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一短指家系临床特征调查及IHH基因的突变分析被引量：3: 2012年; 目的探讨广东省一个汉族A1型短指(brachydactyly type A1)家系的临床特征及致病原因。方法在获得知情同意后对该家系成员进行病史采集和临床检测,并对其中7例患者和7例正常亲属采血进行DNA提取,采用聚合酶链反应结合DNA直接测序法对IHH基因的外显子进行突变检测。结果该家系的短指症为A1型,常染色体显性遗传;所有患者第二至第五手指和脚趾的中节指(趾)骨缺失,末节指(趾)骨短小,第一手指的远侧和近侧指骨均缩短;7例患者在IHH基因对应cDNA序列存在G391A(E131K)杂合突变,7例正常亲属均未发现该突变。结论中国广东汉族A1型短指家系的发病机制是IHH基因发生了E131K错义突变所致。; 姜海鸥吴思思黄雪霜李龙煌全庆丽张康; 关键词：突变分析

3种转染试剂在SKOV3细胞中转运大质量质粒的效率比较: 2018年; 以pAdeasy-1-EGFP作为外源转入质粒,表达绿色荧光蛋白的融合基因,分别用3种转染试剂Lipofectamine 3000、DNA-In CRISPR和FuGENE HD转染SKOV3细胞,比较3种转染试剂在SKOV3细胞中转染大质量质粒的转染效率,以此选择合适的转染试剂解决携带大片段质粒转染效率低的问题。通过观察GFP绿色荧光评估转染效率,并用CCK8法测定3种转染试剂对细胞存活率的影响。实验结果显示Lipofectamine 3000转染效率大于50%,FuGENE HD转染效率约20%,DNA-In CRISPR的转染效率小于5%。Lipofectamine 3000转染SKOV3细胞24 h后细胞活性达到(97.5±2.52)%,FuGENE HD和DNA-In CRISPR转染试剂的细胞活性分别为(89.5±2.43)%和(95.5±3.48)%。对比分析表明,转染试剂Lipofectamine 3000转染效率较高且细胞毒性低,适用于SKOV3细胞进行大质量质粒的转染。; 朱国念倪银芸吴思思; 关键词：LIPOFECTAMINE SKOV3细胞

人G蛋白偶联受体91(hGPR91)在HEK293细胞的表达: 2016年; G蛋白偶联受体（G protein-coupled receptors,GPCR）是一大类通过G蛋白介导其生物效应的膜受体总称,它可与多种细胞外信号分子结合,导致其胞内第二信使改变,引起相应的生物效应。GPCR也是最大的膜受体家族,大概有800种,且约80%的跨膜信号转导需要借助GPCR来完成,其成员均参与广泛的病理生理过程。; 丁雨陈雪梅吴思思; 关键词：G蛋白偶联受体真核表达载体蛋白表达

Sirt3在原发性肝细胞癌中的表达及其抑瘤作用被引量：1: 2016年; 目的观察Sirt3在原发性肝细胞癌(HCC)中的表达,并探讨过表达h Sirt3对人肝癌Hep G2细胞的存活及增殖影响。方法采用免疫组化法检测HCC组织和癌旁正常肝组织中Sirt3的表达;构建h Sirt3腺病毒载体,转染Hep G2细胞并过表达Sirt3蛋白,采用WST-1和Edu实验评价Sirt3对Hep G2细胞的存活及增殖作用。结果与正常肝组织比较,肝癌组织的Sirt3表达量明显降低;Ad-h Sirt3腺病毒感染Hep G2细胞后明显降低了细胞的存活率,抑制细胞生长。结论肝癌组织中Sirt3呈低表达或表达缺失,提示Sirt3的下调可能与HCC的发生密切相关;过表达Sirt3明显抑制Hep G2细胞株的存活及增殖,提示Sirt3可能是治疗肝癌的潜在靶点。; 吴思思丁雨陈雪梅蒋维; 关键词：腺病毒载体过表达 HEPG2细胞抑瘤作用治疗靶点

