国家自然科学基金(30860099)
- 作品数：16 被引量：48H指数：5
- 相关作者：何芳钟华胡清华王振焕邓峰美更多>>
- 相关机构：石河子大学华中科技大学教育部更多>>
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- 相关领域：医药卫生更多>>
- Filipin对人脐静脉内皮细胞小凹蛋白-1作用的研究被引量：1
- 2012年
- 为探讨filipin对人脐静脉内皮细胞(HUVECs)中小凹蛋白-1(Cav-1)的亚细胞定位影响,为进一步研究Cav-1作用机制提供理论依据。培养2～4代HUVECs随机分为:对照组;filipin处理组;采用Na_2CO_3蔗糖密度梯度离心法提取HUVECs中含caveolae的膜碎片,Western blot技术鉴定Caveolae和检测Cav-1蛋白表达。结果显示,与Control组比较,filipin处理组caveolae区Cav-1表达减弱(P<0.05)。由此可知,Cav-1富集于HUVECs的caveolae,filipin可抑制Cav-1在小凹的表达。
- 罗小林梁霄赵慧王静吴玲玲钟华何芳
- 关键词：小凹蛋白-1人脐静脉内皮细胞
- 小凹蛋白-1和钙受体在人的脐静脉内皮细胞的表达被引量：5
- 2010年
- 为探讨人脐静脉内皮细胞(HUVEC)中小凹蛋白-1与细胞外钙受体表达及定位,为进一步功能研究提供理论依据,采用Western-blot和Rt-PCR及免疫荧光技术检测HUVEC中小凹蛋白-1与细胞外钙受体mRNA和蛋白表达及定位。结果显示:(1)形态学观察和免疫细胞化学法测Ⅷ因子抗原,95%以上的细胞呈阳性着色,证实细胞为HUVEC。(2)RT-PCR检测到HUVEC中459bp和260bpmRNA表达,Western-blot测到HUVEC中22KD和150-160KD蛋白表达。(3)免疫荧光检测到小凹蛋白-1与细胞外钙受体定位于人脐静脉内皮细胞膜。由此可知,人的HUVEC中有小凹蛋白-1与细胞外钙受体表达,两者是否共定位及其功能有待进一步研究。
- 王振焕陈雄英胡清华钟华邓峰美何芳
- 关键词：小凹蛋白-1脐静脉内皮细胞
- 小凹蛋白-1和细胞外钙敏感受体在人脐静脉内皮细胞小凹共定位研究被引量：1
- 2011年
- 前期研究发现小凹蛋白-1(caveolin-1,Cav-1)和细胞外钙敏感受体(extracellular Ca2+-sensing receptor,CaR)在人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells,HUVECs)膜上有共定位,且Cav-1下调CaR介导的钙内流。本实验探讨HUVECs中Cav-1与CaR的亚细胞定位,可为进一步机制研究提供理论依据。以3~4代HU-VECs随机分为2组:(1)对照组;(2)甲基-β-环糊精(MβCD)处理组,分别采用蔗糖密度梯度离心和Western blot技术提取含小凹膜碎片和检测Cav-1和CaR蛋白的表达。结果显示,(1)MβCD处理组HUVECs细胞中Cav-1和CaR蛋白的表达与对照组相比无差异(P>0.05)。(2)MβCD处理组小凹区Cav-1和CaR蛋白的表达低于对照组(P<0.05)。由此可知,Cav-1和CaR蛋白共定位于HUVECs的小凹区,MβCD可抑制两者在小凹的共定位。
- 龚艳胡清华钟华梁霄罗小林何芳
- 关键词：小凹蛋白-1
- 脂筏在高血压发病机制中的作用被引量：2
- 2010年
- 原发性高血压的发病机制尚未完全明确,随着脂筏结构与功能的不断阐明,它与高血压之间的关系越来越密切。脂筏与细胞的许多重要功能有关,高血压的多种信号转导事件的发生是通过定位于脂筏及caveolae的细胞膜受体,所以脂筏在高血压的发生发展过程中起了重要的调控作用。与高血压发病机制相关的因素,如内皮型一氧化氮合成酶、细胞外钙受体、NADPH氧化酶、Rho激酶、胰岛素受体、Ca2+以及转化生长因子和丝裂原蛋白激酶信号转导通路等,这些蛋白和信号分子都定位于脂筏或者受脂筏调控,从而为脂筏与高血压发病机制之间的关系提供了更加充分的证据。本文将对各相关蛋白和信号转导与高血压的形成原因作一综述。
- 龚艳何芳
- 关键词：脂筏高血压发病机制CAVEOLAE
- 小干扰RNA沉默细胞外钙敏感受体抑制人脐静脉内皮细胞钙内流和NO生成被引量：13
- 2012年
