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猪骨髓间充质干细胞分离培养及生物学特性被引量：4: 2013年; 采集健康猪股骨骨髓,利用percoll梯度离心法分离单个核细胞,进行体外原代和传代培养,并用不同代数细胞进行了细胞生长能力、膜表面抗原(CD105、CD90、CD45)及诱导分化能力的检测。结果显示分离培养的单个核细胞贴壁生长,形态呈成纤维细胞样及涡旋状克隆团;细胞传代至第17代生长状况仍然良好;用F 3代细胞进行膜表面抗原标记显示,CD90和CD105阳性表达率分别为(97.4±1.8)%和(99.6±0.9)%,而CD45阳性表达率仅为(1.8±0.55)%,证实这些细胞具有猪骨髓间充质干细胞(Mesenchymal stem Cells,MSCs)表面抗原;经地塞米松、维生素C和β-磷酸甘油等诱导F 3代细胞,21d后出现钙物质沉积细胞群,用茜素红和Von kossa染色呈阳性,证实这些细胞已分化形成成骨细胞;经地塞米松、IBMX、胰岛素及吲哚美辛等诱导F 3代细胞,21d后细胞质出现脂滴样结构,用油红O染色呈阳性,证实已分化形成成脂细胞;冷冻-解冻细胞的膜表面抗原及多能分化能力与未冻存细胞的检测结果基本一致。结果证实,从猪骨髓中分离培养及经传代扩增获得的贴壁细胞是纯化的MSCs。; 高健梁桂金朴英姬李方正张文平宋学雄; 关键词：骨髓间充质干细胞诱导分化

shRNA在抗猪瘟病毒中稳定遗传表达的研究进展被引量：1: 2013年; RNA干扰(RNA interference,RNAi)是一种能特异性地介导同源基因沉默的现象,随着对其机制的深入了解,它在病毒性疾病的治疗和预防上发挥出日益重要的作用。本文介绍了RNAi的作用机制,干扰RNA载体短发夹RNA(short hairpin RNA,shRNA)及其与转基因技术结合防治猪瘟病毒的作用,并从供体细胞类型的选择、干扰RNA的设计、位置效应及RNAi脱靶效应4个方面对影响RNAi持续干扰猪瘟病毒复制的因素进行了综述。; 许小琴宋学雄黄天华; 关键词：RNA干扰猪瘟病毒转基因短发夹RNA

兔胎儿肺脏发育的组织形态学特征: 2015年; 为阐明兔胎儿肺脏发育的组织形态学特征,采集4组兔胎儿(平均体长分别为1.9、2.75、4.7 cm和10.35 cm)肺脏,经制备石蜡切片,显微镜观察组织结构变化。结果显示,1.9 cm组,肺脏只见两条主支气管,由假复层柱状上皮组成;2.75 cm组,已形成支气管树,分支形成许多腺管状的细支气管结构,末端形成终蕾;在4.7 cm组,已形成终末细支气管,由单层立方上皮构成;10.35 cm组,已形成终囊(原始肺泡),囊壁较厚,只有少量终囊分化出肺泡Ⅰ型和Ⅱ型细胞,但也存在未形成终囊及终末细支气管的肺间质区域。这些结果表明,4组兔胎儿肺脏发育分别处于肺芽期、假腺期、小管期和终囊期。; 王奇惠李杨李全富吴丹丹宋学雄; 关键词：胎儿肺脏发育形态学

