广东省自然科学基金(04002083)
- 作品数：24 被引量：186H指数：9
- 相关作者：宋长绪杨增岐王旭荣蒋智勇张彩勤更多>>
- 相关机构：广东省农业科学院西北农林科技大学内蒙古农业大学更多>>
- 发文基金：广东省自然科学基金广东省农业科技攻关项目国家高技术研究发展计划更多>>
- 相关领域：农业科学生物学轻工技术与工程更多>>
- 猪葡萄球菌ExhB基因在E．coli中的表达及生物学活性分析被引量：3
- 2009年
- 以猪葡萄球菌基因组DNA为模板,利用PCR方法扩增ExhB基因,克隆测序鉴定后,插入质粒pET32a,构建重组表达载体pET32a-ExhB,通过大肠杆菌BL21表达重组融合蛋白,利用Ni亲和层析的方法纯化重组的融合蛋白,并用纯化的蛋白攻毒裸鼠,鉴定其生物学活性。结果显示,扩增出了猪葡萄球菌ExhB基因并纯化出了重组的融合蛋白,SDS-PAGE分析表明,融合蛋白的相对分子质量约为45 000,主要以包涵体形式存在;通过ELISA和琼脂扩散试验表明,所表达的包涵体蛋白可以与用菌体制得的多克隆抗血清发生特异性结合;用复性的蛋白在裸鼠身上攻毒后可以产生皮炎病变。结果表明,成功的表达了ExhB基因的重组融合蛋白,并且鉴定出重组蛋白可与猪葡萄球菌阳性血清发生特异性免疫反应和重组蛋白在裸鼠身上的致病性,为进一步研究猪葡萄球菌的致病机理及建立该菌完备准确的防治和检测方法奠定基础。
- 杨彩娟张曦蒋智勇陈德坤宋长绪
- 关键词：猪葡萄球菌基因表达生物活性
- 5株广东省猪繁殖与呼吸综合征流行毒株主要结构蛋白基因的变异分析
- 根据GenBank中猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)的美洲株ATCC VR-2332的基因序列分别设计并合成针对PRRSV ORF3、ORF5和ORF6基因的引物,通过RT-PCR方法从广东潮州(GDCZ1、GDCZ...
- 王旭荣宋长绪杨增岐李春玲王贵平黄忠祝卫国
- 关键词：猪繁殖与呼吸综合征病毒主要结构蛋白基因
- 文献传递
- 广东省猪生殖与呼吸综合征病毒主要结构蛋白基因的变异分析被引量：14
- 2005年
- 根据GenBank中猪生殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)美洲株(ATCC VR-2332)基因序列分别设计合成了针对PRRSV ORF3、ORF5和ORF6基因的引物,利用RT-PCR从广东省送检的5份病料中均分别扩增得到了大小约787、630和550 bp的片段,将扩增的cDNA片段克隆入pMD 18-T载体并测序.应用DNAStar软件分析,并与国内外已发表毒株和疫苗株(RespPRRS/Repro、RespPRRS MLV)、LV4.2.1株的序列进行比较.结果显示,这5个毒株与CH-1a、HB-1(sh)、BJ-4、ATCC VR-2332、疫苗株等毒株ORF3、ORF5、ORF6的核苷酸同源性分别为87.2%～98.7%、85.4%～96.8%、91.8%～98.9%,推导的氨基酸同源性分别为84.6%～97.6%、84.5%～95.5%、94.8%～98.9%;而与LV4.2.1株的核苷酸同源性分别为56.1%～58.3%、54.4%～57.0%、62.2%～64.4%,推导的氨基酸同源性分别为53.9%～56.7%、54.0%～57.0%、78.0%～80.3%.基因系统发育树表明,广东省流行的PRRSV与HB-1(sh)株的亲缘关系比较近.
- 王旭荣宋长绪杨增岐王刚李春玲王贵平黄忠祝卫国
- 关键词：猪生殖与呼吸综合征病毒结构蛋白基因氨基酸同源性ORF6基因T载体
- 猪繁殖与呼吸综合征病毒RdRp基因的克隆与原核表达被引量：1
- 2009年
- 将猪繁殖与呼吸综合征病毒RNA依赖性的RNA聚合酶(RdRp)基因进行克隆、表达,并获得纯化重组蛋白,为进一步研究猪繁殖与呼吸综合征病毒RdRp的功能奠定基础。以RdRp基因cDNA为模板,用PCR扩增出RdRp基因片段,应用定向克隆策略将扩增后片段与高效表达载体pET32a(+)重组,阳性克隆重组质粒经酶切及测序鉴定,IPTG诱导高效表达。PCR法扩增出720 bp的片段,酶切及测序鉴定获得正确的重组质粒,在大肠埃希菌LB21中表达得到分子质量约为46 ku的融合蛋白。成功克隆及表达了猪繁殖与呼吸综合征病毒RdRp基因。
- 蔡汝健宋长绪郝永清杨鼎何锦玲
- 关键词：猪繁殖与呼吸综合征病毒克隆原核表达
- 猪圆环病毒2型重组ORF2蛋白-ELISA诊断方法的建立及初步应用
- 根据猪圆环病毒2型(PCV2)GD株序列(AY613854),设计一对引物,并以包含PCV2全基因组的重组质粒pMD-ORF2为模板,扩增出含ORF2基因的3’端(576 bp),回收PCR产物,将其克隆入pET-32a...
