国家重点基础研究发展计划(2005CB522505)
- 作品数：32 被引量：53H指数：5
- 相关作者：吴秀山李永青王跃群邓云万永奇更多>>
- 相关机构：湖南师范大学南华大学教育部更多>>
- 发文基金：国家重点基础研究发展计划国家自然科学基金湖南省自然科学基金更多>>
- 相关领域：生物学医药卫生更多>>
- 斑马鱼整体原位杂交的技术改良被引量：7
- 2010年
- 斑马鱼整体原位杂交技术广泛应用于基因表达谱、基因间相互关系和突变体筛选等方面,是研究斑马鱼发育相关基因功能的重要技术。本文从杂交探针的制备、浓度的选择和洗脱以及胚胎的脱色、蛋白酶K消化、底物显色等方面进行了摸索、改进及简化,获得了背景低、着色清晰、特异性高的实验结果,预示了简单实用、成本低廉的斑马鱼整胚原位杂交技术平台的成功建立。
- 樊竑冶彭忠禄谢华平莫小阳王跃群邓云万永奇李永青吴秀山
- 关键词：整体原位杂交斑马鱼胚胎
- 心脏发育候选基因AHNAKβ的克隆和表达研究
- 2009年
- 心脏发育过程是一个错综复杂的过程,由一系列的基因参与完成。虽然目前已经鉴定出很多与心脏发育相关的基因,但是仍有很多心脏发育相关基因有待鉴定。作者从小鼠心脏cDNA文库中分离并鉴定了一个心脏发育候选基因AHNAKβ。AHNAKβ位于11q12.2,长1 064 bp,由6个外显子和5个内含子组成,其中开放阅读框(ORF)长450 bp(258～710 nt),编码含有149个氨基酸,蛋白质大小约为16.0 kD。我们构建了原核细胞表达载体,在大肠杆菌中表达并纯化了GST-AHNAKβ融合蛋白,然后制备了该蛋白的兔免疫血清。利用该抗体进行了小鼠成体组织Western blot以分析该基因的蛋白表达模式。研究结果表明AHNAKβ在小鼠成体子宫、小肠等多种组织表达,在心脏中表达较高,提示它可能在心脏组织中具有某种重要作用。
- 李宁莫小阳邓云万永奇吴秀山李永青
- 关键词：心脏发育克隆
- 人类新基因WDR24的研究初报
- 2009年
- WD40家族是一类结构保守、功能复杂的蛋白。目前很多研究显示该家族成员通过参与MAPK信号途径调控细胞内信号转导而影响细胞的基本生命活动。为了鉴定参与细胞生命活动的新基因,运用同源基因克隆法,通过PCR技术扩增获得一个新的人类基因WDR24,其cDNA全长3 302 bp,2 373 bp长的开放阅读框编码由790个氨基酸残基组成的蛋白质。生物信息学分析表明,WDR24蛋白在进化上高度保守,与其他脊椎动物中的同源蛋白组成了一个功能未知的亚家族。蛋白序列分析显示其中有6个WD40重复序列和1个ERK的停泊位点D-domain。RT-PCR分析表明,该基因在所有被检测的人类胚胎组织中表达。
- 周云雷满贤龚琳吴秀山李永青
- 关键词：基因克隆RT-PCR
- 果蝇血液发育标记基因Dox-A3多克隆抗体的制备
- 2012年
- 从野生型成体果蝇体内提取总RNA,以cDNA作为模板进行PCR扩增,获取Dox-A3部分基因片段,将这片段连接于原核表达载体pET-28a上,成功构建重组质粒pET-28a-Dox-A3.将重组质粒转化大肠杆菌菌株Rosetta,用ITPG诱导表达出融合蛋白,然后将经Ni-IDA凝胶柱纯化的融合蛋白免疫新西兰大白兔制备Dox-A3多克隆抗体,通过Western-Blot检测效价和特异性.结果表明,实验获得了高质量的多克隆抗体.
- 苏勇蔡哲彦江志钢袁婺洲吴秀山
- 关键词：果蝇原核表达多克隆抗体
- 斑马鱼心脏发育标记基因Wnt11的多克隆抗体制备被引量：1
- 2011年
- Wnt11为Wnt家族的成员,是参与Wnt信号途径调控的转录因子,对心脏的正常发育起着非常重要的作用.根据已报道的Wnt11基因序列,通过RT-PCR从斑马鱼心脏组织中得到Wnt11部分编码区序列,将其连接到pGEX-4T-1原核表达载体上.经酶切及测序鉴定后,质粒构建成功,将重组质粒(pGEX-4T-Wnt11)转化E.coli BL2l,通过IPTG诱导表达出融合蛋白,采用谷胱甘肽琼脂糖珠亲和纯化.将纯化的融合蛋白免疫新西兰大白兔制备多克隆抗体,并用Western Blot检测抗体的效价和特异性.结果显示,获得了Wnt11原核表达重组融合蛋白及高效价的特异性兔抗Wnt11多克隆抗体,为Wnt11功能的进一步研究奠定了基础.
