浙江省自然科学基金(LY12C07002)
- 作品数:5 被引量:33H指数:3
- 相关作者:窦晓兵高佳杜仲燕于晨辉王伟茜更多>>
- 相关机构:浙江中医药大学更多>>
- 发文基金:浙江省自然科学基金国家自然科学基金浙江省医药卫生科学研究基金更多>>
- 相关领域:医药卫生更多>>
- 4-HNE通过抑制TNF-α介导的NF-κB活化诱导酒精性肝损伤被引量:17
- 2013年
- 目的:通过体外细胞及体内动物实验,研究肿瘤坏死因子α(TNF-α)诱导的4-羟基壬烯酸(4-HNE)致敏肝细胞发生死亡的作用及机制。方法:以人肝细胞株HepG2及小鼠原代肝细胞为细胞模型,通过乳酸脱氢酶(LDH)释放及MTT比色法检测4-HNE对TNF-α诱导的肝细胞死亡的作用,利用Western blotting技术检测细胞内4-HNE与蛋白质形成的加合物水平,通过Western blotting和ELISA技术检测细胞核内NF-κB(p65)的表达及其与DNA结合活性。以C57BL/6小鼠为动物模型,利用HE染色、ELISA、Western blotting及TUNEL等技术,检测长期摄入酒精前后动物肝组织形态、甘油三酯(TG)水平、4-HNE水平、TNF-α水平及血浆丙氨酸氨基转移酶(ALT)活性的变化。结果:(1)4-HNE可以显著增加HepG2细胞及小鼠原代肝细胞对TNF-α杀伤作用的敏感性,从而使TNF-α诱导4-HNE致敏的肝细胞死亡。(2)4-HNE可显著提高HepG2细胞内4-HNE-蛋白质加合物的水平。(3)4-HNE抑制HepG2细胞内TNF-α介导的NF-κB活化。(4)长期摄入酒精导致小鼠肝细胞内4-HNE和TNF-α水平升高,引起肝细胞内TG水平升高,血浆ALT活性升高,肝细胞死亡增多。结论:长期摄入酒精使肝细胞发生氧化应激,其产物4-HNE可作为一种肝细胞致敏因子,通过抑制肝细胞内TNF-α介导的NF-κB抗细胞凋亡信号通路,诱导酒精性肝损伤。这可能是一种新的酒精性肝病发病机制。
- 于晨辉杜仲燕高佳王伟茜窦晓兵
- 关键词:酒精性肝病核因子ΚB
- 芦丁通过调控TG代谢途径抑制肝细胞脂肪变性的作用机制研究被引量:7
- 2015年
- 目的通过体外建立油酸(Oleic acid,OA)诱导的脂肪变性肝细胞Hep G2模型探索芦丁预防脂肪聚积的分子机制。方法利用乳酸脱氢酶(LDH)释放评价芦丁对Hep G2细胞毒性的影响;用0.5 mmol/L OA诱导人肝细胞株Hep G2建立体外脂肪聚积细胞模型,并通过油红O染色观察和甘油三酯(TG)含量判定细胞模型是否建立成功;分别采用实时荧光定量PCR技术及Western Blot技术在转录水平及翻译水平检测相关蛋白的表达差异。结果芦丁和油酸不会导致Hep G2细胞中LDH激增,但油酸会造成细胞内TG聚积。而芦丁能有效抑制OA诱导的Hep G2细胞中TG的聚积,以及二脂酰甘油酰基转移酶(Diacylgycerola cyltransferase,DGAT)的转录(P<0.05),同时激活过氧化物酶体增殖物激活受体α(Peroxisome proliferator-activated receptor alpha,PPAR-α)的转录(P<0.05)及翻译(且与芦丁浓度计量相关),进而促进其靶基因肉毒碱棕榈酰转移酶(Carnitine palmitoyltransferase,CPT)的转录。结论芦丁能够激活脂肪变性肝细胞Hep G2中PPAR-α的转录和翻译,进而促进其靶基因CPT的转录,加剧了脂肪酸的降解代谢,与此同时对DGAT转录的抑制阻止了TG的合成。该结果进一步阐明了芦丁防治非酒精性脂肪性肝病的作用机制,为芦丁的临床使用提供了理论依据和实验基础。
- 潘然丁滨胡林峰张福利丁蕾方波谢璐帆窦晓兵
- 关键词:油酸肝细胞芦丁
- 4-羟基壬烯酸诱导酒精性肝病的分子机制被引量:2
- 2013年
