河南省杰出人才创新基金(0321001800)
- 作品数：29 被引量：106H指数：7
- 相关作者：马远方刘广超李淑莲张军白慧玲更多>>
- 相关机构：河南大学华中科技大学宾夕法尼亚大学更多>>
- 发文基金：河南省杰出人才创新基金河南省医学科技创新人才工程项目国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 食管癌细胞表面DR5的表达分布与细胞铺展状态的关系被引量：6
- 2006年
- 目的:探讨食管癌鳞癌EC9706细胞系细胞表面DR5的表达分布与细胞铺展状态的关系。方法:免疫细胞化学技术分析食管癌EC9706细胞的DR5表达分布;流式细胞术检测食管癌细胞表面DR5的表达及细胞的凋亡率。结果:DR5分布在食管癌EC9706细胞的细胞质和细胞膜表面,主要在细胞质,但在细胞核没有DR5分布,而且在悬浮的食管癌细胞表面DR5表达高于铺展者。悬浮的食管癌细胞对抗DR5功能性抗体诱导的细胞凋亡敏感性高于铺展者。结论:食管癌细胞表面DR5的表达与细胞铺展状态具有密切的关系,细胞铺展状态的变化直接影响细胞表面DR5的表达分布以及对抗DR5功能性抗体诱导的细胞凋亡敏感性。该研究结果对进一步探讨DR5表达分布的机制以及TRAIL和DR5的功能性抗体的抗肿瘤临床应用有一定的指导意义。
- 刘广超都景芳马远方王秀英高荣高萍刘世贵
- 关键词：DR5功能性抗体TRAIL细胞凋亡
- 抗DR5单克隆抗体-mDRA-6对白血病细胞的凋亡诱导作用被引量：5
- 2007年
- 目的:观察抗死亡受体5(DR5)单克隆抗体(mAb)-mDRA-6对白血病细胞的凋亡作用。方法:DR5蛋白免疫BALB/c小鼠,融合筛选抗DR5杂交瘤细胞,制备抗人DR5mAb-mDRA-6;荧光显微镜下观察mDRA-6作用下白血病细胞Jurkat、HL-60、K562的形态变化;MTT法测定不同浓度的mDRA-6对Jurkat、HL-60、K562细胞存活率的影响;通过FITC-Annexin V及PI标记细胞,以流式细胞术检测mDRA-6对Jurkat、HL-60、K562细胞凋亡率的影响。结果:mDRA-6导致Jurkat、HL-60细胞染色质浓缩、断裂,细胞出芽,凋亡小体形成;mDRA-6对Jurkat、HL-60细胞具有明显的杀伤作用,但对K562的杀伤作用较弱,25mg/L的mDRA-6作用12h,Jurkat、HL-60、K562细胞死亡率分别为88.76%,59.76%,5.18%。Annexin V及PI双染显示1mg/L的mDRA-6作用10h,Jurkat细胞凋亡率为86.06%,10mg/L的mDRA-6作用10h,HL-60细胞凋亡率为48.11%,但10mg/L的mDRA-6作用K562细胞10h,细胞凋亡不明显。结论:抗DR5mAb mDRA-6能够诱导白血病细胞凋亡,不同的白血病细胞株对mDRA-6的敏感性不同。
- 李淑莲马远方刘广超张军白慧玲刘英杰
- 关键词：肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体死亡受体凋亡白血病
- 抗人DR5功能性抗体的研制
- 2007年
- 目的:研制抗人DR5功能性单克隆抗体。方法:采用杂交瘤技术制备抗人DR5的mAb;MTT方法筛选分泌有细胞毒活性mAb的杂交瘤细胞;亲和层析方法纯化mAb;夹心ELISA法测定mAb亚型;Western blotting和斑点ELISA法检测mAb的抗原表位类型;间接ELISA法检测mAb的特异性;观察抗体诱导细胞凋亡的形态学特征。结果:获得1株合成分泌有细胞毒活性抗体的杂交瘤细胞,其分泌的mAb命名为mDRA-6,为Ig G1,其抗原表位类型为构象表位,其特异性识别hDR5,与hFas、hDR4等无交叉反应。mDRA-6对Jurkat细胞具有细胞毒作用,经mDRA-6处理后,Jurkat细胞表现出细胞凋亡的形态学特征。结论:获得一种抗人DR5功能性抗体mDRA-6,在以TRAIL/DR5系统进行肿瘤治疗和探讨DR5的功能结构域研究方面具有广泛应用前景。
- 刘广超李淑莲卢峰白慧玲张军杜耀武赵粤萍都景芳马远方
- 关键词：死亡受体5细胞凋亡单克隆抗体TRAIL
- 检测DR5双抗体夹心ELISA方法的建立及应用被引量：1
- 2007年
