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北虫草中6种核苷类成分的含量测定与质量控制被引量：8: 2016年; 目的建立同时测定北虫草中尿苷、肌苷、鸟苷、腺苷、虫草素和N6-(2-羟乙基)腺苷含量的定量分析方法,建立北虫草中尿苷、腺苷、虫草素的定性分析方法,对北虫草进行质量控制研究。方法采用高效液相色谱法对北虫草中6种核苷类成分进行定量分析,Shiseido CAPCELL PAK MG C18色谱柱(4.6 mm×250 mm,5μm),以甲醇-水为流动相,梯度洗脱,检测波长260 nm,流速1.0 m L·min^(-1),柱温25℃。采用薄层色谱法对北虫草中3种核苷类成分进行定性分析,硅胶SGF_(254)薄层板,乙酸乙酯–丙酮–氨水体积分数为2.5∶6∶1.5作为展开剂,置于波长254 nm的紫外光灯下检视。结果尿苷、肌苷、鸟苷、腺苷、虫草素和N6-(2-羟乙基)腺苷的定量测定分别为1.223~156.66、3.914~125.25、1.959~125.38、1.223~156.66、1.225~156.75和3.906~125.00μg·m L^(-1),呈良好的线性关系,r≥0.999 6;平均加样回收率分别为98.31%、101.12%、100.72%、99.96%、100.29%和100.40%,RSD均小于3.0%,在20批北虫草样品的平均含量分别为0.043%、0.097%、0.022%、0.082%、0.986%和0.175%,不同来源北虫草样品中核苷类的含量差别较大。北虫草薄层色谱中尿苷、腺苷、虫草素的分离度良好,特征性强,可以用于北虫草的定性鉴别。结论以核苷类成分作为指标性成分所建立的定性定量分析方法简便,专属性强,重复性好,可实现对北虫草进行质量控制的目的。; 薛亚甫吴蕾蕾张倩唐亮崔星明徐红; 关键词：北虫草色谱法薄层色谱法高压液相

合成生物学使能技术的研究进展被引量：8: 2015年; 作为一门拥有巨大潜力的新兴工程学科,合成生物学的发展主要得益于各种使能技术(enabling technology)的创新开发与应用.从基本功能元件的构建与标准化,到高通量的微芯片基因合成技术与各种尺度(从bp至Mb)的DNA拼接组装方法,再到强大的基因组编辑工具,在过去十几年里合成生物学使能技术取得了长足的进步.同时,新颖的使能技术也为遗传学、癌症治疗、疾病监测以及生物制造等领域提供了优秀的研究工具,促进了多个学科的发展.如果将这些使能技术作为"配件工具",那么相对应的"主体设备"——底盘细胞也因工具的不断创新得到了快速发展.微生物最小基因组的分析以及对基因组的连续删简优化,为构建一个具有可预测、可控制表型的优良底盘细胞奠定了基础.为促进基于细胞疗法的人类疾病治疗,哺乳动物细胞作为底盘细胞也正在开发中.本文对合成生物学使能技术的最新发展进行了深入总结和梳理,探讨了这些使能技术在合成生物学乃至整个生命科学研究中的应用及其重要意义.; 李雷姜卫红覃重军薛小莉芦银华; 关键词：合成生物学基因合成

虫草素抑制帕金森病细胞凋亡的caspase激活途径研究被引量：9: 2017年; 目的研究虫草素抑制鱼藤酮诱导的PC12细胞凋亡的caspase激活途径。方法实验分为对照组、模型组、虫草素三个剂量组(0.4×10^(-6)、2.0×10^(-6)和8.0×10^(-6)μmol·L^(-1))。以1.0μmol·L^(-1)鱼藤酮制备PC12细胞帕金森病(parkinson's disease,PD)模型,MTT法测定细胞存活率,流式细胞技术检测细胞内ROS水平,Western blot法检测细胞内caspase-3、caspase-8、caspase-9、cleaved caspase-3、cleaved caspase-9和fas蛋白的表达。结果虫草素能显著升高鱼藤酮诱导的PC12细胞的存活率(P<0.05),降低细胞内活性氧(reactive oxygen species,ROS)的含量(P<0.01)。与对照组比较,模型组显著上调了caspase-3、caspase-8、caspase-9和fas蛋白的表达并促进了caspase-3和caspase-9的活化(P<0.01)。虫草素能明显减少后两者的激活,下调caspase-8和fas蛋白的表达(P<0.01)。结论虫草素可减少细胞氧化应激,通过内源性以及fas受体途径抑制caspase-3的激活而抑制细胞凋亡。; 姜新张鑫顾欣霞唐亮樊逸云余伯成葛晓群; 关键词：虫草素鱼藤酮活性氧凋亡半胱天冬酶