- 目的 通过体内动物实验和体外细胞实验,探讨4-羟基壬烯酸(4-HNE)对肿瘤坏死因子(TNF)介导的肝细胞内核因子κB (NF-κ B)抗凋亡通路的抑制作用及其机制,进一步从细胞信号通路及蛋白质翻译后修饰水平揭示4-HNE促TNF介导酒精性肝病(ALD)的发病机制.方法 用Lieber-DeCarli小鼠模型、人肝癌细胞株HepG2和小鼠原代肝细胞,通过四甲基偶氮唑盐法、乳酸脱氢酶测定、Westem blot、免疫荧光染色等检测4-HNE对TNF介导的肝细胞损伤作用及4-HNE表达水平;通过酶联免疫吸附实验、实时荧光定量PCR检测肝细胞内NF-κ B的含量、其与DNA的结合活性及其所调控的抗凋亡基因的表达情况;用Western blot及免疫共沉淀技术检测NF-κB抑制蛋白(IκBα)及其激酶(IKK)的磷酸化以及4-HNE对IκBα、IKK的翻译后修饰水平.计量资料两个样本均数间比较用t检验,多个样本均数间比较用方差分析. 结果 (1)体内动物实验:模型组小鼠肝内甘油三酯水平(36.1±6.9) mg/g、血浆ALT水平(39.8±8.9) U/L和肝内TNF水平(650.8±28.9) pg/g明显高于对照组[分别为(13.6±3.2) mg/g、(18.3±4.1) U/L和TNF (320.2±14.1)pg/pg,差异有统计学意义,JP值均<0.01.与对照组相比,模型组小鼠4-HNE与蛋白质形成的加合物增多,肝细胞脂质变性、细胞凋亡增多,肝细胞核内NF-κ B(p65)与DNA的结合活性(0.13±0.01)也较对照组(0.17±0.03)明显下降(t=4.178,P<0.05),NF-κB(p65)蛋白表达水平降低,IκBα蛋白磷酸化水平降低,4-HNE-I κ B α加合物增多.(2)体外细胞实验:①在HepG2及小鼠原代肝细胞中,与TNF组相比,4-HNE/TNF组肝细胞增殖活性下降,随着4-HNE、TNF浓度的增加,增殖活性呈剂量依赖性降低,细胞凋亡增多,细胞释放的乳酸脱氢酶活性升高(F=7.262,P<0.05),4-HNE/TNF组明显诱导聚腺苷二磷酸核糖聚合酶蛋白剪切.②在HepG2细胞和小鼠�
- 杜仲燕高佳王伟茜于晨辉窦晓兵
- 关键词:肝疾病酒精性NF-ΚB肿瘤坏死因子Α
- MicroRNAs在非酒精性脂肪肝中的研究进展被引量:2
- 2016年
- 非酒精性脂肪性肝病(Non-alcoholic fatty liver disease, NAFLD )又称非酒精性脂肪肝,是肝脏内脂肪堆积过多,造成肝细胞脂肪变性的临床综合征。随着生活水平的提高,其发病率正在逐年增加,过去的数十年里,它已成为西方国家的主要肝病,严重威胁着人们的健康。当肝内的脂肪堆积超过5%,并同时伴有炎症称为非酒精性脂肪性肝炎(Nonalcoholic steatohepatitis, NAFH),它是 NAFLD 中最严重的组织学特征。肥胖是NAFLD 主要的相关因素。胰岛素抵抗(Insulin resistance, IR)是 NAFLD 发病机制的关键。本病多为无症状,可长期存在,或进展为肝硬化,甚至肝细胞癌[1-2]。近年来,中国的患病率也呈逐年增长趋势,约为6.3%~27.0%。全球范围内大约有10亿人患有不同程度的脂肪肝。 NAFLD已成为危害人类健康的重要肝病之一[3-6]。目前,还没有明确的药物可以治疗NAFH/NAFLD。因此,探索治疗其机制成为了重点的研究方向。
- 谢璐帆蔡艳阳计雷来朱星瑜窦晓兵
- 关键词:非酒精性脂肪肝MICRORNASNAFLD肝细胞脂肪变性INSULIN脂肪堆积
- 中医药在美国的生存概况分析被引量:5
- 2013年
- 文章从中医药在美国作为补充与替代医学的发展历程、当前美国的中医教育、中医执照考试、针灸立法及保险等方面,对中医药在美国的生存概况进行分析。目前中医药作为补充与替代医学在美国深受重视,针灸疗法被普遍接受及广泛应用,中药如属天然植物药,按"药"对待,大部分中草药作为食品添加剂得到广泛应用,科研机构积极支持中医中药科研活动,中医药在美国发展大有可为。
- 高佳杜仲燕李东成窦晓兵
- 关键词:中医药针灸补充与替代医学