- 目的:建立检测DR5双抗体夹心ELISA方法,通过检测慢性乙型肝炎患者血清可溶性DR5水平,探讨其在肝炎发病机理中的作用。方法:采用本室制备的鼠抗DR5的单抗YM366ED作为包被抗体,鼠抗DR5的单抗YM366EC标记HRP,建立检测sDR5的ELISA,并测定52例慢性乙型肝炎和30例正常人血清sDR5浓度。结果:建立了检测人sDR5的夹心ELISA法,方法的变异系数小于5%,回收率85%以上。慢性乙型肝炎患者血清sDR5浓度明显高于正常对照组。结论:成功地建立了一种可用于检测血清sDR5的双抗体夹心ELISA,为判定某些相关疾病患者的病情、疗效及预后提供有用的工具。血中sDR5在慢性乙型肝炎发病过程中可能起着重要作用,检测病人血中sDR5水平可作为慢性乙型肝炎疾病活动性指标。
- 白慧玲刘广超赵粤萍马远方
- 关键词：ELISA细胞凋亡肝炎病毒性
- 重组人可溶性DR5蛋白的分离纯化及其生物活性检测被引量：4
- 2007年
- 目的:提纯毕赤酵母GS115菌株表达的重组人可溶性死亡受体5(sDR5)蛋白,并研究其对肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL)所诱导细胞的阻断效应。方法:大量扩增可溶性DR5酵母表达载体转化阳性的毕赤酵母GS115菌株,收集上清,利用Ni-NTA Agarose亲和层析柱纯化获得重组可溶性DR5,用SDS-PAGE检测纯化产物的纯度。用流式细胞仪检测纯化的可溶性DR5对TRAIL诱导Jurkat细胞凋亡作用的阻断效应。结果:转化阳性的毕赤酵母GS115菌株可以成功表达分子量为23kD的可溶性DR5蛋白,经过Ni-NTAAgarose亲和层析柱纯化,SDS-PAGE鉴定显示获得了高纯度的重组人可溶性DR5蛋白,培养上清产量达28.69mg/L;体外活性检测结果显示,纯化的可溶性DR5蛋白几乎完全可以阻断TRAIL诱导的Jurkat细胞凋亡作用。结论:经纯化后的重组人可溶性DR5蛋白可以有效阻断TRAIL诱导的细胞凋亡作用,显示DR5在TRAIL诱导Jurkat细胞凋亡作用中起着十分关键的作用。
- 杜耀武刘广超赵粤萍白慧玲马远方
- 关键词：死亡受体5细胞凋亡JURKAT细胞
- 抗人DR5单克隆抗体(mDRA-6)对Jurkat细胞作用研究被引量：2
- 2007年
- 目的:观察抗肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL)的死亡受体5(DR5)单克隆抗体—mDRA-6对Jurkat细胞的凋亡作用。方法:制备抗人DR5单抗-mDRA-6;检测Jurkat细胞表面DR5表达率;荧光显微镜下观察mDRA-6作用下Jurkat细胞形态变化;MTT法计算mDRA-6对Jurkat细胞存活的影响;FITC-AnnexinⅤ及PI双染流式细胞仪检测mDRA-6对Jurkat细胞凋亡率影响;琼脂糖凝胶电泳检测mDRA-6对Jurkat细胞DNA片段化的作用。结果:Jurkat细胞表面DR5表达率为94.8%;mDRA-6使Jurkat细胞染色质边集、断裂,细胞出芽,凋亡小体形成;MTT法显示mDRA-6具有明显的Jurkat细胞杀伤作用,1.563 mg/L的mDRA-6可使Jurkat细胞死亡60.50%;AnnexinⅤ及PI双染显示0.3mg/L的mDRA-6作用10 h,Jurkat细胞凋亡率达43.22%;10 mg/L mDRA-6作用HL-60细胞3h,DNA琼脂糖凝胶电泳显示明显的“梯形”条带。结论:抗DR5单抗-mDRA-6能够诱导Jurkat细胞凋亡。
- 李淑莲都景芳张军刘广超白慧玲刘英杰马远方
- 关键词：肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体死亡受体凋亡单克隆抗体
- 抗人DR5单抗对人肝癌细胞系的凋亡作用
- 2007年
- 目的:探讨抗人DR5单克隆抗体(mDRA-6)对人肝癌细胞系的凋亡诱导活性。方法:常规培养人肝细胞HL7702,单克隆抗体对细胞的杀伤活性用MTT法检测、对细胞的凋亡作用采用Hoechst33258染色荧光显微镜下观察细胞形态变化及Annexin V-FITC/PI双染流式细胞术定量分析技术。结果:MTT的结果显示抗体的量和细胞杀伤率之间有明显的线性关系,随着抗体浓度的增加,细胞的杀伤率就增加;荧光显微镜下mDRA-6诱导导致细胞呈现典型的细胞凋亡的形态性特特征;流式细胞术检测显示,2 mg/L的mDRA-6作用人肝肝癌癌细胞系SMMC-7721细胞6 h,细胞凋亡率为35%。结论:mDRA-6能够诱导人肝癌细胞系凋亡,mDRA-6具有诱导细胞凋亡的活性。
