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山东省自主创新成果转化重大专项项目(2010ZHZX1A0417): 作品数：11 被引量：49H指数：4; 相关作者：王金宝吴家强李俊杜以军孙文博更多>>; 相关机构：山东省畜禽疫病防治与繁育重点实验室山东省农业科学院青岛农业大学更多>>; 发文基金：山东省自主创新成果转化重大专项项目山东省优秀中青年科学家科研奖励基金山东省农业重大应用技术创新课题更多>>; 相关领域：农业科学生物学更多>>

高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒Nsp1蛋白锌指结构1(ZF1)突变体的构建及活性鉴定: 2013年; 本试验旨在构建高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒(HP-PRRSV)SX-1株非结构蛋白Nsp1的真核表达质粒,并对Nsp1蛋白锌指结构1(ZF1)进行定点突变,检测其在真核细胞中的表达活性。利用TRIzol法提取总RNA,RT-PCR扩增Nsp1目的基因,经双酶切构建pCI-neo-Nsp1真核表达质粒后对Nsp1蛋白锌指结构1的8C、10C、25C和28C的4个位点进行定点突变,成功获得分别突变为A和S的8个突变体。转染HeLa细胞,通过间接免疫荧光方法(IFA)和Western blotting检测Nsp1蛋白的活性。IFA结果显示,Flag抗体检测时蛋白质主要分布在细胞质和细胞核中,Myc抗体检测时蛋白质主要分布在细胞核中。Western blotting结果显示,Flag抗体检测时,S突变体出现大小约为44和20ku条带,A突变体出现约为44ku条带;Myc抗体检测时,S突变体出现大小约为44和27ku条带,A突变体出现大小约为44ku条带。试验结果表明,本试验成功构建了Nsp1突变体的真核表达质粒,证实其能在真核细胞中表达,为进一步研究Nsp1蛋白的锌指结构是否对机体Ⅰ型IFN产生起下调作用提供基础。; 赵鹏伟吴家强杜以军李俊孙文博丛晓燕时建立彭军于江刘月月王金宝; 关键词：活性鉴定

环二鸟苷酸(c-di-GMP)作为潜在免疫佐剂的研究进展: 环二鸟苷酸(cyclic diguanylate,c-di-GMP)是在细菌中普遍存在的第二信使分子,参与调节多种生理功能,近年来研究发现环二鸟苷酸作为免疫调节剂作用于真核细胞可产生很好的免疫调节作用,一系列的体内、体外...; 丛晓燕孙文博时建立于江赵鹏伟李俊杜以军吴家强陈蕾陈智王金宝; 关键词：疫苗佐剂免疫; 文献传递

猪繁殖与呼吸综合征病毒LAMP检测方法的建立被引量：3: 2011年; 研究针对美洲型猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)保守的N蛋白基因设计了4条LAMP的检测引物,通过优化反应条件,建立了一种检测PRRSV的LAMP诊断方法。特异性和敏感性试验结果显示,该方法能够特异地检测美洲型PRRSV,其最低检测限为1×101个拷贝,而常规PCR的最低检出限为1×105个拷贝。判定检测结果时不需要借助昂贵仪器设备,仅需加入1μL橙红色核酸染料就可以进行判断,颜色变绿判定为阳性,仍保持为橙红色判定为阴性。LAMP可以快速、直观、准确地检测PRRSV,是一种适合猪场现地应用的检测方法。; 尹斐斐吴家强刘少宁李坤杜以军孙文博丛晓燕王可张玉玉时建立李俊周顺王金宝; 关键词：猪繁殖与呼吸综合征病毒 LAMP

猪流行性腹泻病毒培养的工艺参数优化试验: 2016年; 为了提高猪流行性腹泻病毒的病毒滴度,建立最优的病毒培养条件,对影响病毒培养的细胞培养时间、接毒剂量、收毒时间等条件进行了研究。结果表明:细胞培养时间为主要因素,对于流行性腹泻病毒毒价影响较为显著,细胞培养72 h接毒平均毒价为107.44TCID50/0.1 m L,均高于其他两组;而收毒时间则为次要因素,平均毒价为107.21TCID50/0.1m L;接毒剂量影响不显著,平均毒价为107.08TCID50/0.1 m L,本试验最佳工艺组合为细胞培养72 h接毒、接毒剂量为0.1%、收毒时病变程度为60%。; 陈申秒牛成明翟庆贺何福庆杨灵芝; 关键词：猪流行性腹泻病毒细胞培养佐剂