- 为了探讨细胞外钙敏感受体(extracellular Ca^(2+)-sensing receptor, CaR)在人脐静脉内皮细胞(human umbilical veinendothelial cells, HUVEC)介导钙内流和NO生成中的作用,本实验针对GenBank中人CaR的cDNA序列设计合成小干扰RNA(small interference RNA, siRNA),并将其转染入HUVEC中,采用激光共聚焦显微镜观察细胞转染效果,Western blot检测CaR蛋白表达及转染后的干扰效率,Fura-2/AM负载检测细胞内Ca^(2+)浓度(intracellular Ca^(2+)concentration, [Ca^(2+)]i)变化,NO荧光探针DAF-FM DA负载检测细胞内NO的生成及内皮型一氧化氮合酶(endothelial nitric oxide synthase, eNOS)活性。结果显示,实验成功将CaR siRNA转入HUVEC,Western blot 检测结果显示转染48 h后,CaR蛋白表达降低(P < 0.05);与未转染对照组和阴性对照组相比,在精胺 + Ca^(2+)刺激下,CaR siRNA转染组的[Ca^(2+)]i、eNOS活性和NO含量均显著降低(P < 0.05)。上述结果表明,CaR在精胺介导的HUVEC Ca^(2+)内流和NO生成中发挥重要作用。
- 梁霄罗小林钟华胡清华何芳
- 关键词：内皮细胞钙敏感受体钙信号
- 小凹蛋白-1在脐静脉内皮细胞CaR介导NO生成中的作用和机制被引量：17
- 2011年
- 目的:探讨小凹蛋白-1(Cav-1)在人脐静脉内皮细胞(HUVECs)钙敏感受体(CaR)介导NO生成中的作用和机制。方法:利用转染技术将构建的Cav-1干扰质粒(Cav-1 shRNA)转染入HUVECs,随机分为:(1)对照组;(2)CaR激动剂(精胺)组;(3)精胺+Ca2+组;(4)CaR负性变构调节剂(Calhex231)+精胺组;(5)Calhex231+精胺+Ca2+组;(6)非律平(filipin)+精胺组;(7)filipin+精胺+Ca2+组;(8)空质粒(vehicle)+精胺+Ca2+组;(9)Cav-1 shRNA+精胺组;(10)Cav-1 shRNA+精胺+Ca2+组。Western blotting检测Cav-1 shRNA转染后HUVECs中CaR和Cav-1蛋白表达,通过NO荧光探针DAF-FM DA负载HUVECs检测细胞内NO的生成;并在提供充足底物的条件下检测细胞内皮型一氧化氮合酶(eNOS)活性。结果:Cav-1干扰后,Cav-1蛋白表达降低,同时CaR的膜蛋白表达降低(P<0.05),CaR的浆蛋白表达无变化(P>0.05)。无论细胞外为零钙液或含钙液时,精胺(2 mmol/L)刺激CaR时均引起eNOS活性和NO含量增加(P<0.05),其中细胞外液为含钙液时,eNOS活性和NO含量增加较细胞外为零钙液时更明显(P<0.05),Calhex231(1μmol/L)可阻断(细胞外为零钙液)或降低(细胞外液为含钙液)精胺介导的上述作用(均P<0.05);此作用亦可被filipin(1.5 mg/L)或Cav-1基因沉默减弱(细胞外液为含钙液)(均P<0.05)。结论:HUVECs中Cav-1对CaR介导的NO生成有促进作用,其机制可能与Cav-1影响CaR膜定位及对激动剂反应性有关。
- 王振焕胡清华钟华钟华陈雄英邓峰美何芳
- 关键词：小凹蛋白-1人脐静脉内皮细胞一氧化氮
- 小凹蛋白1上调人脐静脉内皮细胞钙敏感受体介导一氧化氮合酶激活的机制被引量：3
- 2013年
- 目的探讨小凹蛋白1(Cav-1)上调人脐静脉内皮细胞钙敏感受体介导内皮型一氧化氮合酶(eNOS)激活的作用机制。方法培养人脐静脉内皮细胞,取同代细胞随机分为:(1)对照组;(2)钙敏感受体激动剂精胺(2.0 mmol/L)+Ca2+组;(3)Caveolae结构破坏剂(Filipin,1.5 mg/L)+精胺+Ca2+组;(4)Cav-1 ShRNA+精胺+Ca2+组;(5)空质粒+精胺+Ca2+组;(6)Filipin不同浓度(1.5、2.0、2.5 mg/L)组。免疫印迹检测人脐静脉内皮细胞中eNOS和磷酸化eNOS(p-eNOS)、Cav-1以及eNOS膜蛋白表达;免疫荧光和免疫共沉淀技术检测Cav-1和eNOS表达、共定位以及相互作用。