“十五”国家科技攻关计划(2003BA712A03-07)
- 作品数：11 被引量：52H指数：5
- 相关作者：詹希美何蔼李卓雅孟锦绣程梅更多>>
- 相关机构：中山大学广东省人民医院南方医科大学更多>>
- 发文基金：国家科技重大专项国家自然科学基金广东省医学科学技术研究基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 广州管圆线虫成虫cDNA文库抗原基因的筛选被引量：10
- 2004年
- 目的从广州管圆线虫成虫cDNA文库中筛选特异性抗原基因。方法用大鼠感染血清做免疫探针,筛选广州管圆线虫成虫cDNA文库,对筛选得到的阳性克隆作交叉反应试验,PCR扩增外源基因插入片段并测序,用在线生物信息学软件进行同源性比对,推导氨基酸序列和蛋白质结构及进行功能分析。结果获得15个阳性克隆,分属三种基因,1个属中间纤维(IF)家族基因,3个与旋盘尾丝虫和秀丽杆线虫的真皮抗原同源,11个属主要精原蛋白(MSP)家族基因。其中1种基因表达产物没有发生明显交叉反应。结论从广州管圆线虫成虫cDNA文库中初步筛选出1个潜在特异性抗原基因和1个可能的主要抗原基因。
- 孟锦绣李卓雅詹希美吴长有沈浩贤梁瑜张瑞琳何蔼
- 关键词：CDNA文库抗原基因
- 一个广州管圆线虫特异性抗原候选基因的克隆与表达被引量：4
- 2006年
- 目的用免疫探针交叉筛选前期实验获得的广州管圆线虫候选抗原基因,将筛选出的特异抗原候选基因进行原核表达、鉴定。方法制备抗血吸虫和抗旋毛虫多克隆抗体血清,交叉筛选广州管圆线虫抗原候选基因,从中获得特异性抗原候选基因,将其从重组噬菌体状态转化为质粒状态,再亚克隆入原核表达载体pET-30a-c(+)进行融合表达,SDS-PAGE鉴定表达产物,同时对该基因进行生物信息学分析。结果获得了一个广州管圆线虫特异性抗原候选基因,经生物信息学分析该抗原基因属中间纤维家族基因(intermediate filament,IF),原核表达产物为48KDa。结论获得了一个广州管圆线虫特异性抗原候选基因及其原核表达产物。
- 孟锦绣詹希美程梅李素丽甘明徐贵峰李卓雅何蔼
- 关键词：广州管圆线虫抗原中间纤维CDNA文库
- 广州管圆线虫未知基因γ-丁基甜菜碱羟化酶的结构与功能研究(英文)
- Angiostrongylus cantonensis, a parasite firstly discovered and named by Chen Hsin-Tao in 1933, is the most com...
- 孟锦绣詹希美
- 文献传递
- 广州管圆线虫病的免疫学诊断研究进展被引量：4
- 2006年
- 广州管圆线虫病主要在东南亚及太平洋诸岛流行。广州管圆线虫为引起嗜酸性粒细胞性脑脊膜炎或脑膜脑炎的主要病原体。近年来随着人们饮食习惯的改变,该病的流行呈上升趋势。广州管圆线虫病主要依靠从病人脑脊液中找到虫体确诊,但虫体检出率很低,免疫诊断抗原的提纯以及免疫诊断方法的改进则提高了诊断的敏感性和特异性,为该病的诊断提供了科学的辅助手段。该文对广州管圆线虫病的免疫诊断抗原及诊断方法的研究进展作一综述。
- 程梅詹希美
- 关键词：广州管圆线虫免疫诊断抗原
- 2-巯基乙醇处理对广州管圆线虫感染大鼠血清特异性IgG检测效果的影响
- 2006年
- 目的探讨2-巯基乙醇处理对广州管圆线虫感染大鼠血清特异性IgG抗体检测效果的影响。方法用2-巯基乙醇对感染广州管圆线虫大鼠血清处理后,进行ELISA检测,观察标本阳性检出率的变化。结果改进的方法具有较好的敏感性和特异性。通过用2-巯基乙醇对在感染后8、14、20、28、45天和60天6个时点采集的大鼠感染血清进行处理,可不同程度提高其在ELISA反应中的阳性检出率。结论用2-巯基乙醇处理可提高广州管圆线虫感染大鼠血清特异性IgG抗体的阳性检出率。
- 陈代雄沈浩贤李小敏李华陈晓光
- 关键词：2-巯基乙醇广州管圆线虫IGG
- 广州管圆线虫抗原IF的中间纤维蛋白组织来源分析和定位被引量：1
- 2007年
- 目的对广州管圆线虫抗原IF进行中间纤维蛋白家族分类和细胞组织定位。方法IPTG诱导重组基因pET-IF在大肠杆菌中表达广州管圆线虫抗原IF,用组氨酸亲和层析纯化表达产物,用Western blot方法鉴定抗原IF的中间纤维蛋白类型;小鼠皮下多点注射法制备抗IF抗体血清,用免疫组织化学方法检测抗原IF在虫体组织和细胞上的定位。结果广州管圆线虫抗原IF在体外成功表达并纯化,其属于中间纤维蛋白家族的角蛋白,定位于广州管圆线虫成虫肠管壁,存在于细胞质中。结论广州管圆线虫抗原IF分布于虫体肠管壁,同时从组织学角度证明广州管圆线虫存在中间纤维结构。
