国家自然科学基金(81371384)
- 作品数：17 被引量：49H指数：5
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- 神经干细胞移植的方法选择及其在脊髓损伤中的应用
- 2016年
- 脊髓损伤是一种创伤性中枢神经系疾病,常伴有脊髓损伤平面以下感觉、运动、自主神经功能丧失,常导致患者终身残疾,且并发症较多,甚至死亡。至今尚无有效的治疗方法从根本上修复已损伤的脊髓功能。神经干细胞具有自我更新、增殖和多向分化等潜能,其移植后可向神经元分化并替代已坏死的神经元,形成新的突触,重建神经通路促进脊髓功能的修复,为脊髓损伤患者的康复带来曙光。近年来许多科学家对神经干细胞进行基因修饰,基因调控,或联合其他细胞、生物材料以及改变移植时间、途径等多方面进行深入研究,来提高移植效率,虽然取得了长足的进展,但仍存在一些不足之处尚待进一步完善,如神经干细胞移植的途径、时机、次数的相关标准,移植细胞的免疫排斥、长期存活、定向分化,神经干细胞的来源及伦理,移植的安全性等。本文拟对神经干细胞移植方法,移植时间,移植途径进行综述,并对神经干细胞移植所存在的问题及应用前景进行展望。
- 张永涛王春芳
- 关键词：脊髓损伤神经干细胞
- EGFP转基因小鼠建系及其脊髓源神经干细胞应用前景的探讨被引量：3
- 2015年
- 目的构建EGFP转基因小鼠及建系,并观察转基因小鼠的细胞及组织荧光发出状况。方法使用Gateway clone技术构建eEGFP载体,通过DNA显微注射法将构建好的EGFP载体注入受精卵内,转移至假孕母鼠内生出转基因小鼠。将转基因小鼠后代中的阳性小鼠互交,逐步淘汰杂合子小鼠。饲养过程测量小鼠的基本数据。培养转基因小鼠的脊髓源神经干细胞,并取部分常用组织石蜡切边,在荧光显微镜下观察。结果成功构建了EGFP转基因小鼠,并在屏障环境下饲养繁殖至7代。与野生型小鼠相比,EGFP转基因小鼠基本数据无明显差异。各常用组织切片在荧光显微镜下均可观察到绿色荧光,从脊髓中培养获得的神经干细胞也可观察到绿色荧光。结论 EGFP小鼠组织在常规处理后可观察到发出绿色荧光的细胞;小鼠脊髓源神经干细胞在体外培养3代仍可观察到绿色荧光,可利用这种自然标记的细胞研究神经干细胞在脊髓损伤修复中所产生的作用。
- 李宵王春芳李鹏飞王晶闫肖卿田峰
- 关键词：转基因小鼠EGFP细胞标记神经干细胞
- miR-31促进脊髓损伤后Nestin和NSE表达被引量：5
- 2015年
- 目的对脊髓损伤的miR-31转基因小鼠继发性损伤的恢复状况进行了解,进一步了解和探究miR-31在脊髓损伤修复中起到的促进作用。方法使用Impactor M-Ⅲ脊髓撞击器分别对FVB小鼠和miR-31转基因小鼠进行击打,成功建立小鼠脊髓损伤模型。术后于3d、7d、14d、21d进行BBB评分、H E染色、免疫荧光检测和荧光定量PCR检测。结果两组小鼠在制作脊髓损伤模型后,HE染色结果恢复趋势虽大体相同,但BBB评分显示在7d、14d,miR-31转基因小鼠的脊髓损伤恢复状况优于FVB小鼠。免疫荧光和PCR检测显示:Nestin在14d、21d两个时间点上miR-31转基因小鼠高于FVB小鼠;miR-31转基因小鼠NSE的表达量高于FVB小鼠。结论 miR-31在脊髓损伤后可能发挥着促进神经干细胞再生,改善脊髓损伤模型脊髓内微环境,促进脊髓损伤的恢复的作用。
- 田峰景志杰李鹏飞闫肖卿李宵王春芳
- 关键词：脊髓小鼠
- tdTomato转基因小鼠的建系及其在细胞示踪方面的应用研究
- 目的： 1.构建稳定表达的tandem-dimerTomato(tdTomato)转基因小鼠并建系，观察其全身多器官组织的荧光表达情况，检测其生理生化指标有无异常，确保其符合实验小鼠的标准;2.提取tdTomato转基...
