浙江省自然科学基金(LY12C07002)
- 作品数：5 被引量：33H指数：3
- 相关作者：窦晓兵高佳杜仲燕于晨辉王伟茜更多>>
- 相关机构：浙江中医药大学更多>>
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- 相关领域：医药卫生更多>>
- 4-HNE通过抑制TNF-α介导的NF-κB活化诱导酒精性肝损伤被引量：17
- 2013年
- 目的:通过体外细胞及体内动物实验,研究肿瘤坏死因子α(TNF-α)诱导的4-羟基壬烯酸(4-HNE)致敏肝细胞发生死亡的作用及机制。方法:以人肝细胞株HepG2及小鼠原代肝细胞为细胞模型,通过乳酸脱氢酶(LDH)释放及MTT比色法检测4-HNE对TNF-α诱导的肝细胞死亡的作用,利用Western blotting技术检测细胞内4-HNE与蛋白质形成的加合物水平,通过Western blotting和ELISA技术检测细胞核内NF-κB(p65)的表达及其与DNA结合活性。以C57BL/6小鼠为动物模型,利用HE染色、ELISA、Western blotting及TUNEL等技术,检测长期摄入酒精前后动物肝组织形态、甘油三酯(TG)水平、4-HNE水平、TNF-α水平及血浆丙氨酸氨基转移酶(ALT)活性的变化。结果:(1)4-HNE可以显著增加HepG2细胞及小鼠原代肝细胞对TNF-α杀伤作用的敏感性,从而使TNF-α诱导4-HNE致敏的肝细胞死亡。(2)4-HNE可显著提高HepG2细胞内4-HNE-蛋白质加合物的水平。(3)4-HNE抑制HepG2细胞内TNF-α介导的NF-κB活化。(4)长期摄入酒精导致小鼠肝细胞内4-HNE和TNF-α水平升高,引起肝细胞内TG水平升高,血浆ALT活性升高,肝细胞死亡增多。结论:长期摄入酒精使肝细胞发生氧化应激,其产物4-HNE可作为一种肝细胞致敏因子,通过抑制肝细胞内TNF-α介导的NF-κB抗细胞凋亡信号通路,诱导酒精性肝损伤。这可能是一种新的酒精性肝病发病机制。
- 于晨辉杜仲燕高佳王伟茜窦晓兵
- 关键词：酒精性肝病核因子ΚB
- 芦丁通过调控TG代谢途径抑制肝细胞脂肪变性的作用机制研究被引量：7
- 2015年
- 目的通过体外建立油酸(Oleic acid,OA)诱导的脂肪变性肝细胞Hep G2模型探索芦丁预防脂肪聚积的分子机制。方法利用乳酸脱氢酶(LDH)释放评价芦丁对Hep G2细胞毒性的影响;用0.5 mmol/L OA诱导人肝细胞株Hep G2建立体外脂肪聚积细胞模型,并通过油红O染色观察和甘油三酯(TG)含量判定细胞模型是否建立成功;分别采用实时荧光定量PCR技术及Western Blot技术在转录水平及翻译水平检测相关蛋白的表达差异。结果芦丁和油酸不会导致Hep G2细胞中LDH激增,但油酸会造成细胞内TG聚积。而芦丁能有效抑制OA诱导的Hep G2细胞中TG的聚积,以及二脂酰甘油酰基转移酶(Diacylgycerola cyltransferase,DGAT)的转录(P<0.05),同时激活过氧化物酶体增殖物激活受体α(Peroxisome proliferator-activated receptor alpha,PPAR-α)的转录(P<0.05)及翻译(且与芦丁浓度计量相关),进而促进其靶基因肉毒碱棕榈酰转移酶(Carnitine palmitoyltransferase,CPT)的转录。结论芦丁能够激活脂肪变性肝细胞Hep G2中PPAR-α的转录和翻译,进而促进其靶基因CPT的转录,加剧了脂肪酸的降解代谢,与此同时对DGAT转录的抑制阻止了TG的合成。该结果进一步阐明了芦丁防治非酒精性脂肪性肝病的作用机制,为芦丁的临床使用提供了理论依据和实验基础。
- 潘然丁滨胡林峰张福利丁蕾方波谢璐帆窦晓兵
- 关键词：油酸肝细胞芦丁
- 4-羟基壬烯酸诱导酒精性肝病的分子机制被引量：2
- 2013年