- 孟锦绣何蔼程梅徐贵峰李卓雅余细勇蒋文玲李运雄詹希美
- 关键词：广州管圆线虫抗原中间纤维抗原定位
- 广州管圆线虫抗原IF的体外表达系统的建立和分析被引量：5
- 2006年
- 【目的】建立广州管圆线虫特异性抗原中间纤维(IF)基因的体外表达系统,研究IF蛋白的结构和功能关系。【方法】将IF基因亚克隆入原核表达载体pET-30a-c(+)并在原核中诱导表达,Westernblot鉴定融合表达产物的免疫特性,用组氨酸(His)亲合层析柱分离纯化表达产物,鉴定表达体系效率。生物信息学分析目的蛋白结构和功能关系。【结果】抗原基因IF在原核中与6个组氨酸进行了融合表达,以可溶性表达为主,并能在该系统中大量、稳定表达,其相对分子质量Mr=48×103,该表达产物具有较好的抗原性,可被大鼠感染血清识别,抗原IF具有典型的中间纤维家族特征,该蛋白具有多个抗原表位存在。【结论】建立了IF的有效原核表达系统,IF抗原蛋白的结构决定了它的属性和功能。
- 孟锦绣何蔼程梅李素丽甘明徐贵峰李卓雅詹希美
- 关键词：广州管圆线虫抗原中间纤维原核表达
- Ⅲ类内含子及其对基因表达的影响被引量：7
- 2005年
- 内含子是指断裂基因中的非编码区序列。根据内含子的核苷酸序列和RNA潜在折叠方式不同,可分成四种类型:I类内含子、Ⅱ类内含子、Ⅲ类内含子和Ⅳ类内含子。Ⅲ类内含子为真核细胞前mRNA中的内含子。它可以启动某些基因的表达,影响基因的表达量;增加mRNA分子的稳定性;并通过选择性剪接调控基因的表达。Ⅲ类内含子可以提高转基因动物基因的表达效率。因此,基因工程中,为了提高表达效率,是选用基因组基因还是cDNA基因,应视具体基因而定。
- 郑斌詹希美
- 关键词：内含子MRNA基因表达选择性剪接转基因动物
- 一种广州管圆线虫新基因——胶原蛋白全长cDNA的克隆和鉴定被引量：4
- 2006年
- 目的克隆和鉴定广州管圆线虫(Angiostrongyluscantonensis)新基因——胶原蛋白(collagen,COL)全长cDNA序列。方法根据表达序列标签(expressionsequencetag,EST)中部分序列和文库载体序列设计引物,采用PCR技术从广州管圆线虫幼虫的cDNA文库中分段扩增cDNA序列,用DNAMAN软件拼接分段扩增的序列以得到全长cDNA序列;利用多种生物信息学软件对cDNA全长序列进行同源性搜索与结构分析。根据cDNA全长序列,设计新的引物从文库中扩出包含胶原蛋白全长开放阅读框(openreadingframe,ORF)的cDNA片段,PCR产物纯化后克隆到pMD18-T载体上并测序。重组T载体经双酶切后切下的新基因AcCOL亚克隆到原核表达质粒pET32a(+)中。结果克隆一个广州管圆线虫新基因全长cDNA序列;序列比对、蛋白结构域搜索及结构分析结果显示,该新基因所编码的是一种胶原蛋白。构建的新基因重组质粒经双酶切后证明含有与目的片段长度相符的插入片段。结论克隆并鉴定了广州管圆线虫新胶原蛋白编码基因全长,成功构建了该基因的原核表达重组质粒pET32a(+)-AcCOL。
- 王琼吴焜陈晓光郝丽
- 关键词：广州管圆线虫胶原蛋白CDNA原核表达
- 广州管圆线虫成虫尿素溶解性抗原分析及其诊断价值的探讨被引量：8
- 2007年
- 目的分析广州管圆线虫成虫尿素溶解性抗原,探讨其诊断价值。方法广州管圆线虫成虫匀浆后沉渣经尿素溶解,与成虫水溶解性抗原同时进行SDS-PAGE和Western-blot,分析蛋白谱与抗原谱;用ELISA检测不同样本中相应抗体。结果SDS-PAGE结果显示尿素抗原蛋白条带少于水溶解性抗原;尿素抗原与感染大鼠血清、免疫兔血清和广州管圆线虫病患者血清在32000Mr处均出现强反应带,尿素抗原的反应带条数较水溶性抗原少。两种抗原包被ELISA检测广州管圆线虫病疑似病人血清和感染大鼠血清的阳性率相同;尿素抗原用于检测血吸虫感染小鼠血清的交叉阳性率明显低于水溶性抗原,检测正常大鼠血清、献血员血清及其他非广州管圆线虫感染血清时,假阳性数较水溶性抗原少。结论广州管圆线虫成虫尿素抗原含有32000Mr抗原;广州管圆线虫尿素抗原用于诊断时,与水溶性抗原有同样的敏感性,而特异性高于水溶解性抗原。
- 顾金保刘敏李华吴焜陈晓光
- 关键词：广州管圆线虫免疫诊断