结果不同浓度Filipin不影响eNOS和p-eNOS蛋白表达(P>0.05);精胺作用下细胞内p-eNOS表达增加(P<0.05),此作用可被Filipin(1.5 mg/L)或Cav-1基因沉默完全阻断(P<0.05);Fili-pin(1.5 mg/L)或Cav-1干扰处理后,eNOS的膜蛋白表达减少(P<0.05),eNOS的蛋白表达无变化(P>0.05);免疫荧光双标显示Filipin(1.5 mg/L)或Cav-1基因沉默后eNOS在小凹定位减少,核周边局部区域聚集增多。与对照组和精胺+Ca2+组比较,Cav-1 ShRNA处理组Cav-1和eNOS相互作用减弱(P<0.05),其他处理组间的相互作用无统计学意义(P>0.05)。结论人脐静脉内皮细胞中Cav-1上调钙敏感受体介导eNOS激活作用机制可能与Cav-1影响eNOS质膜定位及抑制eNOS向细胞器转位有关。
- 罗小林钟华梁霄王振焕龚艳邓峰美孙志萍何芳
- 关键词：小凹蛋白1内皮型一氧化氮合酶钙敏感受体人脐静脉内皮细胞
- 细胞外钙受体及其在心血管系统中的作用被引量：2
- 2009年
- 细胞外钙受体也称为钙敏感受体(extracellular calcium sensing receptor,CaR),对调节机体细胞外钙的平衡发挥着重要作用。该受体不仅分布在甲状旁腺、骨、肾、肠这些与钙转移和钙稳态调节有关的器官,还广泛分布于许多其他与钙的稳定无关的组织细胞中,并通过PLC,PIK和MAPK等细胞内信号转导途经起着除钙稳态调节以外重要的细胞内作用,如保护细胞抗凋亡、细胞增殖等生物学作用,在心血管系统中,CaR也有重要的生理病理作用,本文综述了近些年关于CaR的结构、功能和信号转导及它在心血管系统中的作用。
- 王振焕何芳
- 关键词：心血管疾病信号转导
- 小凹蛋白-1下调人脐静脉内皮细胞外钙敏感受体介导的钙内流被引量：11
- 2011年
- 为了探讨小凹蛋白-1(caveolin-1,Cav-1)在人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells,HUVECs)细胞外钙敏感受体(extracellular Ca2+-sensing receptor,CaR)介导Ca2+内流中的作用,本实验研究了细胞膜穴样凹陷(caveolae)结构破坏剂Filipin或Cav-1基因沉默后对CaR介导Ca2+内流的影响。Fura-2/AM负载检测细胞内Ca2+浓度(intracellular Ca2+ concentration,[Ca2+]i)。结果显示,HUVECs中CaR对不同浓度细胞外Ca2+刺激无反应。无论细胞外为零钙液或含钙液时,精胺(Spermine,2mmol/L)刺激CaR时均引起[Ca2+]i升高(P<0.05),其中细胞外液为含钙液时,[Ca2+]i升高较细胞外为零钙液时更明显(P<0.05),CaR的负性变构调节剂Calhex231(1μmol/L)均可完全阻断Spermine刺激引起的[Ca2+]i升高(P<0.05);相反,Spermine升高[Ca2+]i作用可被Filipin(1.5μg/mL)或Cav-1基因沉默进一步加强(均P<0.05)。免疫荧光技术检测显示HUVECs中有CaR和Cav-1表达,两者共定位于膜上。Western blot检测结果显示Cav-1干扰后,Cav-1蛋白表达降低,同时CaR的膜蛋白表达也降低(P<0.05),CaR的总蛋白表达无变化(P>0.05)。上述结果表明:Cav-1和CaR共定位于HUVECs膜,Cav-1对CaR介导的Ca2+内流有下调作用,其机制可能与Cav-1影响CaR膜定位及减弱其对激动剂反应性有关。
- 王振焕胡清华钟华邓峰美何芳
- 关键词：小凹蛋白-1钙敏感受体钙信号
- 细胞外钙受体调节人脐静脉内皮细胞游离钙离子浓度的研究被引量：1
- 2010年
- 为探讨人脐静脉内皮细胞(HUVEC)游离钙离子浓度是否受细胞外钙受体(CaR)的调节。采用Westernblot及RT-PCR技术检测CaR在HUVEC中蛋白及mRNA表达。使用CaR激动剂精胺,负性变构调节剂Calhex231,通过钙荧光探针(Fura-2/AM)负载HUVEC检测细胞内钙离子浓度([Ca2+]i)。结果显示:(1)HUVEC中有CaR的表达。(2)在Fura-2/AM负载HUVEC中加入精胺刺激,[Ca2+]i为△ratio=0.24±0.01,先加入Calhex231作用1min后再加入Calhex231+精胺刺激,[Ca2+]i为△ratio=0,两组比较差异有统计学意义(P<0.05)。由此可知,CaR调节HUVEC游离钙离子浓度。
- 陈雄英王振焕胡清华钟华邓峰美何芳
- 关键词：细胞内钙离子浓度