四种转染试剂对H9C2细胞转染效率的比较被引量：4: 2017年; 目的比较4种不同转染试剂对大鼠心肌细胞H9C2细胞的转染效率,以选择最优转染方法。方法以带有增强绿色荧光蛋白(enhanced green fluorescent protein,EGFP)基因的质粒作为外源基因,分别用4种不同转染试剂Fu GENE HD、DNA-In CRISPR、Lipofectamine 3000和Lipofectamine 2000转染H9C2细胞,通过荧光显微镜观察和荧光酶标仪检测荧光强度来评价转染效率,并通过Cell Counting Kit-8(CCK-8)试剂盒检测4种转染试剂对细胞活性的影响。结果 Lipofectamine 3000转染效率最高(>50%);而DNA-In CRISPR转染效率最低(<1%)。4种转染试剂中Lipofectamine 3000对细胞毒性也最低,转染48 h后细胞活性为94.55%。结论转染试剂Lipofectamine 3000在保证相对较高的转染效率的同时也具有最低的细胞毒性,更适合用于H9C2细胞的转染。; 倪银芸丁雨吴思思; 关键词：CRISPR LIPOFECTAMINE LIPOFECTAMINE

前列腺基质细胞的原代培养方法被引量：1: 2019年; 目的:建立一种操作简单、成功率高、重复性好的前列腺增生组织原代基质细胞(PSC)培养方法。方法:采用胶原酶消化法、组织块贴壁法和胰酶消化组织块贴壁法,从70岁及以上男性的良性前列腺增生组织中分离培养PSC,通过显微镜观察比较PSC的数量、形态、培养周期,用免疫荧光染色法鉴定PSC的纯度。结果:胶原酶消化法得到的贴壁细胞少,细胞体积较小且形态无法铺展,增殖能力较弱;组织块贴壁法培养72h后细胞会从组织边缘缓慢爬出,生长周期长;胰酶消化组织块贴壁法,细胞培养7d后基本融合,折光性强,细胞多呈长梭形,通过免疫荧光染色鉴定,基质细胞纯度在95%以上。结论:利用胰酶消化组织块贴壁法建立了一种易行、高效且重复性好的前列腺增生组织基质细胞培养方法。; 霍雨薇丁雨朱国念吴思思; 关键词：良性前列腺增生

两种实时定量聚合酶链反应方法检测血浆微量微RNA的比较被引量：2: 2017年; 目的比较用茎环和多腺苷酸聚合酶(poly A polymerase,PAP)加尾实时定量聚合酶链反应(polymerase chain reaction,PCR)法检测血浆中微量微RNA(micro RNA,mi RNA)的区别,并评价2种常用内参基因的表达稳定性。方法分离成年Sprague Dawley大鼠血浆提取mi RNA,使用茎环和PAP加尾实时定量PCR法检测血浆中rno-mi R-200b-3p和rno-mi R-126-3p的表达水平,采用rno-mi R-103a-3p和U6作为内参,采用2△Ct法计算比较两种实时定量方法和内参的选择。结果茎环法相较于PAP加尾法检测Ct值可以降低2~4个循环数,检测灵敏度增加了10倍;PAP加尾法溶解曲线在明显单峰之前可见小峰,茎环法显示独立单峰,茎环法特异性更优;U6作为内参相对于rno-mi R-103a更稳定。结论对于mi RNA浓度偏低的少量样本检测,茎环法有准确、灵敏、特异的优点;对于mi RNA含量丰富、大规模组织样本的检测,PAP加尾法则更适用。对于内参基因的选择,使用U6进行mi RNA半定量相对于rno-mi R-103a-3p更稳定,重复性更强。; 陈雪梅丁雨吴思思; 关键词：微RNA 实时定量聚合酶链反应血浆

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国家自然科学基金(81000056)