国家自然科学基金(31200636)
- 作品数：4 被引量：2H指数：1
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- S-腺苷甲硫氨酸增加salsolinol对多巴胺能神经细胞SH-SY5Y的毒性
- 2015年
- 目的帕金森病(Parkinson’s disease,PD)是常见的神经退行性疾病,儿茶酚异喹啉类神经毒素(salsolinol,Sal)作为内源性神经毒素是其可能的致病因素,而S-腺苷甲硫氨酸(S-adenosyl methionine,SAM)目前在帕金森病的治疗上有应用的可能,所以有必要对其在体内的作用进行研究。方法本实验采用体外培养的多巴胺能细胞SH-SY5Y,首先使用MTT的方法对Sal以及SAM与Sal共同诱导后细胞存活率进行研究,使用了Hoechst 33258染色的方式检测凋亡,并检测ATP,最后使用高效液相色谱偶联电化学检测器(high performance liquid chromatography couple electrochemical detector,HPLC-ECD)检测了Sal和SAM代谢生成的氮甲基去甲猪毛菜碱(N-methylsalsolinol,NMSal)在细胞中的浓度。结果 SAM可以促进Sal引起的细胞存活率的降低,同时凋亡水平升高,ATP浓度降低,而且SAM诱导之后,Sal代谢生成的NMSal浓度也随之升高。结论这些结果说明了SAM会促进Sal在多巴胺能神经细胞中的毒性作用,因此SAM可能不利于PD的治疗。
- 卢剑清邓玉林
- 关键词：S-腺苷甲硫氨酸
- 重组腺相关病毒的小量制备与体内体外感染研究
- 2015年
- 重组腺相关病毒(r AAV)是近年来发展的较为成熟的一种病毒基因载体,常用于过表达或者敲低等动物模型的建立与基因治疗等。本研究使用三质粒共转染的方法,在HEK293细胞中包装出含绿色荧光蛋白(EGFP)基因的r AAV,通过一系列实验,确定纯化方法为脱氧胆酸钠裂解,高浓度Na Cl去除杂蛋白,最后通过肝素层析柱纯化,经超滤管浓缩后其滴度可达1013gene copys/m L以上。将纯化后的r AAV感染HEK293细胞,通过实验确定使用感染复数为106、感染3 d的细胞能够表达出高水平的EGFP。将r AAV注射入大鼠中脑黑质致密部,经过3周的感染发现,r AAV可以特异性地感染多巴胺能神经元,表达出EGFP。通过以上实验,建立了一个在实验室小量制备r AAV的方法,且此方法制备的r AAV完全满足体内与体外实验的要求。
- 卢剑清马宏孙飞一邓玉林
- 关键词：重组腺相关病毒病毒纯化
- 瞬时受体电位通道蛋白在多功能性系统萎缩中的调控作用
- 2014年
- 多系统萎缩(multiple system atrophy,MSA)是一类神经系统退行性疾病,其病理特征是胶质细胞中出现含有不溶性α突触核蛋白(α-synuclein)的胞质包涵体.研究显示,α-synuclein在多系统萎缩的发病机制中有重要作用,但其毒性的分子机制目前还不清楚.本文在前期研究氧化应激条件下α-synuclein引起细胞内钙稳态失衡,提出了以氧化应激为连接的多系统萎缩中,胶质细胞死亡的新假说的基础上,深入分析了α-synuclein过表达导致U251细胞变性死亡的分子机制.首先证明过表达α-synuclein的U251细胞出现生长速度减慢、氧化应激水平增加和钙离子瞬时受体电位通道蛋白(transient receptor potential channel-1,TRPC1)表达量升高,而且细胞存活率的变化可通过下调TRPC1的表达得以恢复,说明TRPC1在α-synuclein过表达细胞死亡中发挥了重要作用;其次,研究发现α-synuclein稳转U251细胞中出现了明显的自噬水平增加和细胞凋亡的特征,表明α-synuclein通过作用于内质网钙泵以及细胞膜上的瞬时受体电位钙通道TRPC1,破坏了细胞内的钙稳态,进而影响自噬和凋亡,增加了U251细胞对于过氧化氢的敏感性,这可能是导致多系统萎缩病人脑内胶质细胞死亡的原因.
- 王海龙邓玉林张泽波王晨杨祖业李福涛马宏
- 关键词：Α-SYNUCLEIN钙离子通道RECEPTORRECEPTOR
- 放射性脑损伤的动物模型及神经组织放射损伤生物学系统研究被引量：2
- 2015年
- 伴随医疗科技的迅猛发展,放疗成为癌症治疗的重要手段之一,但是放疗在减轻患者痛苦的同时也会给患者造成极大的副作用,其中放射性脑损伤已经成为限制放射性疗法临床上应用的一个重要因素。本研究采用30Gy Co60-γ射线一次性照射SD大鼠头部(身体其他部位用两层铅砖遮蔽),模拟放射性脑损伤的各个时期,建立既出现典型的损伤改变又不明显影响动物生存的放射性脑损伤模型。通过观察血液中氧化应激水平、细胞因子含量,脑组织中氧化应激水平、细胞因子含量、凋亡因子含量来分析脑损伤发生的可能机制。
- 陈波唐博邓玉林马宏
- 关键词：放射性脑损伤动物模型Γ射线
