广西壮族自治区科技攻关计划(10100014-5)
- 作品数：10 被引量：61H指数：6
- 相关作者：谢志勤谢丽基庞耀珊谢芝勋邓显文更多>>
- 相关机构：广西大学广西兽医研究所更多>>
- 发文基金：广西壮族自治区科技攻关计划广西特聘专家专项经费资助项目国家百千万人才工程更多>>
- 相关领域：农业科学生物学更多>>
- 鸭坦布苏病毒与鸭圆环病毒二重RT-PCR方法的建立被引量：10
- 2014年
- 为了研究一种可同时检测鸭坦布苏病毒与鸭圆环病毒的二重PCR方法,试验采用DNASTAR及Primer Premier 5.0软件,针对Gen Bank中坦布苏病毒(DTMUV)E基因和鸭圆环病毒(Du CV)REP基因的保守序列,设计合成了2对引物,通过优化反应体系条件及特异性、敏感性评价,建立了鸭坦布苏病毒和鸭圆环病毒的二重RT-PCR方法。结果表明:该方法对鸭坦布苏病毒和鸭圆环病毒的检测敏感性达到100 fg;使用该方法对新城疫病毒、鸭瘟病毒、鸭肝炎病毒、番鸭细小病毒、番鸭呼肠孤病毒、H9亚型禽流感病毒和减蛋综合征病毒的检测结果全为阴性。说明建立的二重RT-PCR检测方法具有特异、敏感、快速、重复性好等优点,可用于鸭坦布苏病毒和鸭圆环病毒感染的快速鉴别诊断。
- 张艳芳谢芝勋谢丽基刘加波范晴庞耀珊邓显文谢志勤罗思思
- 关键词：鸭圆环病毒
- 4株广西鸭源坦布苏病毒分离及初步鉴定被引量：12
- 2013年
- 本实验经尿囊腔接种方式从SPF鸡胚和健康鸭胚分离到4株广西鸭源坦布苏病毒。采集4羽病鸭的卵泡膜和输卵管无菌处理后接种SPF鸡胚和健康鸭胚。收获24h后死亡的鸡胚和鸭胚的尿囊液。所分离到的病毒经传4代后，鸡胚和鸭胚的死亡时间集中在90～110h之间。根据GENBANK已有的坦布苏病毒序列设计一对特异性引物，结果收获的尿囊液RT-PCR产物能扩增出特异性片段，并且排除其他引起鸭产蛋下降的病毒。参照文献用另外一对引物扩增出坦布苏病毒的部分E基因序列，比对分析后，这4株鸭源坦布苏病毒之间的核苷酸相似性为99．2％～99．9％，与中国其他坦布苏病毒分离株的相似性介于95．8％-97．64％，与马来西亚分离株sitiawan株和MM1775株相似性介于86．4％～87．6％。绘制系统进化树发现，这4个分离株处于一个独立的小分支，说明广西的鸭源坦布苏病毒与中国其他地区的分离株存在一定的差异。
- 曾婷婷谢芝勋谢丽基刘加波范晴庞耀珊罗思思邓显文谢志勤
- 关键词：病毒分离E基因
- Ⅰ群禽腺病毒五邻体蛋白间接ELISA检测方法的建立被引量：10
- 2012年
- 为建立一种简便、快速检测Ⅰ群禽腺病毒(FAVI)抗体的间接ELISA方法,以表达和纯化的FAVI五邻体重组蛋白作为抗原,优化反应条件,建立了FAVI间接penton-ELISA抗体检测的方法。抗原最佳包被浓度为1.5μg/孔,最适包被条件为37℃,2h后4℃过夜;血清最佳稀释度为1∶100;酶标二抗的最佳工作浓度为1∶2000;ELISA阴、阳性临界值为0.335。用penton-ELISA方法检测100份鸡血清样品,阳性率为41%。
- 罗思思谢芝勋谢志勤刘加波庞耀珊邓显文谢丽基范晴
- 关键词：ELISA
- H9亚型禽流感病毒和鸭坦布苏病毒二重PCR检测方法的建立被引量：1
- 2014年
