教育部留学回国人员科研启动基金(98H025)
- 作品数：11 被引量：22H指数：4
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- 阴道毛滴虫AP65基因克隆与序列分析
- 2006年
- 目的对阴道毛滴虫黏附蛋白AP65基因的克隆与序列分析。方法提取阴道毛滴虫总RNA为模板,根据GenBank中发表的阴道毛滴虫黏附蛋白AP65序列设计一对引物,经RT-PCR得到与预计大小相一致的PCR特异性产物,将其克隆到pMD-18T载体后测序,并与GenBank中核苷酸序列进行同源性搜索与分析。结果目的基因片段长度为1704bp,其序列与阴道毛滴虫黏附蛋白AP65-3、阴道毛滴虫黏附蛋白AP65-2、阴道毛滴虫黏附蛋白AP65-1的同源性分别为97.2%、94.4%和86.7%。结论成功克隆出阴道毛滴虫AP65基因,与已发表的AP65-3序列的同源性最高,本研究为进一步研究阴道毛滴虫的致病机理,寻求更好的阴道毛滴虫病防治方法奠定基础。
- 赵月平张西臣陈丽凤李建华尹继刚刘全宫鹏涛
- 关键词：阴道毛滴虫克隆基因序列分析
- 阴道毛滴虫dsRNA病毒部分基因的克隆与序列分析被引量：3
- 2006年
- 提取阴道毛滴虫总核酸为模板,根据GenBank中发表的阴道毛滴虫病毒序列(U08999,NC003873,NC003824,NC003834)设计1对简并引物,经RT-PCR得到与预计大小一致的PCR特异性产物,将其进行克隆、测序,得到目的基因片段长度为1454bp,与阴道毛滴虫病毒T1株(U08999)的序列同源性最高为82.9%。
- 赵月平张西臣陈丽凤李建华尹继刚刘全宫鹏涛
- 关键词：阴道毛滴虫克隆
- 阴道毛滴虫病毒衣壳蛋白基因cap_(2037)的克隆与表达
- 2007年
- 目的对阴道毛滴虫病毒衣壳蛋白基因的克隆与原核表达。方法提取阴道毛滴虫总核酸为模板,根据所克隆的阴道毛滴虫病毒部分序列和GenBank中发表的阴道毛滴虫病毒TvV-T1序列设计一对引物,经RT-PCR得到与预计大小一致的PCR特异性产物,将其克隆到pMD-18T载体后测序,并与GenBank中核苷酸序列进行同源性搜索与分析,再将其克隆至表达载体pET28a。并以异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达。结果目的基因片段长度为2037bp,与阴道毛滴虫病毒T1株(U08999)的同源性最高为82.9%,构建原核表达载体pET-Cap2037;IPTG诱导后,SDS-PAGE显示表达产物的大小约75kDa。结论成功克隆出阴道毛滴虫病毒衣壳蛋白基因序列,与TVV-T1株序列有82.9%的同源性,经IPTG诱导,SDS-PAGE分析表明,75kDa蛋白基因在大肠杆菌BL21(DE3)中得到高效表达。
- 赵月平张西臣陈丽凤李建华尹继刚宫鹏涛
- 关键词：衣壳蛋白克隆原核表达
- 中国人源蓝氏贾第虫病毒基因组全长cDNA克隆及序列测定被引量：4
- 2003年
- 从中国人源蓝氏贾第虫北京株 ( BEIJ88/ BTMR1/ 1)体外纯培养的电镜负染和超薄切片观察到蓝氏贾第虫病毒粒子。该病毒位于感染早期贾第虫的细胞质中 ,感染晚期的细胞核中。根据国外发表的蓝氏贾第虫病毒序列设计了 6对互相重叠的引物。用这 6对引物对从中国人源蓝氏贾第虫北京株发现的蓝氏贾第虫病毒基因组进行 RT- PCR,将产物连接到 p MD18- T载体中并转化入 DH5 α感受态菌 ,送上海生工测序 ,通过 BL AST对 Gen- Bank进行同源性搜索。结果测得我国人源蓝氏贾第虫病毒基因组全长为 6 2 73bp,与国外报道的蓝氏贾第虫病毒序列同源性为 95 % ,编码的氨基酸同源性为 90 %。
- 田宗成张西臣李建华尹继刚杨举
- 关键词：蓝氏贾第虫
- 阴道毛滴虫携病毒株体外纯培养被引量：3
- 2007年
- 目的:培养一株携病毒的阴道毛滴虫细胞株.方法:临床收集虫株,培养于肝浸汤中,分别于培养的不同时期对虫体进行光镜和电镜下的形态观察,同时进行虫种的冻存和复苏实验.结果:阴道毛滴虫携病毒株在肝浸汤培养基中(pH=5.54)生长良好.结论:在体外成功地培养了携病毒的阴道毛滴虫.