- 张军马远方刘广超李淑莲
- 关键词：DR5单克隆抗体细胞凋亡
- 抗人DR5单克隆抗体——mDRA-6与顺铂协同杀伤白血病细胞HL-60作用研究被引量：5
- 2007年
- 目的:观察抗死亡受体5(Death receptor5,DR5)单克隆抗体———mDRA-6与顺铂(DDP)对HL-60细胞的协同杀伤作用。方法:DR5蛋白免疫BALB/c小鼠,融合筛选抗DR5杂交瘤细胞,制备抗DR5单抗———mDRA-6;流式细胞术测定顺铂对HL-60细胞表面DR5表达及细胞凋亡率;荧光显微镜下观察mDRA-6与顺铂协同作用下HL-60细胞形态变化;MTT法测定不同浓度的顺铂与mDRA-6对HL-60细胞存活的影响;琼脂糖凝胶电泳检测mDRA-6与顺铂联合对HL-60细胞DNA片段化的影响。结果:顺铂可诱导HL-60细胞表面DR5表达增加,mDRA-6与顺铂联用致HL-60细胞出现染色质浓缩、断裂,细胞出芽,凋亡小体形成等细胞凋亡形态学变化;250ng/ml的mDRA-6作用于HL-60细胞10小时,细胞凋亡率为16.61%;0.16μg/ml的DDP作用于HL-60细胞10小时,细胞凋亡率为2.35%;二者联合作用后,HL-60细胞凋亡率增至57.10%;mDRA-6与DDP联合作用HL-60细胞,DNA琼脂糖凝胶电泳显示明显“梯形”条带。结论:抗DR5单抗———mDRA-6与DDP对HL-60细胞具有强大的协同杀伤作用。
- 李淑莲马远方刘广超张军白慧玲刘英杰
- 关键词：肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体死亡受体单克隆抗体顺铂
- 顺铂通过活性氧协同抗hDR5抗体诱导食管癌细胞凋亡
- 2009年
- 目的:探讨顺铂与抗死亡受体5(DR5)激动性抗体mDRA-6联合应用对食管癌细胞系EC9706细胞凋亡的影响及作用机制.方法:顺铂、抗体mDRA-6单独或联合作用于食管癌细胞,用流式细胞术检测药物的细胞毒作用、食管癌细胞表面DR5表达、细胞凋亡、细胞内活性氧水平、以及线粒体膜电位的变化;在荧光显微镜下观察细胞凋亡的形态学变化及DR5表达.结果:顺铂和抗体mDRA-6对食管癌细胞均具有细胞毒作用,并具有剂量依赖性,而且顺铂明显提高食管癌细胞对抗体mDRA-6细胞毒的敏感性.顺铂、抗体mDRA-6单独或联合应用均导致食管癌细胞呈现典型细胞凋亡特征.流式细胞术分析结果显示,mDRA-6和顺铂均诱导食管癌细胞凋亡,而且顺铂明显提高细胞对mDRA-6诱导细胞凋亡的敏感性;顺铂增强食管癌细胞表面及胞内的DR5表达,提高细胞内活性氧水平,降低线粒体膜电位.结论:顺铂主要通过活性氧激活细胞内线粒体细胞凋亡信号传导途径以及增强DR5表达,与抗体mDRA-6联合协同诱导食管癌细胞凋亡.研究结果对进一步探讨抗DR5激动性抗体及TRAIL的抗肿瘤临床应用有一定的指导意义.
- 刘广超都景芳刘世贵龙章富陶科高荣马远方
- 关键词：DR5TRAIL细胞凋亡顺铂
- 抗人DR5单抗与阿霉素联合对人肝癌细胞SMMC-7721协同杀伤效应被引量：7
- 2006年
- 目的:探讨mDRA-6对肝癌细胞系SMMC-7721致凋亡作用,及阿霉素与mDRA-6联合协同杀伤效应与机制。方法:常规培养肝癌细胞SMMC-7721,流式细胞术检测细胞表面DR5的表达率。Hoechst 33258染色观察SMMC-7721细胞形态变化;MTT法检测细胞毒性作用;流式细胞术定量分析凋亡细胞率。结果:(1)mDRA-6能够诱导SMMC-7721细胞凋亡,在1.89μg/m l浓度下可杀伤36%的细胞,增加mDRA-6浓度,凋亡作用无明显增加;(2)SMMC-7721细胞对阿霉素敏感,存在浓度依赖性;(3)阿霉素与mDRA-6联合对SMMC-7721细胞具有协同杀伤作用,2μg/m l的mDRA-6与40 ng/m l的阿霉素联合杀伤60%SMMC-7721,Hoechst 33258染色和Annexin V/PI染色证实杀伤作用是通过细胞凋亡实现的。结论:mDRA-6能够诱导肝癌细胞SMMC-7721凋亡,阿霉素与mDRA-6联合具有协同作用。
- 张军马远方刘广超李淑莲卢锋
- 关键词：阿霉素协同杀伤作用