- 雷孝锋江志钢李志王华万永奇袁婺洲吴秀山
- 关键词：融合蛋白斑马鱼多克隆抗体
- 果蝇唾液腺特异基因CG8419多克隆抗体的制备及检测
- 2011年
- 果蝇CG8419基因与脊椎动物中TRIM45基因为同源基因.以果蝇cDNA为模板通过PCR扩增出亲水性和特异性好的果蝇CG8419基因片段,将其克隆入表达载体PET-28a,构建出重组表达质粒PET-28a-CG8419.将重组质粒转化大肠杆菌Rosetta,经IPTG诱导出带His标签的重组融合蛋白.通过尿素洗涤包涵体并切胶回收纯化融合蛋白,然后再免疫新西兰大白兔制备多克隆抗体.Western blot实验分别验证抗体的效价和特异性.果蝇胚胎抗体染色显示该基因在果蝇唾液腺中表达.
- 周煌唐雄卓闵璐陈婷芳彭夕洋王琨吴秀山王跃群
- 关键词：原核表达多克隆抗体
- 小鼠Lbh抗体的制备和鉴定
- 2010年
- 利用小鼠作为模式动物进一步研究人类Lbh(Limb-bud-and-heart)在心脏发育中的功能。提取正常成年小鼠的心脏总RNA,RT-PCR扩增小鼠Lbh的全长开放阅读框,构建原核表达重组质粒pGEX4T-1-Lbh。转化大肠杆菌BL21后,摇菌培养到OD_(600)为0.5～0.6时,加IPTG诱导融合蛋白的表达。将纯化的GST-Lbh融合蛋白免疫新西兰大白兔制备多克隆抗体。免疫印迹法检测表明该抗体有较好的特异性,可用于该基因结构和功能的研究。
- 谭小华王跃群邓云万永奇莫小阳李永青吴秀山
- 关键词：抗体原核表达
- 人类心脏和肌肉组织特异表达基因Smyd1的表达与抗体制备
- 2009年
- Smyd1基因是人类心脏和肌肉特异表达基因,制备该基因的多克隆抗体可以为进一步深入研究Smyd1在心脏发育过程中与其他因子相互作用提供检测工具.通过PCR方法扩增smyd1基因的编码区片段,并将其克隆至PGEX-4T-1上,转化到大肠杆菌BL21(DE3)中,再通过5052法和IPTG法分别诱导表达GST-Smyd1融合蛋白.经比较,5052法诱导的蛋白表达量明显高于IPTG法.采用5052法大量诱导表达,通过割胶回收纯化融合蛋白,免疫新西兰大白兔制备多克隆抗体,Western blot检测抗体活性.结果表明,实验获得了高质量的多克隆抗体.
- 谢岁岁王跃群万永奇邓云莫小阳李发祥李永青吴秀山
- 关键词：原核表达多克隆抗体
- CXXC5多克隆抗体的制备及表达研究被引量：1
- 2011年
- CXXC5基因是从人类胚胎心脏的cDNA文库中克隆出来的一个人类锌指基因,包含zf-CXXC5结构域,该基因编码322个氨基酸,在物种进化上高度保守。为了进一步研究该基因的功能,需要获得CXXC5蛋白并制备其抗体.通过PCR扩增方法扩增得到了CXXC5部分编码区序列,然后将其连接到PGEX-4T-1上,转化到大肠杆菌BL21(DE3)中,再通过自身诱导法诱导表达重组质粒的融合蛋白.通过割胶回收纯化融合蛋白。免疫新西兰大白兔制备多克隆抗体,Western blot检测抗体活性。结果表明,实验获得了高质量的多克隆抗体。
- 王西君廖鹏王跃群邓云莫小阳袁婺洲万永奇吴秀山李永青
- 关键词：融合蛋白多克隆抗体
- 人类锌指蛋白ZNF382对肌生成的调控作用被引量：1
- 2009年
- 人类基因组中有大量哺乳类特有的KRAB锌指基因,这些基因的功能大多尚不清楚,ZNF382就是其中一个。本文研究了人类锌指蛋白ZNF382对肌生成的调控作用。人类ZNF382基因在肌肉组织中高表达,ZNF382的mRNA水平在C2C12细胞的肌生成过程中上调,ZNF382调节肌肉特异性基因的表达,在NIH3T3细胞中,ZNF382与E-box蛋白E12和成肌调节因子MyoD共转增强肌肉肌酸激酶MCK启动子的活性;ZNF382的启动子预测分析也发现ZNF382的启动子上含有MyoD和血清反应因子SRF的结合位点,这些结果提示人类ZNF382蛋白在肌生成中起着重要的作用。
- 廖鹏王瑛白彦袁婺洲李永青朱传炳邓云莫小阳万永奇王跃群吴秀山
- 关键词：C2C12