- 本试验旨在建立一种能同时快速检测H9亚型禽流感病毒(avian influenza virus,AIV)和鸭坦布苏病毒(duck Tembusu virus,DTMUV)的二重PCR检测方法。根据GenBank中H9亚型AIV的HA基因和DTMUV的NS2基因序列,分别设计了1对针对H9亚型AIV和DTMUV保守基因序列的引物。利用这2对引物对混有H9亚型AIV和DTMUV的cDNA模板进行二重PCR扩增,得到了2个大小与试验设计相符的特异性扩增条带。利用本试验建立的二重PCR对其他鸭病病原体进行PCR扩增,结果均为阴性。利用这2对引物对H9亚型AIV和DTMUV进行敏感性检测,结果显示最低检测极限分别为6.3和6.6pg。对临床235份样品检测的结果表明该二重PCR检测方法具有快速、敏感、特异等优点,适用于临床检测的应用。
- 赵虹谢芝勋谢丽基刘加波邓显文谢志勤庞耀珊范晴罗思思
- 关键词：H9亚型禽流感病毒二重PCR
- 新城疫病毒强弱毒株LAMP鉴别检测方法的建立被引量：8
- 2011年
- 根据新城疫病毒(NDV)融合基因(F基因)的8个区域设计能区分强、弱毒株的3套特异性引物,以样品的cDNA为模板,利用Bst DNA聚合酶,在62℃恒温下进行扩增,扩增产物中加入SYBR GreenⅠ染料直接或在紫外光下观察判定结果,建立了能鉴别检测NDV强、弱毒株的环介导等温扩增方法。该方法可区别不同基因型的NDV强、弱毒株,而对常见鸡源病毒均无扩增反应。该方法对NDV RNA的最小检测限为0.01pg,灵敏度是常规RT-PCR方法的100倍。该方法无需特殊仪器,只需在常规水浴锅中进行,是一种适于基层的简便、灵敏、快速的NDV强、弱毒株鉴别检测方法。
- 陈安莉谢芝勋周辰瑜刘加波庞耀珊邓显文谢志勤谢丽基
- 关键词：新城疫病毒强弱毒株
- 鸭坦布苏病毒和禽流感病毒多重PCR检测方法的建立被引量：6
- 2015年
- 本试验旨在建立一种同时快速检测鸭坦布苏病毒(DTMUV)和所有亚型禽流感病毒(AIV),且可同时进行H9亚型AIV分型检测的多重PCR检测方法。针对Gen Bank中DTMUV NS2基因、所有亚型AIV的M基因和H9亚型AIV的HA基因的保守序列,分别设计了3对特异性引物,建立了DTMUV和AIV多重PCR检测方法。该方法对混有H9亚型AIV和DTMUV的模板进行PCR扩增,得到了3个大小与试验设计相符的特异性扩增条带,对其他鸭病病原体进行PCR扩增,结果均为阴性。敏感性测定结果表明,该方法能检测到45 pg的DTMUV、7.6 pg的H9亚型AIV和76 pg的M基因。研究建立的多重PCR检测方法,具有快速、敏感、特异等优点,适用于临床检测的应用。
- 赵虹谢芝勋谢丽基谢志勤罗思思邓显文黄娇玲曾婷婷
- 关键词：H9亚型禽流感病毒
- 鸭源新城疫F基因和鸭圆环病毒Cap基因融合表达DNA疫苗的构建被引量：5
- 2014年
- 设计了2对特异性引物,PCR扩增出鸭源NDV分离株GX2011/19的F基因和DuCV的Cap基因,并将其克隆到真核表达载体pcDNA3.1,成功构建重组融合表达质粒pcDNA3.1-F-Cap。经酶切和测序鉴定正确后,将重组质粒pcDNA3.1-F-Cap转染Vero细胞,采用间接免疫荧光检测到目的基因的体外表达。将pcDNA3.1-F-Cap作为DNA疫苗对2周龄的SPF雏鸭以胸部肌肉多点注射的方式进行免疫。分3个实验组,每组接种剂量分别为100、200和300μg/只,另设2组为载体质粒空白组和灭活疫苗组。ELISA检测抗体水平,试验结果显示:各DNA疫苗免疫组的NDV抗体和DuCV抗体水平明显高于载体空白对照组,差异显著(P<0.05);二免后不同DNA剂量组间的抗体水平随着免疫剂量的增大而增加,差异显著(P<0.05);于第二次免疫后2周,使用分离株GX2011/19以滴鼻的方式进行攻毒试验。接种pcDNA3.1-F-Cap剂量为300μg/只免疫组的保护率为40%,高于200μg/只组(30%)和100μg/只组(10%)。研究结果表明,构建的DNA疫苗对新城疫病毒的强毒攻击具有一定的抵抗力,此疫苗的保护率随着免疫剂量的增大而有所增加。