金黄地鼠超排后未排卵泡卵母细胞的成熟度和受精能力的观察被引量：1: 2011年; 为了证实金黄地鼠超排后卵巢中未排卵卵泡卵母细胞的成熟程度和受精能力,用促性腺激素PMSG和HCG进行4次超排处理,其中选择12只超排效率低下的金黄地鼠,回收输卵管和卵巢卵母细胞,观察卵母细胞的成熟程度、体外培养成熟能力及体外受精能力。结果显示,输卵管中回收超排卵数平均为22.6±7.8枚/只,从超排后卵巢中回收卵丘扩展卵数平均为23.2±3.9枚/只,卵丘未扩展卵数平均为13.4±3.7枚/只。卵丘扩展卵经0.1%透明质酸酶消化,裸卵占86.1%,带放射冠卵占11.5±2.4%。裸卵中排出极体的成熟卵占卵丘扩展卵的80.4±2.3%,无极体裸卵占5.7±0.8%。经体外培养2h,无极体裸卵的成熟率达100%,带放射冠卵的成熟率仅为6.3±9.4%,而卵丘未扩展卵未见有成熟卵。人精子穿透试验显示,卵巢回收成熟卵的受精率44.1±6.0%,同超排卵的受精率45.4±4.7%比较,无显著差异(P<0.05)。从低超排率的金黄地鼠卵巢中可获取与超排卵数相近的成熟卵母细胞,且具有可利用于去透明带金黄地鼠卵子穿透实验(HOP)及相关发育生物学研究的潜能。; 周婧唐元凤曲洪磊何宇乾宋学雄; 关键词：金黄地鼠超数排卵卵母细胞 HOP

电穿孔法介导抗猪瘟病毒质粒DNA转染仔猪成纤维细胞研究: 2013年; 本研究旨在用电穿孔法介导抗猪瘟病毒基因质粒转染仔猪成纤维细胞,优化电穿孔法转染条件。采用本实验培养的P6代仔猪成纤维细胞,用电穿孔法介导转染抗猪瘟病毒质粒,在电压、脉冲时间、脉冲次数、质粒DNA用量、电击后温度、电击缓冲液、质粒DNA构型等方面进行了转染条件优化的探索。结果显示,当电压为220V、脉冲时间25ms、脉冲1次,环形DNA用量为12μg,电击缓冲液为限定电转液时,细胞转染率高达47.49%。这些结果表明,用电穿孔法介导抗猪瘟病毒基因质粒转染仔猪成纤维细胞,可获得比较理想的细胞转染率。; 张文平周婧李方正宋学雄; 关键词：电穿孔转染

昆明小鼠胚胎成纤维细胞体外培养条件初步研究被引量：4: 2011年; 本研究旨在探索影响小鼠胚胎成纤维细胞(mouse embryonic fibroblast,MEF)分离培养的因素,建立有效的胚胎成纤维细胞培养体系,为构建饲养层细胞与体细胞核移植技术的细胞核供体建立平台。本研究用组织细胞培养液DMEM作为基础培养液,观察了不同胎龄、不同血清浓度及不同胰蛋白酶作用时间等因素对MEF分离培养的影响。结果显示,在所进行的4个胎龄8.5、10.5、12.5、14.5d的比较试验中,原代成纤维细胞分离培养的最适胎龄为12.5d,细胞贴壁迅速,12h已完全贴壁,增殖速度快;在所进行的不同时间5、10、15、30min的胰蛋白酶消化中,最佳时间为5～10min;在所进行的5个血清浓度7%、9%、10%、11%、13%的比较试验中,添加11%胎牛血清浓度培养效果最佳,从3～5代增殖倍数稳定在1.35左右,传代时间也相对较长。以上结果表明,采用12.5d胎鼠,胰蛋白酶消化5～10min,在含有11%血清的DMEM培养液中培养MEF细胞时,原代和传代效果最好,传代至第3～5代时细胞生长增殖最旺盛,处于对数分裂期,适宜作为饲养层细胞与体细胞核移植细胞核供体。; 曹俊新宋学雄孙旺吾唐元凤; 关键词：小鼠胚胎成纤维细胞

转基因猪体细胞核移植基因载体和供源选择的研究进展: 2013年; 体细胞核移植是动物转基因的常用手段。通过核移植技术获得转基因猪已经成为目前转基因猪新品种培育的主流技术,而载体和供核细胞的选择是转基因能否成功的关键,本文就这两方面的研究进展进行综述。; 陈佳虹宋学雄黄天华; 关键词：体细胞核移植转基因载体供核细胞

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