06,q=45.70~47.25,P〈0.05）。Ⅰ组细胞CD55与CD59联合作用后增殖能力和钙离子浓度均明显高于Ⅱ组、Ⅲ组（F=97.02、189.47,q=13.69~26.39,P〈0.01）,Ⅱ组低于Ⅲ组（q=5.43、6.42,P〈0.05）。结论 CD59和CD55在T细胞活化信号转导通路中存在协同效应,其中CD59起到重要作用。
- 聊菲高美华张蓓解西河
- 关键词：JURKAT细胞信号传导
- CD59特异位点的短肽封条对HeLa细胞凋亡作用的研究被引量：5
- 2008年
- 目的:研究CD59特异位点的短肽封条对HeLa细胞凋亡相关基因(survivin、caspase-3及bax)的表达作用,探讨CD59特异位点的短肽封条促HeLa细胞凋亡的作用机制。方法:将CD59特异位点的短肽封条分别作用于HeLa细胞和转CD59基因的HeLa细胞。作用24 h后,采用MTT的方法来检测细胞增殖抑制率;并利用免疫组织化学方法检测sur-vivin,caspase-3及其bax的表达水平。结果:转CD59基因的HeLa细胞+短肽的细胞组增殖抑制率大于HeLa细胞+短肽组(P<0.01)。转CD59基因的HeLa细胞+短肽组和正常的HeLa细胞+短肽组相比较,survivin表达水平降低(P<0.05);而caspase-3表达水平增高(P<0.05);bax的表达量各组比较,差别无统计学意义。结论:CD59特异位点的短肽封条具有下调survivin的表达,活化caspase-3,从而促进HeLa细胞的凋亡。
- 李先平高美华
- 关键词：CD59HELA细胞细胞凋亡CASPASE-3BAX
- CHO细胞表面与人CD59结合的活性短肽序列的筛选被引量：3
- 2007年
- 目的筛选获得高表达人CD59中国仓鼠卵巢细胞(CHO)表面与人CD59特异性结合的短肽序列,为下一步研究与肿瘤逃逸相关的CD59活性位点的短肽药物提供实验依据。方法以离子层析柱纯化的CHO细胞的裂解蛋白纯蛋白为靶分子分别进行5轮亲和筛选,并进行竞争结合实验,双夹心ELISA方法鉴定噬菌体阳性克隆。提取阳性单克隆单链DNA测序,并推导出短肽序列。结果随机挑选的16个单克隆中有10个克隆对CHO细胞纯蛋白有特异性结合力,经测序得到两条高度同源的多肽序列。结论通过噬菌体随机肽库对CHO细胞进行纯蛋白筛选得到了能与人CD59特异性结合的短肽序列。
- 崔林林高美华赵鹏
- 关键词：噬菌体肽库
- CD59、CD55在T细胞活化信号转导中的协同作用
- 2011年
- 目的:研究糖基磷脂酰肌醇(GPI)锚固蛋白CD59、CD55在脂筏介导T细胞信号转导通路中的协同效应。方法:应用siRNA技术,构建特异性针对CD55与CD59基因的重组载体pSUPER-siCD55,pSUPER-siCD59。实验分为未转染的Jurkat细胞组(Ⅰ组)、转染pSUPER空质粒的Jurkat细胞组(Ⅱ组)、转染pSUPER-siCD59重组质粒的Jurkat细胞组(Ⅲ组)及转染pSUPER-siCD55重组质粒的Jurkat细胞组(Ⅳ组)。RT-PCR检测转染细胞中CD55和CD59基因的表达噻唑蓝(MTT)比色法和激光共聚焦扫描显微镜分别检测CD55与CD59联合作用对4组Jurkat细胞的增殖效应以及细胞内钙离子的变化、结果:稳定转染后,Ⅲ组细胞CD59分子的表达和Ⅳ组细胞CD55分子的表达被成功抑制。Ⅰ组和Ⅱ组细胞CD55与CD59联合作用后增殖能力和钙离子浓度均明显高于Ⅲ组、Ⅳ组(P<0.05),Ⅰ组和Ⅱ组之间无差异结论:CD59和CD55在T细胞活化信号转导通路中存在协同效应。