- 赵月平吴淑琴张西臣
- 关键词：阴道毛滴虫体外
- 人源蓝氏贾第虫(Giardia lamblia)病毒部分基因的克隆及序列分析被引量：4
- 2002年
- 目的 从我国蓝氏贾第虫 (Giardialamblia)中寻找贾第虫病毒。方法 对人源贾第鞭毛虫北京株进行了体外纯培养 ,将其总核酸电泳 ,并用DNA酶和RNA酶处理。根据已发表的蓝氏贾第虫病毒基因序列合成一对引物并进行RT PCR ,将产物回收后连接到Pmd18 T载体上进行克隆并测序 ,通过BLAST对GenBank进行同源性搜索。结果 在贾第虫总核酸电泳图谱上观察到一个分子量约 7 0kb的片段。该核酸不能被DNA酶 (10 0 μg/ml)降解。但可被RNA酶 (10 μg/ml)降解。经RT PCR扩增后得到 1条预计 85 6bp的片段 ,所得序列与蓝氏贾第虫病毒基因同源性为 98%。结论 在我国人源贾第鞭毛虫北京株中发现贾第虫病毒 。
- 田宗成张西臣李建华尹继刚杨举
- 关键词：克隆
- 犬贾第虫纯培养的建立被引量：6
- 2005年
- 将取自一1岁自然感染犬贾第虫的雌性、德国牧羊犬的包囊利用蔗糖密度梯度离心-G1耐酸漏斗滤过法进行分离和纯化,经口感染给10日龄的沙鼠幼鼠,8 d后无菌取其小肠上段,分离出滋养体,转入改良TYS-I-33培养基中进行培养,在驯化5个月之后,虫体逐渐适应了培养环境,在管壁上形成了细胞单层并进行传代,每隔48～72 h传代1次,共传18代.将培养物置肉汤及血琼脂平板培养,未见细菌及霉菌污染,为纯培养.
- 赵永军张西臣刘全李建华尹继刚杨举吴涛
- 关键词：纯培养
- 人源蓝氏贾第虫病毒GLV1518-2322基因的表达及表达产物抗血清的制备被引量：1
- 2004年
- 根据中国人源蓝氏贾第虫病毒 (GLV)全基因组测序结果 ,将其全基因组cDNA上编码贾第虫病毒部分衣壳蛋白的GLV1 5 1 8 2 3 2 2基因克隆到原核表达载体pET 2 8c ( +)上 ,构建了原核表达重组质粒pET 2 8c( +) GLV1 5 1 8 2 3 2 2。SDS PAGE分析表明 ,经IPTG诱导 ,3 2kDa蛋白基因在大肠杆菌BL2 1 (DE3 )pLysS中得到高效表达。以纯化的表达产物为抗原 ,免疫BalB c小鼠 ,同时用病毒粒子免疫BalB c小鼠 ,制备了中国人源蓝氏贾第虫病毒GLV1 5 1 8 2 3 2 2蛋白特异性抗血清 ,ELISA方法测得的纯化蛋白最适抗原包被浓度为1 40 0和病毒粒子抗血清最佳工作浓度为 1 2 0 0。
- 田宗成张西臣李建华尹继刚杨举
- 关键词：蓝氏贾第虫蓝氏贾第虫基因组
- 阴道毛滴虫病毒RDRP基因的克隆与分析被引量：1
- 2008年
- 目的对阴道毛滴虫病毒RNA依赖的RNA聚合酶(RDRP)基因的克隆,以便探讨其功能。方法提取阴道毛滴虫总核酸为模板,根据所克隆的阴道毛滴虫病毒部分序列和GenBank中发表的阴道毛滴虫病毒TVV-T1序列设计一对引物,经RT-PCR得到与预计大小一致的PCR特异性产物,将其克隆到pMD-18T载体后测序,并与GenBank中核苷酸序列进行同源性搜索与分析。结果目的基因片段长度为2271bp,与阴道毛滴虫病毒T1株(U08999)的同源性最高为85.2%。结论国内首次成功克隆出阴道毛滴虫病毒RNA依赖的RNA聚合酶(RDRP)基因序列。
- 赵月平张西臣李建华尹继刚宫鹏涛
- 关键词：RDRP克隆
- 阴道毛滴虫dsRNA病毒的鉴定被引量：1
- 2009年
- 临床收集阴道毛滴虫(Trichomonas vaginalis)进行体外纯培养,通过总核酸电泳筛选携病毒株。分别用DNA酶和RNA酶处理携病毒株总核酸后电泳。电镜观察阴道毛滴虫及其病毒粒子。根据已发表的阴道毛滴虫病毒基因序列设计合成1对引物,进行RT-PCR,将其产物连接到pMD18-T载体,进行克隆并测序,通过BLAST在GenBank进行同源性搜索,并用DNAStar分子生物学软件进行分析。用放射自显影测定阴道毛滴虫病毒的RNA依赖的RNA聚合酶(RDRP)活性。结果显示,阴道毛滴虫病毒呈球形、二十面体、直径33 nm。病毒基因组约5.5 kb,病毒核酸不能被DNA酶(100 mg/L)降解,但可被RNA酶(1.0 mg/L)降解,病毒基因组有RDRP活性。经RT-PCR扩增后得到1条1 454 bp的片段,与预计大小基本相符,其序列与阴道毛滴虫病毒T1基因的同源性为82.9%。结果表明,在我国阴道毛滴虫长春分离株发现阴道毛滴虫病毒,该病毒属于dsRNA病毒。
- 赵月平张西臣陈丽凤李建华尹继刚刘全张国才宫鹏涛
- 关键词：阴道毛滴虫
