江苏省医学重点人才培养基金(RC2007034)
- 作品数：8 被引量：18H指数：3
- 相关作者：许文林陈巧云沈慧玲朱小兰龙璐璐更多>>
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- 雷公藤甲素对K562/A02细胞阿霉素敏感性的影响被引量：4
- 2012年
- 本研究旨在探讨雷公藤甲素(TPL)对K562/A02细胞阿霉素敏感性的影响。采用MTT法检测TPL细胞毒性和阿霉素药物敏感性;流式细胞术检测P-糖蛋白表达和细胞内阿霉素浓度;双荧光素酶报告基因系统检测MDR1启动子活性。结果表明:TPL增强K562/A02细胞阿霉素敏感性。TPL作用后,K562/A02细胞P-糖蛋白表达相关平均荧光强度(MFI)由123±13下降到39±13(P<0.05);K562/A02细胞内阿霉素相关MFI由18±5上升到34±6(P<0.05),TPL能够有效抑制K562/A02细胞的药物外排。TPL降低MDR1启动子转录活性约75%。结论:TPL通过下调P-糖蛋白表达增强K562/A02细胞对阿霉素的敏感性,其有可能成为一种耐药逆转剂。
- 惠璐璐许文林陈巧云朱小兰龙璐璐徐颖秦蓉
- 关键词：雷公藤甲素K562/A02细胞株阿霉素多药耐药
- YB-1蛋白对白血病细胞K562/A02生物学行为的影响
- 2011年
- 本研究探讨YB-1基因表达下调后对白血病细胞K562/A02生物学行为的影响及其机制。采用脂质体介导的方法将已构建的人YB-1基因特异性shRNA及随机片段HK的真核表达载体转染进白血病细胞K562/A02中,RT-PCR和免疫印迹反应检测YB-1 mRNA和蛋白表达量的改变;采用MTT法和细胞周期测定分析对白血病细胞增殖的影响;用AnnexinⅤ检测白血病细胞的凋亡程度;采用MTT法检测细胞IC50值变化;RT-PCR和流式细胞术检测基因转染前后细胞中的MDR1 mRNA和P-gp表达的变化。结果表明,阳性转染的3组细胞YB-1基因和蛋白的表达量明显低于随机片段组和未转染细胞;生长曲线提示阳性转染组细胞生长缓慢,细胞周期动力学分析显示阳性转染组G1期细胞增多,G2期与S期细胞显著减少;在小剂量As2O3作用下,阳性转染组细胞的凋亡数量明显高于对照组细胞;阳性转染细胞的阿霉素IC50明显低于随机片段组和阴性对照组;阳性转染细胞MDR1 mRNA水平明显降低,P-gp的峰值较对照组明显左移。结论:YB-1特异性shRNA能有效降低白血病细胞中YB-1的表达,减慢细胞生长,增加白血病细胞对化疗药物的敏感性,加速细胞凋亡。
- 沈慧玲周磊磊陈巧云陈琛方丽丽房新建许文林
- 关键词：YB-1蛋白白血病细胞细胞增殖细胞凋亡
- 汉防己甲素预防K562细胞获得性耐药机制的研究被引量：6
- 2011年
- 本研究从MDR1基因转录调控和细胞凋亡两方面探讨汉防己甲素(TTD)预防K562细胞阿霉素(ADM)诱导性多药耐药(MDR)产生的作用机制。本实验分3组,第1组为K562细胞空白对照组;第2组用ADM作用K562细胞24小时诱导细胞耐药;第3组采用TTD预处理K562细胞24小时后,再用ADM诱导耐药。采用RT-PCR检测各组细胞转录因子c-Jun、YB-1及Survivin的mRNA表达水平;Western blot法检测c-Jun、YB-1的核内蛋白表达水平;流式细胞术检测细胞的凋亡程度。结果表明,0.6μg/ml阿霉素作用后K562细胞MDR1基因转录上调;与空白对照组(第1组)相比,ADM诱导的耐药细胞组(第2组)c-Jun mRNA和蛋白表达减低(p均<0.05),YB-1 mRNA和蛋白表达明显上调(p均<0.05);Survivin mRNA表达无明显差异(p>0.05);细胞凋亡率(8.31%)比空白对照组(0.75%)稍有增加;TTD预处理后再用ADM诱导组(第3组)与ADM作用组相比,c-Jun mRNA和蛋白表达增加(p均<0.05);YB-1 mRNA和蛋白表达下调(p均<0.05);Survivin mRNA表达明显减少(p<0.05),细胞凋亡率(97.2%)明显增加。结论:TTD预防白血病细胞耐药形成的机制可能与其下调YB-1基因和蛋白的表达、上调c-Jun基因和蛋白的表达,从而下调MDR1基因表达有关,另外,TTD与ADM联合作用还能抑制Survivin的表达,增加白血病细胞的凋亡。