- 王菲
- 关键词：动物实验细胞示踪细胞共培养
- 白藜芦醇通过G2期阻滞抑制结肠癌细胞的增殖被引量：5
- 2018年
- [目的]探讨白藜芦醇治疗结肠癌的作用机制。[方法]以10mg/ml浓度的白藜芦醇处理HCT116细胞,进行损伤愈合实验及克隆集落实验,检测白藜芦醇对结肠癌细胞株迁移及增殖能力的影响。使用Cytation5细胞成像微孔板检测仪动态检测HCT116细胞增殖情况。通过流式细胞术检测白藜芦醇对HCT116细胞凋亡以及对细胞周期的影响。运用Western Blot技术检测白藜芦醇处理后NF-κB蛋白的表达情况。[结果]给予白藜芦醇24h后HCT116细胞迁移能力减弱,增殖减少,凋亡增加,并且使细胞周期阻滞于G2期,蛋白NF-κB表达减少。[结论]白藜芦醇抑制HCT116细胞的迁移和增殖,并且促进凋亡及阻滞其周期于G2期,同时NF-κB蛋白表达降低,提示白藜芦醇上述抗癌效应与NF-κB通路密切相关。
- 王茜张钧栋刘鑫庞波吴亚俐李宇星贾文静彭菁王春芳崔香丽
- 关键词：白藜芦醇结肠癌NF-ΚB
- miR-31调控神经发育与神经干细胞增殖的机制研究及靶点筛选验证
- 目的： 本课题旨在通过小核酸分子体外转染神经干细胞，对miR-31转染神经干细胞后的表型进行鉴定，为miR-31调控神经发育的生物信息学分析奠定基础;并通过构建小鼠脊髓损伤模型，验证miR-31小核酸分子是否可对脊髓损...
- 李宵
- 关键词：脊髓损伤神经发育神经干细胞
- 转基因小鼠脊髓源神经干细胞移植于脊髓损伤模型后的成活、分化、迁移被引量：3
- 2017年
- 目的将从绿色荧光蛋白（GFP）转基因小鼠胚胎脊髓分离培养的神经干细胞（NSCs）移植到小鼠脊髓损伤模型损伤处，观察小鼠运动恢复和NSCs在脊髓内的存活、迁移和分化，探讨NSCs在临床治疗脊髓损伤的作用。方法采用简单随机化分组方法将小鼠随机分为空白组（n=10）、损伤组（n=30）、细胞移植组（n=30），制备损伤模型并在损伤处进行NSCs移植，于时间节点进行Basso-Beattie—Bresnahan（BBB）评分、斜板实验和免疫组织化学检测。结果击打后小鼠双后肢均瘫痪，BBB评分为0分，移植2周后评分开始出现差异，移植组提高到（4．50±1．04）分，损伤组为（2．17±0．75）分（P=0．023）；4周时移植组为（8．17±1．47）分，损伤组为（5．33±1．03）分（P=0．015）；6周时移植组为（10．8±1．47）分，损伤组为（8．33±0．81）分（P=0．017）；8周时差异最大，移植组为（15．50±1．37）分，损伤组为（11．17±1．16）分（P=0.016）。斜板实验中在1周时移植组为（17．17±3．18）°，损伤组为（14．83±3．06）°；2周时移植组为（23．33±d．27）°，损伤组为（18．17±2．40）°；4周后两组比较差异有统计学意义，移植组为（33．83±6．30）°，损伤组为（23．50±1．76）°（P=0．024），6周时较4周变化不大，移植组为（37．50±8．50）°，损伤组为（27．67±3．56）°（P=0．029），8周时显著提高，移植组为（46．83±6．05）°，损伤组为（36．33±7．23）°（P=0．019）。荧光检查结果显示移植的NSCs会在体内存活并迁移，部分保持未分化状态，少量分化为胶质细胞，向神经元分化较少。结论NSCs对脊髓损伤的恢复有促进作用，这种作用是通过移植细胞后形成一个有利于恢复的微环境，增加向神经元分化的比例来促进恢复。
