云南省科技计划项目(2011FZ108)
- 作品数：2 被引量：0H指数：0
- 相关作者：黄尤光秦钰谢薇肖尤川杨之斌更多>>
- 相关机构：昆明医科大学云南省曲靖市第一人民医院更多>>
- 发文基金：云南省科技计划项目云南省卫生科技计划项目国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 重组表达hTFF2促进结肠癌细胞迁移和失巢增殖作用
- 2013年
- 目的通过构建大肠杆菌表达系统获得重组人三叶因子2(hTFF2),并研究其对结肠癌细胞SW480的迁移活性和失巢增殖活性作用.方法通过RT-PCR获得hTFF2的cDNA,构建重组载体pET32a-hTFF2,转化大肠杆菌BL21-32a中诱导表达TrxA-hTFF2融合蛋白.产物经镍-亲和层析分离、透析纯化和Western-blot鉴定后,用48孔趋化小室和琼脂软胶法检测重组hTFF2的细胞迁移活性和失巢增殖作用.结果通过原核表达系统,获得高纯度的表达量达到220 mg/L的TrxA-hTFF2重组融合蛋白,重组hTFF2可促进结肠癌细胞SW480的迁移活性和在琼脂软胶中生长形成克隆.结论大肠杆菌可表达高产量和纯度的重组hTFF2,其细胞活性提示结肠癌中TFF2的表达可能促进结肠癌细胞浸润和转移.
- 蒋伟国罗方梅王皓颖谢薇秦钰黄尤光
- 关键词：三叶因子2结肠癌细胞迁移
- 抗失巢凋亡结肠癌细胞株的建立及其生物学特性分析
- 2016年
- 目的 :建立抵抗失巢凋亡的结肠癌细胞系,并分析其细胞生物学特性。方法 :通过贴壁-悬浮交替培养的方法筛选出抗失巢凋亡的结肠癌SW480细胞(命名为SW480-R),采用FCM法鉴定失巢条件下细胞凋亡的改变,然后应用MTT法、细胞划痕愈合实验和Transwell小室法分别检测细胞增殖、迁移和侵袭能力的变化,最后应用蛋白质印迹法检测上皮-间质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)标志物的表达水平。结果 :经过5次悬浮-贴壁培养后,建立抗失巢凋亡细胞株SW480-R。悬浮培养48和72 h后,SW480-R细胞的凋亡率均明显低于SW480细胞(P<0.05,P<0.01)。贴壁培养12、24和48 h后,SW480-R细胞的增殖活性均低于SW480细胞(P值均<0.05)。SW480-R细胞的迁移和侵袭能力均明显高于SW480细胞(P值均<0.05)。SW480-R细胞中上皮细胞标志物E-cadherin表达下调,间质细胞标志物vimentin表达水平上调(P值均<0.05)。结论 :成功建立了抗失巢凋亡细胞株SW480-R。与亲本细胞SW480相比,SW480-R细胞的增殖速度减慢,而侵袭和迁移能力增强,其机制可能与EMT调控有关。
- 杨之斌张洪涛李强肖尤川李云峰程先硕黄尤光
- 关键词：结肠肿瘤失巢凋亡上皮-间质转化
