重庆市自然科学基金(CSTC2007BB5311)
- 作品数：1 被引量：0H指数：0
- 相关作者：陈国珍李娅莎田杰孙慧超朱静更多>>
- 相关机构：重庆医科大学更多>>
- 发文基金：重庆市自然科学基金国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- p300特异性siRNA载体的构建及其对心肌细胞GATA4表达的影响
- 2010年
- 目的构建并筛选小鼠p300特异性siRNA载体,并观察p300表达降低对心脏特异性转录因子的调控作用,为进一步研究p300介导的组蛋白乙酰化失衡对心脏发育的影响奠定基础。方法针对小鼠p300基因的保守序列区域设计并构建3个重组质粒p300RNAi1,p300RNAi2和p300RNAi3。利用阳离子脂质体将其分别转染入体外培养的乳鼠心肌细胞,分别利用RT-PCR和免疫荧光从mRNA和蛋白水平检测p300表达,判断抑制效率,并检测心脏特异性转录因子GATA4的表达水平。结果 pSOS-HUS组和p300RNAi2组中p300mRNA水平表达较正常对照组无明显降低,而p300RNAi1组和p300RNAi3组中p300mRNA表达量较正常组有明显降低(分别为0.2208±0.0200,0.1708±0.0400,vs0.5095±0.0300),且差别有统计学意义(P<0.05),抑制率分别为56.7%和66.5%。转染p300RNAi1组和转染p300RNAi3组的GATA4mRNA表达水平(分别为0.4231±0.1100,0.2627±0.0800)明显低于正常组(0.8564±0.0700)和阴性对照组(0.8415±0.0400),差别有统计学意义(P<0.05)。结论 p300特异性siRNA质粒载体构建成功,p300RNAi1和p300RNAi3具有确切阻断p300蛋白表达的作用,并下调GATA4的表达。
- 孙慧超田杰朱静吕铁伟陈国珍李娅莎
- 关键词：P300GATA4表观遗传学组蛋白乙酰化
