国家自然科学基金(30270958)
- 作品数：12 被引量：40H指数：5
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- 相关机构：南京农业大学江苏省农业科学院上海市农业科学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金上海市科技兴农重点攻关项目江苏省自然科学基金更多>>
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- 猪GV期卵母细胞玻璃化冷冻后的体外成熟
- 用抽吸法采集屠宰猪卵巢中φ2-5mm及φ>5mm卵泡卵母细胞,再用切割法采集φ<2mm卵泡卵母细胞。结果表明,切割法所获小卵泡卵母细胞成熟率显著低于抽吸法采集的中卵泡和大卵泡卵母细胞,P<0.05;而中卵泡和大卵泡之间无...
- 武彩红戴建军芮荣侯加法
- 关键词：GV期卵母细胞玻璃化冷冻体外成熟
- 文献传递
- 猪GV期卵母细胞玻璃化冷冻后的体外成熟被引量：7
- 2006年
- 本研究旨在探索建立猪GV（Germinal visiele）期卵母细胞的冷冻保存方法。用抽吸法采集屠宰猪卵巢中直径为2—5mm及〉5mm的卵泡卵母细胞，再用切割法采集直径〈2mm的卵泡卵母细胞。结果表明，切割法所获卵母细胞数及每只卵巢平均采卵数均显著高于抽吸法（P〈0．05）；但切割法所获卵母细胞可用率仅为33．8％，显著低于抽吸法67．5％的可用率（P〈0．05）。用抽吸法采集直径为2—5mm的卵泡卵母细胞，进行体外成熟和玻璃化冷冻研究。4组成熟培养结果表明，卵母细胞在添加激素和猪卵泡液（pFF）的成熟培养液中培养24h后转入无激素、无卵泡液的基础培养液中继续培养20h，体外成熟率达78．9％，显著高于另外3组（P〈0．05）。以EFS40作为玻璃化冷冻液，比较细管法和OPS（Open pulled straw）法对猪GV期卵母细胞的冷冻效果，从冻后形态正常率来看，两种方法间无统计学差异（P〉0．05）；但OPS法冷冻猪GV期卵母细胞的冻后存活率和体外成熟率均显著高于细管法（P〈0．05）。
- 武彩红戴建军芮荣侯加法
- 关键词：GV期卵母细胞玻璃化冷冻体外成熟
- 小鼠原始生殖细胞在生殖嵴的定位
- 本试验以昆明小鼠胚胎为材料,采用普通石蜡切片和冰冻切片技术,对不同胚龄小鼠生殖嵴进行形态学比较研究．通过对原始生殖细胞(PGCs)在生殖嵴中的碱性磷酸酶(AP)染色定位观察,比较其数量的增殖规律．结果表明,11．5-12...
- 谢冰芮荣卢晓剧世强黄国庆杨倩
- 关键词：小鼠原始生殖细胞
- 文献传递
- 小鼠原始生殖细胞在生殖嵴的定位被引量：2
- 2007年
- 试验以昆明小鼠胚胎为材料，采用普通石蜡切片和冰冻切片技术，对不同胚龄小鼠生殖嵴进行形态学比较研究。通过对原始生殖细胞（PGCs）在生殖嵴中的碱性磷酸酶（AP）染色定位观察，比较其数量的增殖规律。结果表明，11.5～12.5 dpc（配后天数）阶段为采集PGCs的最佳时间。
- 谢冰芮荣卢晓剧世强黄国庆杨倩
- 关键词：小鼠原始生殖细胞
- 猪核移植及其相关技术的研究进展(综述)被引量：3
- 2004年
- 猪器官的解剖结构和生理生化特性与人类的相近 ,猪有可能成为人类异种器官移植的首选供体动物。“多莉”羊的诞生 ,启发了人们改造猪器官用于异种移植的思路 ,大大促进了猪核移植技术的发展。该文对猪核移植及其相关技术的研究进展加以综述分析 ,以供参考。
- 朱良成芮荣
- 关键词：核移植异种移植转基因技术
- 细胞骨架在猪GV期与M Ⅱ期卵母细胞的分布规律
- 2006年
- 采用免疫荧光技术,在激光扫描共聚焦显微镜下观察并分析猪GV期和MⅡ期卵母细胞的细胞骨架分布。结果发现,猪新鲜GV期与MⅡ期卵母细胞的微管、微丝和染色体结构与分布,具有不同的特点和规律。在GV期卵母细胞,结构完整的微管尚未形成;染色体未发生致密化,仍存在于生发泡内;而微丝则分布于质膜下及整个胞质中。MⅡ期卵母细胞的微管,主要存在于纺锤体上,少量微管出现在第一极体周围;染色体排列于纺锤体赤道板上;微丝均匀分布于质膜下。本研究表明,微管、微丝和染色体三者间密切联系、相互作用,共同参与卵母细胞成熟与发育进程的调控。
- 武彩红芮荣戴建军剧世强卢晓郑筱峰
- 关键词：卵母细胞细胞骨架激光扫描共聚焦显微镜
- 表达绿色荧光蛋白的猪胚胎生殖细胞分离
- 2004年
