中央高校基本科研业务费专项资金(DL10CA03)
- 作品数：7 被引量：45H指数：3
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- 基因沉默在农业生产中的应用及其相关因子的研究进展
- 2011年
- 本文主要介绍了基因沉默在农业生产上的广泛应用,并对一些与基因沉默相关的因子如miRNA、阿格蛋白(Argo-naute protein)和PolIV进行了阐述。
- 佟玲侯杰崔国新许志茹李玉花
- 关键词：基因沉默MIRNA
- 芜菁花青素合成关键酶DFR基因启动子的克隆及功能分析被引量：2
- 2014年
- 在已经克隆的‘津田’芜菁和‘赤丸’芜菁二氢黄酮醇4–还原酶(DFR)基因的基础上,通过染色体步移法从两种芜菁基因组中克隆了BrDFR1和BrDFR2基因上游1 296和1 297 bp的启动子序列。生物信息学分析表明,启动子片段中包含TATA box、CAAT box、光调控元件、ABA应答元件、伤害应答元件、低温应答元件、防御与胁迫应答元件、MeJA应答元件等多个顺式作用元件。启动子BrDFR1P和BrDFR2P仅在15个核苷酸位点存在差异。将BrDFR1P和BrDFR2P分别连接到pCAMBIA1301植物表达载体上,构建Promoter::GUS载体,通过农杆菌介导遗传转化烟草。GUS组织化学染色检测表明,BrDFR1P和BrDFR2P均能驱动GUS基因表达。构建BrDFR1P和BrDFR2P的一系列缺失体,融合GUS基因后遗传转化烟草。染色结果表明,BrDFR1P和BrDFR2P缺失片段均具有相应的起始下游基因转录的活性特征。
- 许志茹马静崔国新李玉花
- 关键词：芜菁启动子
- 芜菁二氢黄酮醇4–还原酶基因的克隆与功能鉴定被引量：9
- 2014年
- 二氢黄酮醇4–还原酶(dihydroflavonol 4-reductase,DFR)是花青素生物合成晚期阶段的关键酶,属于NAD/NADP依赖型还原酶家族,催化从二氢黄酮醇转变成无色花色素苷的反应。利用UV-A处理‘津田’芜菁(‘Tsuda’turnip)和‘赤丸’芜菁(‘Yurugi Akamaru’turnip)块根24 h后提取总RNA,通过RT-PCR方法分别克隆了‘津田’芜菁BrDFR1和‘赤丸’芜菁BrDFR2基因。BrDFR1和BrDFR2的开放读码框分别为1 158 bp和999 bp,分别编码385和332个氨基酸。氨基酸序列分析显示,BrDFR1和BrDFR2与大白菜DFR具有高度同源性,从第8到第302位氨基酸的肽段具有FR_SDR_e结构域。BrDFR1和BrDFR2基因组全长序列均含有5个位置与序列完全相同的内含子。Southern杂交结果显示,‘津田’芜菁BrDFR1和‘赤丸’芜菁BrDFR2基因均为单一拷贝。UV-A可以诱导BrDFR1基因表达,对BrDFR2基因表达的诱导效果不明显。BrDFR1和BrDFR2基因在大肠杆菌细胞中可以表达并纯化出分子量约为42.8 kD的BrDFR1蛋白和37.5 kD的BrDFR2蛋白。过量表达BrDFR1和BrDFR2基因的烟草花色加深。芜菁DFR基因的RNAi载体遗传转化烟草后,转基因植株的花色变浅。这些工作将为阐明依光型和非依光型花青素生物合成机理奠定研究基础。
- 许志茹刘通崔国新李春雷马静李玉花
- 关键词：芜菁基因克隆
- 露地菊离体再生体系建立及BrDFR基因遗传转化被引量：4
- 2013年