NOK/STYK1单克隆抗体的制备及应用被引量：1: 2014年; 根据NOK/STYK1(Novel Oncogene with Kinase Domain或Serine/Threonine and Tyrosine Receptor Protein Kinase)的结构特点设计并合成抗原,免疫Balb/C小鼠后,取免疫反应最好的小鼠脾脏细胞与骨髓瘤细胞SP2/0进行融合.应用有限稀释法筛选得到能稳定分泌抗NOK/STYK1的单克隆杂交瘤细胞株7G9.该细胞株经过扩大培养后,通过小鼠腹水制备纯化出NOK/STYK1的单克隆抗体.Western blotting和ELISA检测结果显示,纯化出的单克隆抗体能够特异性识别NOK/STYK1,且效价较高.通过免疫荧光标记和免疫组化分析显示,该单克隆抗体能够有效检测多种肿瘤细胞内及恶性肿瘤组织样本中高表达的NOK/STYK1.; 张国芳王银银常智杰; 关键词：酪氨酸蛋白激酶单克隆抗体肿瘤

虫草素对MPTP诱导的小鼠多巴胺能神经元损伤的保护作用及其机制被引量：8: 2018年; 目的观察虫草素(Cor)对MPTP诱导的帕金森病(PD)小鼠多巴胺(DA)能神经元的保护作用,并探讨其可能的机制。方法以MPTP制备PD小鼠模型,Cor(2.5、5.0、10.0 mg·kg^(-1))预处理灌胃给药。旷场、转棒和爬杆实验检测小鼠的运动能力;HPLC-ECD法、免疫组织化学法和TUNEL法分别检测DA含量、TH阳性细胞数和凋亡细胞;Western blot法检测凋亡相关蛋白和MAPK信号通路相关蛋白的表达。结果 Cor能明显改善PD小鼠的运动功能障碍,提高纹状体DA、DOPAC、HVA含量,减轻黑质TH免疫阳性神经元的丢失,并减少凋亡细胞数。另一方面,Cor可明显下调PD小鼠黑质中Bax和Cleaved caspase-3蛋白表达水平,增加Bcl-2蛋白表达及Bcl-2/Bax的比值。同时,Cor能明显下调黑质p-p38、p-ERK1/2、p-JNK1/2蛋白的表达。结论 Cor对MPTP诱导的PD小鼠DA能神经元具有保护作用,其机制可能是通过抑制MAPK信号通路的激活,抑制DA能神经元凋亡。; 樊逸云唐培宸顾欣霞张鑫孙莹余伯成张晓燕葛晓群; 关键词：虫草素 MPTP 多巴胺 MAPK

cDNA阵列分析法研究虫草素对胰腺癌BxPc-3和BxPc-3-LN细胞株部分肿瘤相关基因表达的影响被引量：2: 2015年; 目的从分子水平探讨虫草素对胰腺癌细胞株部分肿瘤相关基因表达的影响。方法利用多点c DNA阵列分析法对9个胰腺癌相关基因进行表达研究。结果与空白对照组相比用药(虫草素)组甲基化Cp G结合蛋白1(MBD1)、视网膜母细胞瘤1(RB1)基因、E2F转录因子5(E2F5)、胰岛素样生长因子1(IGF1)、转化生长因子BI(TGFBI)、转录因子2B(GTF2B)、上皮细胞钙黏蛋白(CDH)、视黄醇受体-β(RARB)和RAS癌基因家族成员之一(RAB1)表达均明显下降(P<0.05)。结论虫草素对胰腺癌细胞具有一定的生长抑制作用。; 余伯成龙江唐亮倪泉兴; 关键词：虫草素胰腺癌肿瘤相关基因

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国家高技术研究发展计划(2012AA021703)

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