- 以质粒DNA为增强型绿色荧光蛋白 (EGFP)的载体 ,对处于快速增殖期的 8株猪胚胎生殖 (EG)细胞 (4～ 9代 )进行转基因试验。用 1μgDNA和 2 μLLipofecTamine 2 0 0 0转染EG细胞后 ,共获得 4株转染EGFP基因的EG细胞系 (EG EGFP) ,可发出强绿色荧光 ;EG EGFP细胞连续培养 2周以上可分化为多种细胞类型。显微注射EG EGFP细胞至卵裂期胚胎、桑椹胚卵周隙内或囊胚腔中 ,共注射 135枚胚胎 ,其中 112枚存活并发育至囊胚 (83 0 % ) ;86枚嵌合体胚培养后含有荧光细胞 ,其中 5 7枚囊胚在内细胞团 (ICM)上发现有EG EGFP细胞。
- 芮荣邱妍胡元亮范必勤
- 关键词：胚胎生殖细胞增强型绿色荧光蛋白转染
- 猪卵母细胞玻璃化冷冻后的超微结构变化被引量：5
- 2007年
- 为研究猪未成熟期(GV期)和体外成熟期(MⅡ期)卵母细胞玻璃化冷冻后的超微结构变化,随机取新鲜与冷冻-解冻后的GV期和MⅡ期卵母细胞制备电镜标本。GV期和MⅡ卵母细胞分3组进行处理:Ⅰ组为对照组,Ⅱ组为GV期卵母细胞冷冻组,Ⅲ组为MⅡ期卵母细胞冷冻组。结果表明,所用玻璃化冷冻程序更适用于猪GV期卵母细胞的冷冻保存,GV期冷冻组卵母细胞的二乙酸荧光素(FDA)染色存活率、卵裂率均明显高于MⅡ期卵母细胞冷冻组。透射电镜观察结果发现,猪GV期卵母细胞经玻璃化冷冻后,主要表现为部分卵丘-卵母细胞复合体(COC)发生卵丘细胞脱落,透明带破损,卵丘细胞碎裂,卵丘细胞与卵母细胞间的连接受到破坏,卵母细胞微绒毛断裂、消失、数量减少,卵母细胞内脂滴多呈均质状。而MⅡ期卵母细胞冷冻后,皮质颗粒仍呈单层排列于质膜下,仅可见形态不规则的不均质脂滴,其周围常严重空泡化。试验表明,采用适当的冷冻方案,可以获得少量源于冷冻保存的猪GV期卵母细胞的胚胎。而猪MⅡ期卵母细胞冷冻后,经体外受精未见卵裂,脂滴严重空泡化是其最为明显的变化。
- 武彩红芮荣戴建军谢冰剧世强卢晓侯加法
- 关键词：卵母细胞玻璃化冷冻体外成熟体外发育超微结构
- 猪GV期卵母细胞玻璃化冷冻保存技术研究被引量：2
- 2007年
- 旨在探讨提高猪GV期卵母细胞冷冻保存效率的可能途径。将EDS、EFS40和ES冷冻保护液用作卵母细胞冻前、冻后程序的处理,但不冷冻,比较3种冷冻保护剂对猪GV期卵母细胞的毒性作用;采用ES液作玻璃化液,比较常规细管法、OPS法和电镜铜网法3种冷冻载体对猪GV期卵母细胞的冷冻效果;并以ES液作玻璃化液,OPS管为冷冻载体,将猪GV期卵母细胞分5组,即对照组、CB+离心处理组、直接冷冻组、CB+冷冻组、CB+离心+冷冻组进行对比处理,比较各处理卵母细胞的冻后存活率与发育率。结果表明,在不同冷冻保护液中,以ES液组合作为玻璃化冷冻液时的毒性作用最低,与对照组间无明显差异(P>0.05);在3种冷冻载体中,用OPS法冷冻猪GV期卵母细胞,所获冻后存活率明显高于电镜铜网法和细管法(65.4%对45.0%和38.6%,P<0.05),并可获得最佳的冻后成熟率(43.3%);猪GV期卵母细胞单纯经细胞松弛素B和离心极化处理,不会严重影响卵母细胞的存活,但卵裂率显著低于对照组(39.0%对52.1%,P<0.05);细胞松弛素B处理或细胞松弛素B+离心极化处理后再进行玻璃化冷冻,并不能提高卵母细胞的冻后存活率与发育率。采用OPS法直接进行GV期卵母细胞的玻璃化冷冻,可获得7.8%的冻后卵裂率,并能获得桑椹胚发育,是一种有效的猪卵母细胞冷冻保存技术。
- 戴建军芮荣武彩红葛立军卢庆
- 关键词：卵母细胞玻璃化冷冻
- 猪GV期与MⅡ期卵母细胞的超微结构特征被引量：2
- 2007年
- 采用扫描电镜(SEM)和透射电镜(TEM)观察并比较猪未成熟(GV期)与体外成熟(MⅡ期)卵母细胞的超微结构特征。结果发现:①猪GV期卵母细胞外紧密包被着卵丘细胞,卵丘细胞突起伸入透明带内,透明带呈不规则蜂窝状;卵母细胞微绒毛相对较长、数量较多,并穿入透明带内;卵母细胞呈充满状态,卵周隙不明显;胞质内高尔基复合体发达,线粒体成簇分布于脂滴附近;脂滴表现为均质和不均质两种形式,大多以均质脂滴形式存在,脂滴周围有不连续的滑面内质网。②MⅡ期卵母细胞周围,卵丘细胞结构松散、扩展;卵母细胞微绒毛数量减少、变短、变粗,并从透明带内撤回;透明带上峰窝状小孔增多,小梁突起更为明显,卵周隙明显;线粒体仍成簇伴随脂滴分布,脂滴以不均质型为主,呈明显的絮状结构,脂滴外有不连续的滑面内质网;皮质颗粒以单层排列于质膜下。猪卵母细胞成熟前后会出现一些规律性变化,具有不同的超微结构特征。
- 武彩红戴建军王会珍葛立军卢庆芮荣
- 关键词：卵母细胞体外成熟超微结构
