河南省基础与前沿技术研究计划项目(072300430060)
- 作品数：7 被引量：12H指数：2
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- 相关机构：郑州牧业工程高等专科学校更多>>
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- 靶向PRRSV核衣壳蛋白N基因的siRNA表达载体的构建及鉴定被引量：3
- 2009年
- [目的]研究靶向PRRSV核衣壳蛋白N基因的siRNA表达载体的构建及鉴定。[方法]设计并人工合成靶向PRRSV核蛋白N基因的3个siRNA靶序列,将其插入CMV启动子下游,克隆到真核表达载体pSilencer4.1-CMV中,对该重组表达载体进行酶切鉴定及DNA测序。[结果]成功构建了靶向核蛋白基因表达的siRNA干扰重组质粒载体pSilencer-N。[结论]该研究为进一步运用RNA干扰技术进行PRRSV防治研究奠定了基础。
- 曹素芳李明王岩刘长斗朱赞梅唐桂芬肖松云
- 关键词：PRRSVSIRNA
- 两株高致病性PRRSV河南分离株ORF5基因克隆及遗传变异分析被引量：6
- 2009年
- 从河南信阳和新乡两地区猪场疑似猪繁殖与呼吸综合征病料中分离出能引起Marc145细胞病变的病毒,命名为HN1和HN2。采用RT-PCR方法从分离的2株PRRSV中均分别扩增出ORF5基因,并将其克隆、测序。用DNAStar软件分析所测序列,并与北美洲型VR-2332株及国内分离株进行核苷酸和推导的氨基酸同源性比较,绘制系统进化树,结果表明,ORF 5核苷酸与北美洲型的同源性为81.2%～99.1%,与欧洲型Lv株的同源性分别为35.9%和35.3%,推导氨基酸与北美洲型的同源性为84.5%～99.5%,与欧洲型Lv株的同源性分别为46.0%和45.5%。证明新分离到的PRRSV毒株仍属北美洲型。与国内分离的高致病性PRRSV毒株JXA1、HUB1、JX0612、GDZC1、ZQ、SX-1、HB1、HEB1、Hnyz核苷酸同源性达96.5%～99.1%,氨基酸同源性为96.0%～99.5%。分析结果表明,所获得的2个毒株GP5蛋白氨基酸序列中的抗原表位已经发生变异。
- 曹素芳李明王岩刘长斗朱赞梅唐桂芬肖松云
- 关键词：猪繁殖与呼吸综合征病毒ORF5基因克隆
- 猪繁殖与呼吸综合征病毒ORF7基因变异分析
- 2009年
- 采用RT-PCR方法对疑似PRRS阳性病料进行克隆和测序获得了ORF7基因片段。序列分析结果表明获得的ORF7基因序列不存在缺失现象。与美洲型代表毒株VR-2332的核苷酸序列的同源性为91.3%,氨基酸同源性为92.6%;与我国最早的PRRSV分离株CH-la相比,核苷酸同源性为93.5%,氨基酸同源性为92.6%;与我国高致病性PRRSV毒株SD-ZQ的核苷酸同源性最高为98.1%,氨基酸只有两个不同,同源性为98.3%;与本省的Hn-1/06毒株的核苷酸同源性为97.3%,氨基酸同源性为97.5%;与2004年分离的FJ-2株与ORF7基因的核苷酸差异稍大为85.4%,氨基酸同源性为88.6%;与欧洲型分离株LV株和N-34株ORF7基因的核苷酸差异很大,同源性仅为41.1%和40%,氨基酸同源性为47.1%和47.6%。表明所获得序列的流行毒株属于美洲型,但其毒力已发生了变异。
- 曹素芳王岩肖松云唐桂芬
- 关键词：猪繁殖与呼吸综合征病毒ORF7基因
- 三元杂交猪IL-18全基因的序列测定及分析(英文)被引量：1
- 2009年
- 白细胞介素-18（IL-18）又称γ干扰素诱导因子（IGIF），研究表明IL-18是一种重要的新型免疫佐剂分子。为探讨猪IL-18的免疫佐剂作用，该研究根据已发表的猪IL-18基因序列，设计并合成1对特异性引物，从猪脾脏中直接扩增得到猪IL-18全基因，并进行克隆和序列测定、分析。
- 曹素芳李明王岩刘长斗朱赞梅唐桂芬肖松云
- 关键词：IL-18三元杂交猪全基因免疫佐剂白细胞介素特异性引物
- 靶向PRRSV核衣壳蛋白N基因的siRNA表达载体的构建及鉴定被引量：1
- 2009年
- 1材料与方法
1．1材料限制性核酸内切酶HindIII、BamHI、PvuII、SspI、质粒抽提试剂盒、EcoT14 DNAMarker购自TakaRa公司。T4DNA连接酶购于promega公司。大肠杆菌DH5α菌株由该实验室保存。siRNA表达载体pSilencer 4．1-CMV Nero质粒购自Ambion公司。
- 曹素芳李明王岩朱赞梅刘长斗唐桂芬肖松云
- 关键词：SIRNA核衣壳蛋白PRRSVN基因限制性核酸内切酶
- 猪IL-18成熟蛋白基因重组真核表达载体的构建及其抗病毒作用研究
- 2011年
- 应用RT-PCR方法从三元猪脾脏淋巴细胞中扩增出猪白细胞介素-18成熟蛋白(pmIL-18)基因,经克隆测序表明,pmIL-18基因长474bp,编码157个氨基酸。序列分析发现,与已发表的pmIL-18基因序列同源性很高,均为99%以上。将pmIL-18基因插入表达载体pcDNA3.1,成功构建了pmIL-18基因的重组真核表达载体pcD-NA3/pmIL-18。将重组质粒转染COS7细胞,经SDS-PAGE及Western-blotting分析表明,pmIL-18基因在COS7细胞中获得了瞬时表达。收集转染细胞培养上清,检测pmIL-18抗病毒活性,结果表明,转染上清对猪繁殖与呼吸综合征病毒没有明显的抑制作用。
- 曹素芳王岩
- 关键词：白细胞介素-18真核表达载体抗病毒活性
- 三元杂交猪IL-18全基因的序列测定及分析被引量：1
- 2009年
- [目的]为进一步研发新型抗病毒制剂和疫苗佐剂、有效控制猪重大传染病奠定基础。[方法]根据GenBank中猪白细胞介素-18基因(IL-18)序列,设计1对特异性引物,应用RT-PCR方法从河南三元杂交猪脾脏淋巴细胞中扩增猪IL-18基因,并进行克隆、序列测定和分析。[结果]猪IL-18基因全长为579 bp,编码192个氨基酸的无活性前体蛋白,但前体蛋白并不含典型的疏水信号肽,在第35位氨基酸残基处有1个潜在的白细胞介素1β转换酶(ICE)剪切位点,剪切后变为具有生物活性的猪IL-18成熟蛋白。序列分析结果表明,该试验获得的猪IL-18基因与已知猪IL-18基因序列同源性很高,均为96%以上,其推导的氨基酸同源性在98%以上。[结论]该研究成功构建了猪IL-18基因的重组真核表达载体并得到了具有生物活性的瞬时表达产物。
- 曹素芳李明王岩刘长斗朱赞梅唐桂芬肖松云
- 关键词：白细胞介素-18同源性