- 王晶王春芳李宵李鹏飞田峰高渊涛
- 关键词：绿色荧光蛋白神经干细胞脊髓损伤细胞移植
- tdTomato转基因小鼠的建系及其在细胞示踪方面的应用研究被引量：3
- 2020年
- 目的构建稳定表达的tdTomato转基因小鼠并建系,观察其细胞及组织的荧光表达水平以及其干细胞共培养后的荧光表达水平。方法使用Gateway clone技术和DNA显微注射法构建含有tdTomato表达载体的受精卵,移植至假孕母鼠体内,待其自然生产。使用双向鉴定法鉴定并挑取饲养阳性小鼠并建系。另提取tdTomato阳性小鼠的神经干细胞分别与eGFP小鼠的骨髓间充质干细胞、原代神经干细胞共培养。结果成功构建了tdTomato转基因小鼠并建系,与野生型小鼠相比,tdTomato转基因小鼠生化指标和生长性状无明显差异,其组织切片及脑源神经干细胞均可观察到红色荧光。示踪实验表明注射部位可观察到明显的荧光成像,共培养实验可以清晰的观察到细胞分化后荧光的稳定表达。结论tdTomato转基因小鼠的组织和细胞能稳定表达红色荧光,可以利用荧光鼠的自发荧光特性,研究干细胞共培养后的分化方向。
- 王菲原一桐高渊涛田峰田野李宵李承罡杜若琛李鹏飞王雅丽王春芳
- 关键词：转基因小鼠细胞共培养
- 两种构建小鼠脊髓击打损伤模型仪器的比较和探讨被引量：5
- 2015年
- 目的通过比较两种构建小鼠脊髓击打损伤模型仪器各自的特点和优势,以期探索脊髓击打损伤模型建立的标准化。方法 40只小鼠随机分为两组,分别采用自制Allen脊髓打击器(A组,n=20)和Impactor M-Ⅲ脊髓撞击器(B组,n=20)进行击打,建立小鼠脊髓损伤模型。术后,于1d、3d、5d、7d、14d、21d六个时间节点,采用BBB运动功能评分对小鼠下肢恢复情况进行评估,记录数据。并在3d、7d、14d、21d四个时间节点取实验小鼠脊髓损伤处进行HE染色。结果两组脊髓损伤模型在1d、3d、5d、21d四个时间节点恢复情况无明显差异(P>0.05)。而在7d、14d,B组小鼠的脊髓损伤恢复状况明显优于A组,差异具有统计学意义(P<0.05)。在组织形态切片上差异不大。结论两种击打脊髓的实验仪器均可成功建立小鼠的脊髓损伤模型,采用Impactor M-Ⅲ脊髓撞击器构建的脊髓击打损伤模型小鼠恢复较自制Allen脊髓打击器更快速、稳定。
- 田峰王春芳李鹏飞李宵闫肖卿景志杰
- 关键词：脊髓小鼠
- miR-126促进脊髓损伤模型神经干细胞的生长增殖和分化被引量：4
- 2018年
- 观察脊髓损伤后miR-126对在体神经干细胞生长增殖和分化的促进作用。应用Allen法制作小鼠第10胸椎脊髓挫伤模型,在损伤后不同时期应用BMS评分对运动功能评估后,H-E染色、尼氏染色观察损伤部位组织病理学及尼氏体的变化。RT-PCR检测miR-126、nestin、HOXA9表达量,同时免疫印迹检测相应蛋白的表达。miR-126、nestin早期表达量下降,后期有所升高。HOXA9表达量则出现与其相反趋势。组织学检测早期损伤部位大量炎症细胞浸润及尼氏体丢失,后期损伤程度减轻,尼氏体逐渐增多。BMS评分随神经元的增多而有一定程度的增高。脊髓损伤后miR-126在促进神经干细胞生长增殖的同时,通过负向调节HOXA9表达提高神经干细胞向神经元的分化,从而促进小鼠运动功能修复。
- 张永涛高渊涛李宵付明阳田峰李鹏飞刘芳王春芳
- 关键词：脊髓损伤MIR-126神经干细胞神经元HOXA9