猪传染性胃肠炎病毒S基因实时荧光定量RT-PCR检测方法的建立及初步应用被引量：5: 2014年; 据猪传染性胃肠炎病毒(transmissible gastroenteritis virus of swine,TGEV)S基因序列设计1对特异性引物,通过对实时荧光定量RT-PCR反应条件的优化,建立了SYBR GreenⅠ实时荧光定量RT-PCR检测TGEV的方法,同时对12份病料进行检测,并与常规RT-PCR进行比较。结果显示,该方法的敏感性达到43.07拷贝/μL,具有良好的特异性和重复性,而常规RT-PCR最低只检测到4.307×103拷贝/μL,敏感性较低。本试验建立的检测TGEVS基因的SYBR GreenⅠ实时荧光定量RT-PCR方法为传染性胃肠炎的鉴别诊断及TGEV的分离鉴定奠定了技术基础。; 王建中; 关键词：猪流行性腹泻病毒 S基因 SYBR 实时荧光定量RT-PCR

副猪嗜血杆菌血清5型分离株生长曲线与致病力研究被引量：5: 2011年; 本文对副猪嗜血杆菌血清5型生长曲线进行了研究。结果表明:种子液接种后6 h开始进入对数生长期,培养24 h后活菌数达到最高峰,20～30 h活菌数维持在同一个水平,进入稳定期,30 h后活菌数呈现下降趋势,进入衰退期。该曲线提供了副猪嗜血杆菌生长规律,为疫苗研制提供了理论基础。; 王大鹏吴家强于江丛晓燕杜以军孙文博张玉玉时建立李俊周顺王金宝; 关键词：副猪嗜血杆菌致病力

PRRS流行毒株与减毒活疫苗TJM-F92株qPCR区分方法的建立与应用被引量：3: 2013年; 为快速准确区分PRRS流行毒株与减毒活疫苗TJM-F92株以及对流行毒株进行定量检测,按GenBank中发表的美洲型PRRSV SX-1分离株、弱毒疫苗株NSP2基因缺失部位的不同设计了一对特异性引物,通过RT-PCR和体外转录的方法,构建了体外转录RNA作为标准品,并对反应条件和反应体系进行优化,旨在建立一种敏感性高、特异性强、重复性和稳定性良好的qPCR鉴别方法。结果表明,该方法最低能检测出1.0×101拷贝/μL的模板,敏感性比常规PCR高100倍;应用该方法对218份临床样本进行鉴别与定量,qPCR检出率较常规RT-PCR高12.9个百分点。研究表明,qPCR鉴别方法的建立实现了对PRRS流行毒株与疫苗毒株的快速区分以及对流行毒株的定量检测,为PRRS的快速诊断提供了依据。; 刘月月陶海英杜以军王兴东于江赵鹏伟刘思当王金宝吴家强; 关键词：猪繁殖与呼吸综合征体外转录 NSP2基因

山东某猪场猪繁殖与呼吸综合症病毒感染的分离与鉴定: 2012年; 本试验利用ELISA检测、PT-PCR方法从某疑似猪繁殖与呼吸综合征病毒(Porcine Reproductive and Respiratory Syn-drome Virus,PR R SV)感染猪场分离到一株PR R SV,在marc-145细胞盲传第3代可见典型细胞病变,将细胞培养物接种断奶仔猪可引起典型的呼吸困难,发烧等症状,从而确诊该猪场PRRSV的感染。; 陈申秒何福庆吴雪莉蔡培军贾红梅杨灵芝; 关键词：PRRS PCR检测细胞病变

仔猪多发性关节炎病原菌的分离鉴定及耐药性研究被引量：6: 2012年; 从山东地区32个猪场发生多发性关节炎的仔猪体内分离到15株病原菌。通过对分离菌株的形态染色、分离培养、生化试验及种特异性基因的PCR扩增等方法鉴定菌株,结果显示4株分离菌株为副猪嗜血杆菌,7株为猪链球菌,2株为化脓隐秘杆菌,1株为猪胸膜肺炎放线杆菌,1株为猪丹毒杆菌。15株分离菌均对昆明小鼠有较强的致病力,且对先锋霉素类抗生素高度敏感,大多数菌株还对青霉素类、头孢菌素Ⅲ类、氟喹诺酮类、万古霉素、壮观霉素等抗生素高度敏感。该试验表明山东地区猪场仔猪多发性关节炎的病原菌主要是副猪嗜血杆菌和猪链球菌,可交替使用上述敏感抗生素防治该病。; 张玉玉吴家强任素芳郭立辉王大鹏尹斐斐范凤玉李俊周顺王金宝; 关键词：副猪嗜血杆菌猪链球菌药敏试验

东营地区NDV和IBV分离株遗传分析: 2014年; 对东营地区规模化肉鸡养殖场近两年送检的病死鸡进行分子检测,确定NDV和IBV的发生率很高,针对具有典型特征的NDV和IBV分离株分别进行了F基因和S1基因的测定和分析,确定为肾型传支和基因7型新城疫,通过与流行毒株和疫苗毒株的分析为以后该地区的防疫提供帮助。; 陈申秒郭显坡何福庆吴雪莉马景霞; 关键词：NDV IBV 进化分析

山东省自主创新成果转化重大专项项目(2010ZHZX1A0417)

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