- 以露地菊(Chrysanthemum morifolium)品种‘神韵’无菌苗叶片为外植体材料,研究植物生长调节剂配比对其愈伤组织诱导再生芽的影响,以建立离体再生体系。研究结果表明,露地菊‘神韵’在含NAA1.0mg·L-1+BA1.0mg·L-1的MS培养基上获得了最高的再生芽分化率。利用已经克隆的‘津田’芜菁BrDFR基因构建非抗生素筛选的表达载体。以露地菊‘神韵’的无菌苗叶片为受体,通过农杆菌介导进行BrDFR基因的遗传转化。以载体的PMI基因为筛选标记,通过甘露糖筛选获得了‘神韵’的遗传转化再生植株。经过PCR验证和Southern杂交检测证实BrDFR基因已经整合到‘神韵’基因组中。
- 许志茹陈智华姜艳东侯杰佟玲李玉花
- 关键词：分子检测
- 地被菊‘神韵’和‘繁星粉’DFR基因的克隆及表达特性被引量：1
- 2012年
- 目的:克隆地被菊‘神韵’和‘繁星粉’的二氢黄酮醇4-还原酶(DFR)基因,并研究其表达特性。方法 :利用RT-PCR方法克隆‘神韵’DgDFR1和‘繁星粉’DgDFR2基因,并进行生物信息学分析;通过Northern印迹检测DgDFR1和DgDFR2基因的表达特性。结果:DgDFR1和DgDFR2的开放读框分别为1125和1074 bp,分别编码由374和357个氨基酸残基构成的多肽,与菊花(Chrysanthemum×morifolium)DFR的同源性分别为99%和95%,9～330位肽段具有FR_SDR_e结构域和DFR结构域。DgDFR1和DgDFR2基因具有高度同源性,核苷酸序列在18个位点存在差异;推导的氨基酸序列的同源性为96%。Northern印迹表明,DgDFR1和DgDFR2基因在花中特异性表达。结论:克隆了‘神韵’和‘繁星粉’的DFR基因,为通过转基因技术控制地被菊花色、培育地被菊花色新品种奠定了实验基础。
- 许志茹侯杰佟玲崔国新
- 关键词：地被菊基因克隆
- 芜菁UF3GT基因的克隆及表达特性被引量：3
- 2012年
- 目的：克隆‘津田’芜菁和‘赤丸’芜菁的UDP-葡萄糖：类黄酮3-0-葡萄糖基转移酶（UF3GT）基因并研究其表达特性。方法：利用RT-PCR方法克隆‘津田’芜菁BrUF3GTl基因和‘赤丸’芜菁BrUF3GT2基因，并进行生物信息学分析；通过Northern杂交检测BrUF3GTl和BrUF3G死基因的UV-A诱导表达特性；对BrUF3GTl和研U乃G他基因进行原核诱导表达。结果：BrUF3GTl和BrUF3GT2的开放读框为1407bp，编码468个氨基酸残基；氨基酸序列分析显示，BrUF3GTl和BrUF3GT2与拟南芥UF3GT的同源性为87％，从第16～453位氨基酸残基的肽段具有糖基转移酶家族成员的结构域；所UF3G丌和BrUF3GT2基因具有高度同源性，核苷酸序列在7个位点存在差异，推导的氨基酸序列在1个位点存在差异；Northern杂交结果显示，UV-A可以诱导西＂3G＂和BrUF3GT2基因表达，基因的表达量与处理时间相关；原核诱导表达及纯化后可以获得相对分子质量分别约为51．88×10。和51．89~10。的BrUF3GTl和BrUF3GT2蛋白。结论：克隆了‘津田’芜菁和‘赤丸’芜菁的叩3Gr基因，为初步阐明2种芜菁的花青素生物合成机理奠定了实验基础。
- 许志茹佟玲侯杰崔国新
- 关键词：芜菁基因克隆基因表达
- 植物类黄酮3’-羟化酶(F3’H)基因的研究进展被引量：26
- 2011年
- 本文介绍了植物F3’H基因的克隆、序列分析、表达分析、系统进化及转录调控的研究进展。
- 侯杰佟玲崔国新许志茹李玉花
- 关键词：花青素转录调控