- 朱小兰许文林吕旭晶罗文娟周磊磊陈巧云
- 关键词：K562细胞汉防己甲素C-JUNYB-1
- RNA干扰YB-1表达对阿霉素诱导性耐药的K562细胞mdr1基因表达的影响
- 2011年
- 目的探讨Y-盒结合蛋白1（YB-1）对白血病细胞系K562细胞药物诱导性mdrl基因表达的调控作用。方法阿霉素间歇性长期作用于K562细胞，剂量逐渐增加，诱导细胞耐药。RT-PCR检测mdrl和YB-1基因表达，流式细胞术检测mdrl基因编码的P-糖蛋白（P-gP）表达，蛋白质印迹法检测YB-1蛋白核易位程度。通过RNA干扰技术使K562细胞中YB-1基因表达沉默，再用阿霉素处理YB-1基因沉默细胞，诱导细胞耐药，用RT-PCR、流式细胞术分别检测mdrlmRNA和P-gp的表达。结果经阿霉素作用后K562细胞mdrl基因转录上调，P—gP表达增加，同时YB-1基因转录也增强，且出现明显的核易位。YB-1基因沉默后，mdrl基因诱导性表达明显减少，阿霉素浓度为0．03、0．05μg／ml时 mdr1 mRNA表达水平分别较未行shRNA干扰组降低（53．7±0．1）％和（64．3±0．0）％，P-gP表达呈同样趋势。结论阿霉素诱导K562细胞耐药形成的过程中，YB-1对于mdr1基因的转录活化起一定的作用。
- 沈慧玲许文林陈巧云王法春费霞
- 关键词：转录调节
- 雷公藤甲素通过调节microRNA21的表达干预K562/A02细胞的化疗敏感性被引量：4
- 2012年
- 目的:研究雷公藤甲素对K562/A02细胞多药耐药性的逆转作用,并探讨其机制。方法:四甲基偶氮唑盐比色(MTT)法检测雷公藤甲素细胞毒性;采用非毒性浓度雷公藤甲素作用于K562/A02细胞,AnnexinV/PI双标法检测细胞凋亡;荧光定量PCR检测microRNA21表达水平;蛋白印迹法检测Bcl-2蛋白表达水平。microRNA21反义寡核苷酸转染K562/A02细胞,观察细胞增长率,凋亡率和Bcl-2表达的变化。结果:非毒性浓度(5 nmol/L)雷公藤甲素明显增强K562/A02细胞对多柔比星的敏感性,并能增强多柔比星诱导细胞凋亡的作用,使K562/A02细胞平均凋亡率由4.3%明显上升到18.5%(P<0.05);雷公藤甲素作用后,microRNA21和Bcl-2蛋白水平降低;microRNA21反义寡核苷酸转染K562/A02细胞后,降低了Bcl-2表达,提高多柔比星敏感性和多柔比星诱导的细胞凋亡。结论:雷公藤甲素增强K562/A02细胞对多柔比星的敏感性,并诱导其凋亡,可能与下调microRNA21水平有关。
- 惠璐璐许文林沈慧玲陈巧云朱小兰龙璐璐徐颖
- 关键词：雷公藤甲素多柔比星
- 白血病细胞YB-1基因功能的初步研究被引量：1
- 2009年
- 目的探讨YB-1基因对白血病K562／A02细胞株基因表达谱及细胞生物学行为的影响。方法采用脂质体介导的方法将已构建的人YB—1基因特异性短发卡RNA（short hairpin RNA，shRNA）及随机片段HK的真核表达载体转染入K562／A02细胞中。采用基因芯片技术比较阳性转染组与对照组细胞的基因表达的差异，逆转录一PCR验证部分基凶表达的改变。应用甲基氮唑蓝比色法和细胞周期测定分析对白血病细胞增殖的影响，AnnexinV检测白血病细胞的凋亡程度。结果阳性转染的3组细胞YB-1基因和蛋白的表达量明显低于随机片段组和未转染细胞；芯片中共有表达差异的基因252条，其中143条表达下调，109条表达上调，包括转录调节、蛋白翻译合成、细胞增殖、细胞凋亡、细胞的免疫调节、细胞信号和传递蛋白表达等基因。逆转录PCR证实CARD8基因表达上调，RHOC基因表达下调，和芯片检测结果一致。生长曲线提示阳性转染组细胞生长缓慢，细胞周期动力学分析示阳性转染组G1期细胞增多，G2期与S期细胞显著减少；在小剂量三氧化二砷作用下，阳性转染组细胞的凋亡数量明显高于对照组细胞。结论YB-1基因下调可引起白血病K562／A02细胞株基因表达谱的改变，这些基因的改变可能对白血病细胞增殖、细胞周期和凋亡等生物学行为产生一定的影响。