- 蒋智勇宋长绪黄忠刘燕玲张春红王浩文蔡汝健
- 关键词：猪2型圆环病毒ORF2ELISA
- 文献传递
- 一种分离猪Ⅱ型圆环病毒的新方法
- 设计合成一对扩增猪Ⅱ型圆环病毒(PCV2)全基因组的特异性引物,从2份患断奶后仔猪多系统衰弱综合征(PMWS)的死亡仔猪病料中,PCR扩增和克隆了2株PCV2全基因组。将所测序列与已公布的PCV毒株序列进行同源性比较。结...
- 蒋智勇宋长绪黄忠刘燕玲张春红王浩文蔡汝健
- 关键词：克隆
- 文献传递
- 猪繁殖与呼吸综合征病毒GD株ORF6基因重组腺病毒的构建
- 根据GenBank中猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)的美洲株ATCC VR-2332设计并合成针对PRRSVORF6基因的两条引物,通过RT-PCR方法从广东省送检的可疑病料中扩增得到大小为550bD cDNA片段,...
- 王旭荣宋长绪杨增岐王贵平张春红祝卫国黄忠
- 关键词：重组腺病毒
- 文献传递
- 猪繁殖与呼吸障碍综合征病毒Nsp2基因缺失株Jiangxi-3毒力的进一步研究
- 2010年
- 通过Reed-Muench法检测从江西发生持续高热的病猪体内分离的猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)Nsp2基因缺失株Jiangxi-3第9代(Jiangxi-3F9)的病毒滴度;将此毒株接种于PRRSV和猪圆环病毒2型(PCV2)抗原与抗体均为阴性的60日龄健康猪进行猪半数致死量(LD50)的测定,并且对LD50试验中存活下来的试验猪再次进行较大剂量的攻毒试验,另将病毒接种于PRRSV和PCV2抗原和抗体均为阴性的6月龄健康猪,对所有攻毒试验猪通过体温检测、临床症状观察、RT-PCR、ELISA等方法进一步研究Jiangxi-3F9的毒力。结果表明:Jiangxi-3F9的病毒滴度为105.25TCID50·mL-1,Jiangxi-3F9病毒的LD50为102.·2mL-1。动物试验各项检测结果说明Jiangxi-3F9毒力强。
- 王旭荣张彩勤赵炳武宋长绪
- 关键词：猪繁殖与呼吸综合征病毒NSP2基因缺失毒力
- 猪繁殖与呼吸综合征病毒流行株Jiangxi-3的全基因组序列分析被引量：3
- 2009年
- 通过RT-PCR分段扩增PRRSV流行株Jiangxi-3的基因组,参照VR2332序列,根据各片段之间相重叠的区域,将扩增片段的序列依次拼接获得Jiangxi-3完整的全基因组,并通过DNAStar软件对其进行分析。结果表明:Jiangxi-3的Nsp2推导氨基酸发生30个氨基酸的不连续缺失,与HB-1(sh)/2002相比,Nsp2推导的第480位氨基酸由D突变为E,缺失的位置为第481位氨基酸和532～560位氨基酸;Jiangxi-3与2006年Tian Kegong等从江西"高热病"病死猪体内分离的毒株JXA1的各个结构蛋白阅读框的氨基酸同源性为98.0%～100%;Jiangxi-3与HB-1(sh)/2002、VR2332、RespPRRSMLV的Nsp2推导的氨基酸同源性分别为94.7%、77.8%、77.7%,由遗传系统发育树可知与2006年以前分离的毒株相比,Jiangxi-3与HB-1(sh)/2002的亲缘关系较近。说明Jiangxi-3和JXA1极可能由同一毒株HB-1(sh)/2002演化而来。
- 王旭荣张彩勤赵炳武张春红杨增岐宋长绪
- 关键词：猪繁殖与呼吸综合征病毒全基因组
- 猪生殖与呼吸综合征病毒TaqMan荧光定量RT-PCR检测方法的建立被引量：58
- 2006年
- 根据GenBank登录的PRRSV保守基因序列设计合成了引物和探针,并对其进行了筛选;对荧光定量PCR的反应条件进行了优化,建立了TaqMan荧光定量RT-PCR检测方法。同时用建立的检测方法对组织病料进行了检测,并与常规RT-PCR做了对比。结果显示,所建立的TaqMan荧光定量RT-PCR方法灵敏度可达5.0×100拷贝/μL,比常规RT-PCR灵敏度高100倍。用该方法对东莞、增城、湛江等地的猪血清和多种组织样品进行了检测。结果,该方法与常规RT-PCR检测方法的阳性符合率为100%。用该方法对3份不同的组织样品进行了重复检测,结果表明,该方法具有良好的重复性,可满足当前PRRS的诊断需要。
- 宋志军宋长绪杨增岐朱道中武占银蒋智勇林志雄刘燕玲张福良
- 关键词：猪生殖与呼吸综合征病毒实时定量RT-PCR