- 高美华聊菲
- 关键词：CD59CD55JURKAT细胞信号转导
- 氦氖激光照射胸腺区促进荷瘤小鼠T细胞的CD59表达与活化信号转导被引量：2
- 2009年
- 探讨低功率氦氖激光照射对荷瘤小鼠T细胞CD59表达及其功能的影响。将(BALB/C)小鼠分为4组:Ⅰ组不做处理;Ⅱ组仅致瘤;Ⅲ组致瘤后每日照射胸腺区;Ⅳ组致瘤后隔日照射胸腺区。致瘤后第20天处死小鼠,分离培养胸腺T细胞。采用噻唑蓝(MTT)比色法测T细胞增殖,用免疫组化和免疫荧光测T细胞CD59表达量,然后用酶联免疫吸附测定法(ELISA)测T细胞活化后白介素2(IL-2)水平,用激光共聚焦测T细胞胞浆内钙离子变化,以及用流式细胞术测T细胞活化为CD2+5T细胞的能力。结果表明,照射组肿瘤生长受抑;荷瘤组T细胞的CD59表达量、白介素2水平、增殖能力、钙离子浓度及活化的CD2+5T细胞水平均低于正常组,但照射组明显高于非照射组。由此可见,激光照射促进了荷瘤小鼠T细胞CD59的表达,增强了其活化信号的转导。
- 徐鹤高美华
- 关键词：医用光学免疫病理学氦氖激光照射CD59胸腺T细胞小鼠
- 利用噬菌体肽库筛选与人CD59特异性结合的短肽被引量：16
- 2006年
- 目的:筛选并鉴定与人CD59分子特异结合的短肽,为设计具有拮抗CD59肿瘤逃逸活性的短肽封条奠定基础。方法:以高表达人CD59的中国仓鼠卵巢细胞(CHO)为靶细胞,采用竞争结合试验,对噬菌体随机12肽库进行5轮亲和筛选。用ELISA筛选噬菌体阳性克隆并对其进行DNA序列分析。结果:随机挑选的16个克隆中,有8个与人CD59的结合力高。测序后,得到3个高度同源的氨基酸序列。DNAstar分析显示,3个序列均与已公布的(PubMed)人CD2的氨基酸序列有一定的同源性。结论:获得的序列H×A××××××P××为设计肿瘤逃逸相关的CD59活性位点的短肽封条提供了技术基础。
- 程颖高美华
- 关键词：肿瘤逃逸噬菌体肽库
- CD46 RNAi对CD59介导的T细胞信号转导的作用研究被引量：8
- 2012年
- 目的构建携带针对CD46基因的pSUPER retro RNAi逆转录病毒载体,研究糖基磷脂酰肌醇(GPI)锚定蛋白CD59与CD46在介导T细胞信号转导中的相关性。方法将能转录产生靶向CD46小发夹RNA(shRNA)的寡核苷酸序列,克隆入逆转录病毒载体pSUPER retro,转化大肠杆菌JM109并转染Jurkat细胞。将Jurkat细胞分为未转染的Jurkat细胞组(Ⅰ组)、转染空质粒的Jurkat细胞组(Ⅱ组)、转染CD59干扰质粒的Jurkat细胞组(Ⅲ组)及转染CD46干扰质粒的Jurkat细胞组(Ⅳ组)。用RT-PCR、Western blot技术检测各组细胞中的CD59、CD46基因的表达水平。用噻唑蓝(MTT)比色法检测CD46与CD59联合作用对4组Jurkat细胞的增殖效应。结果重组载体经PCR及限制性内切酶酶切鉴定初步成功后送测序,结果表明序列正确,构建成功,稳定转染后,Ⅳ组细胞CD46分子的表达被成功抑制,Ⅲ组细胞CD59分子的表达被抑制。Ⅰ组和Ⅱ组细胞CD46与CD59单抗联合作用后,增殖能力明显高于Ⅲ组、Ⅳ组(P<0.05);但Ⅰ组和Ⅱ组,Ⅲ组和Ⅳ组之间无差异。结论 CD59可增强CD46对T细胞信号转导的效应。
- 高美华王美娟张蓓解西河王冰
- 关键词：CD59CD46信号转导