- 许文林周磊磊陈巧云陈琛方丽丽房新建沈慧玲
- 关键词：RNA干扰基因芯片凋亡
- 小发夹RNA对白血病K562细胞血管内皮生长因子受体Flt-1基因表达的抑制作用
- 2009年
- 本研究观察小发夹RNA对白血病细胞血管内皮生长因子受体flt-1基因表达的抑制作用并探讨其对白血病细胞侵袭能力的影响及作用机制。采用脂质体介导的方法将构建的人flt-1基因特异性shRNA真核表达载体转染入K562细胞,用G418抗性筛选获得阳性克隆;抽提基因组DNA,用PCR方法验证shRNA基因对K562细胞的转染;以RT-PCR和免疫印迹反应检测flt-1 mRNA和蛋白表达量的变化;用Boyden小室体外侵袭实验检测白血病细胞的侵袭能力;RT-PCR方法检测白血病细胞MMP-2和MMP-9的表达。结果表明,flt-1基因特异性shRNA真核表达载体转染入白血病细胞株K562,G418筛选2周获得阳性克隆;PCR检测证实shRNA基因整合入白血病细胞基因DNA;携有shRNA的flt-1基因能明显下调白血病细胞内flt-1基因mRNA表达水平;设计的2种不同flt-1 shRNA序列能不同程度干扰flt-1基因和蛋白在细胞中的表达,两组阳性细胞中flt-1基因表达抑制率分别为46.1%和65.4%;flt-1 shRNA转染白血病细胞系K562细胞后,MMP-2和MMP-9 mRNA表达水平均较转染前明显下降;阳性细胞穿透人工重组基底膜的能力(4.3±1.2)%较对照组(12.7±1.9)%及(9.6±1.7)%明显降低(p<0.01)。结论:VEGF受体flt-1特异性shRNA的真核表达载体能够高效转染入白血病细胞株K562,有效抑制flt-1基因的表达,并使白血病细胞体外侵袭能力减弱,MMP-2和MMP-9 mRNA表达水平下降。这提示VEGF可能通过与其受体结合调控MMP-2和MMP-9的方式,参与白血病细胞的转移。
- 沈慧玲许文林袁伟江云伟
- 关键词：白血病K562细胞血管内皮生长因子小发夹RNARNA干扰
- YB-1抑制三氧化二砷诱导的胃癌细胞自噬机制被引量：3
- 2012年
- 目的研究YB-1抑制三氧化二砷(As2O3)诱导人胃癌BGC-823细胞自噬的机制。方法采用脂质体转染siRNA干扰YB-1和腺病毒转染pAd1Easy/YB-1过表达YB-1;实时荧光定量PCR检测Bcl-2和Beclin1基因转录;Western blot检测YB-1、Bcl-2、Beclin1、P62和LC3Ⅱ蛋白的表达;MDC染色、荧光显微镜观察自噬泡。结果与空病毒(AdGFP)组相比,pAd1Easy/YB-1(AdYB-1)组Bcl-2基因表达增高,而干扰质粒(siYB-1)组Bcl-2基因表达水平较空质粒(HK)组降低(P均<0.05),各组Beclin1基因表达比较无统计学差异。与AdGFP和HK组相比,AdYB-1组Beclin1和LC3Ⅱ蛋白减少,Bcl-2和P62蛋白增加(P均<0.01),siYB-1组Beclin1和LC3Ⅱ蛋白增加,Bcl-2和P62蛋白减少(P均<0.01)。与AdGFP组相比,AdYB-1组自噬泡聚集减少,加入Bcl-2抑制剂HA14-1后自噬泡重新聚集,Beclin1蛋白恢复表达,P62降解增加,LC3Ⅱ升高。结论 YB-1可能通过上调Bcl-2、抑制Bec-lin1,实现对As2O3诱导的BGC-823细胞自噬的抑制。
- 龙璐璐许文林沈慧玲冷加燕
- 关键词：三氧化二砷自噬YB-1BCL-2BECLINL