- 许宗丽谢芝勋谢丽基刘加波邓显文谢志勤庞耀珊范晴罗思思
- 关键词：新城疫病毒鸭圆环病毒DNA疫苗免疫试验
- 一株鸭源基因Ⅸ型新城疫病毒广西分离株的生物学特性及全基因序列分析被引量：2
- 2013年
- 为全面了解广西分离株GX19/2011的生物学和遗传特性,对分离株的鸡胚平均致死时间(MDT)、1日龄鸡脑内接种致病指数(ICPI)、6周龄鸡胚静脉接种致病指数(IVPI)和对鸭的致病力进行测定,并对其全基因遗传特性进行研究研究。结果显示:该分离株的ELD50为10-9.48/0.1 mL、MDT为51.4h、ICPI为1.80、IVPI为2.82。使用该毒株分别感染35日龄和50日龄的鸭,发病率均为100%,死亡率分别为100%,70%。该毒株全长为15192bp,与F48E8和GD09-2等参考毒株的亲缘关系较近,均属于基因Ⅸ型。该分离株F蛋白裂解位点的氨基酸序列为112R-R-Q-R-R-F117,具有强毒株的典型特征。生物学特性和遗传进化分析结果都表明该毒株为速发型强毒株,同时对鸭具有较强的致病力。
- 许宗丽谢芝勋谢丽基刘加波邓显文谢志勤庞耀珊范晴罗思思
- 关键词：新城疫病毒生物学特性全基因
- 鸭Ⅰ型肝炎病毒RT-LAMP可视化检测方法的建立被引量：10
- 2012年
- 为建立一种快速检测鸭Ⅰ型肝炎病毒(DHV I)的方法,本研究根据基因库中DHV Ⅰ基因的保守序列,设计特异性环介导等温扩增(LAMP)引物,建立了DHV I的RT-LAMP可视化检测方法。该方法的敏感性可达10fg,高于常规PCR方法 100倍;全部反应可在1 h内完成;可以通过肉眼观察颜色直接判定结果;对其它鸭常见病原体的检测结果均为阴性。实验结果表明建立的RT-LAMP方法简便、快速、灵敏、特异,可用于DHV Ⅰ感染的快速检测。
- 谢丽基谢芝勋刘加波庞耀珊邓显文谢志勤范晴
- 关键词：环介导等温扩增
- 鸭坦布苏病毒与鸭瘟病毒二重RT-PCR检测方法的建立被引量：6
- 2014年
- 【目的】建立可同时检测鸭坦布苏病毒(Duck tembusu virus,DTMUV)与鸭瘟病毒(Duck plague virus,DPV)的二重RT-PCR,为有效防控DTMUV与DPV提供技术支撑。【方法】根据GenBank中DTMUV E基因和DPV UL6基因的保守序列,设计合成两对引物,优化反应体系条件,并通过特异性、敏感性试验评价建立的二重RT-PCR。【结果】优化后的二重RT-PCR反应体系为:2×PCR Mix 12.5μL,其中DTMUV上、下引物各0.5μL,DPV上、下引物各0.5μL,混合模板2.0μL,ddH2O补足至25.0μL;最佳反应程序:95℃预变性5 min;95℃1 min,54.4℃1 min,72℃1 min,进行35个循环;72℃延伸10 min。该方法对DTMUV与DPV的检测敏感性分别达500和600 fg,但对鸭源新城疫病毒、鸭肝炎病毒、番鸭细小病毒、鸭圆环病毒、H9亚型禽流感病毒和减蛋综合症病毒等病原体不敏感。【结论】建立的二重RT-PCR可用于DTMUV与DPV感染的快速鉴别诊断。
- 张艳芳谢芝勋谢丽基刘加波庞耀珊邓显文谢志勤范晴罗思思
- 关键词：鸭瘟病毒特异性敏感性