- 目的 通过体内动物实验和体外细胞实验,探讨4-羟基壬烯酸（4-HNE）对肿瘤坏死因子（TNF）介导的肝细胞内核因子κB （NF-κ B）抗凋亡通路的抑制作用及其机制,进一步从细胞信号通路及蛋白质翻译后修饰水平揭示4-HNE促TNF介导酒精性肝病（ALD）的发病机制.方法 用Lieber-DeCarli小鼠模型、人肝癌细胞株HepG2和小鼠原代肝细胞,通过四甲基偶氮唑盐法、乳酸脱氢酶测定、Westem blot、免疫荧光染色等检测4-HNE对TNF介导的肝细胞损伤作用及4-HNE表达水平；通过酶联免疫吸附实验、实时荧光定量PCR检测肝细胞内NF-κ B的含量、其与DNA的结合活性及其所调控的抗凋亡基因的表达情况；用Western blot及免疫共沉淀技术检测NF-κB抑制蛋白（IκBα）及其激酶（IKK）的磷酸化以及4-HNE对IκBα、IKK的翻译后修饰水平.计量资料两个样本均数间比较用t检验,多个样本均数间比较用方差分析. 结果 （1）体内动物实验：模型组小鼠肝内甘油三酯水平（36.1±6.9） mg/g、血浆ALT水平（39.8±8.9） U/L和肝内TNF水平（650.8±28.9） pg/g明显高于对照组[分别为（13.6±3.2） mg/g、（18.3±4.1） U/L和TNF （320.2±14.1）pg/pg,差异有统计学意义,JP值均＜0.01.与对照组相比,模型组小鼠4-HNE与蛋白质形成的加合物增多,肝细胞脂质变性、细胞凋亡增多,肝细胞核内NF-κ B（p65）与DNA的结合活性（0.13±0.01）也较对照组（0.17±0.03）明显下降（t=4.178,P＜0.05）,NF-κB（p65）蛋白表达水平降低,IκBα蛋白磷酸化水平降低,4-HNE-I κ B α加合物增多.（2）体外细胞实验：①在HepG2及小鼠原代肝细胞中,与TNF组相比,4-HNE/TNF组肝细胞增殖活性下降,随着4-HNE、TNF浓度的增加,增殖活性呈剂量依赖性降低,细胞凋亡增多,细胞释放的乳酸脱氢酶活性升高（F=7.262,P＜0.05）,4-HNE/TNF组明显诱导聚腺苷二磷酸核糖聚合酶蛋白剪切.②在HepG2细胞和小鼠�
- 杜仲燕高佳王伟茜于晨辉窦晓兵
- 关键词：肝疾病酒精性NF-ΚB肿瘤坏死因子Α
- MicroRNAs在非酒精性脂肪肝中的研究进展被引量：2
- 2016年
- 非酒精性脂肪性肝病（Non－alcoholic fatty liver disease， NAFLD ）又称非酒精性脂肪肝，是肝脏内脂肪堆积过多，造成肝细胞脂肪变性的临床综合征。随着生活水平的提高，其发病率正在逐年增加，过去的数十年里，它已成为西方国家的主要肝病，严重威胁着人们的健康。当肝内的脂肪堆积超过5％，并同时伴有炎症称为非酒精性脂肪性肝炎（Nonalcoholic steatohepatitis， NAFH），它是 NAFLD 中最严重的组织学特征。肥胖是NAFLD 主要的相关因素。胰岛素抵抗（Insulin resistance， IR）是 NAFLD 发病机制的关键。本病多为无症状，可长期存在，或进展为肝硬化，甚至肝细胞癌［1－2］。近年来，中国的患病率也呈逐年增长趋势，约为6．3％～27．0％。全球范围内大约有10亿人患有不同程度的脂肪肝。 NAFLD已成为危害人类健康的重要肝病之一［3－6］。目前，还没有明确的药物可以治疗NAFH／NAFLD。因此，探索治疗其机制成为了重点的研究方向。
- 谢璐帆蔡艳阳计雷来朱星瑜窦晓兵
- 关键词：非酒精性脂肪肝MICRORNASNAFLD肝细胞脂肪变性INSULIN脂肪堆积
- 中医药在美国的生存概况分析被引量：5
- 2013年
- 文章从中医药在美国作为补充与替代医学的发展历程、当前美国的中医教育、中医执照考试、针灸立法及保险等方面,对中医药在美国的生存概况进行分析。目前中医药作为补充与替代医学在美国深受重视,针灸疗法被普遍接受及广泛应用,中药如属天然植物药,按"药"对待,大部分中草药作为食品添加剂得到广泛应用,科研机构积极支持中医中药科研活动,中医药在美国发展大有可为。
- 高佳杜仲燕李东成窦晓兵
- 关键词：中医药针灸补充与替代医学
