国家杰出青年科学基金(30425031)
- 作品数：20 被引量：190H指数：8
- 相关作者：焦新安潘志明黄金林刘秀梵许海燕更多>>
- 相关机构：扬州大学江苏省人兽共患病学重点实验室扬州市第一人民医院更多>>
- 发文基金：国家杰出青年科学基金国家高技术研究发展计划江苏省教育厅自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生农业科学轻工技术与工程更多>>
- 不同副溶血弧菌的分子鉴别与生长动力学模型比较被引量：6
- 2008年
- 目的探讨不同分子亚型副溶血弧菌(Vibrio parahaemolyticus,Vp)的生长动力学特征,为建立海产品中Vp预测模型提供数据。方法应用PCR和RAPD方法对5株不同来源的Vp分离株进行了分子鉴别,并对不同菌株在适宜温度(37℃)和低温(15℃)下生长变化进行了测定,采用修正的Gompertz方程拟合细菌的生长曲线,求出不同菌株的生长动力学参数并建立预测模型。结果4株食物中毒样品来源的Vp菌株基因型均为tl+tdh+trh-toxR+,1株海产品分离株为tl+tdh-trh-toxR+,筛选的随机引物P21可以将5株不同来源的Vp菌株分成5个不同的分子亚型,不同菌株37℃的世代时间在0.210~0.238h之间,延滞时间在1.705~1.849h之间,生长曲线没有显著差异(R2>0.995),应用预测模型求得各菌株的预测值与实测值均方根偏差在0.110~0.452之间;而在15℃条件下测得不同Vp菌株世代时间在0.727~1.062h之间,延滞时间在10467~12552h之间,生长曲线具有较大的变异性(R2>0.938),其中菌株VP06003和VP06127的预测值与实测值之间均方根偏差分别为...
- 杨振泉焦新安
- 关键词：副溶血弧菌分子鉴别生长动力学模型
- 口服重组沙门菌诱导的免疫应答动态分析被引量：4
- 2007年
- 以融合表达绿色荧光蛋白(Green fluorescent protein,GFP)和OVA、LCMV NP CD8^+T细胞表位的重组减毒沙门菌SL7207(ptG2F)为免疫原,经口服途径接种BALB/c小鼠,每2周加强免疫1次,分别于第2次、第3次、第4次、第5次免疫后,以ELISPOT法分别测定免疫小鼠派伊尔氏结细胞中特异性针对OVA和LCMV NP CD8^+T细胞表位的IFN-γ分泌细胞和IL-4分泌细胞。同时,运用ELISA分别检测血清、肠黏膜中的GFP特异性抗体,分析了口服重组减毒沙门菌诱导的特异性免疫应答动态规律。实验表明SL7207(ptG2F)口服免疫BALB/c小鼠后,诱导产生了LCMV NP CD8^+T细胞表位(H-2~d)特异的细胞免疫应答。在第2次免疫后,即可检测到特异性IFN-γ分泌细胞和IL-4分泌细胞;在第3次免疫后,IFN-γ分泌细胞数量明显高于IL-4分泌细胞数。然而,在第4、5次免疫后,IFN-γ分泌细胞数和IL-4分泌细胞数相当,未见明显变化。试验中未能检测到针对OVA CD8^+T细胞表位(H-2~b)的细胞免疫应答。运用ELISA方法检测到SL7207(ptG2F)、SL7207(ptGFP)免疫组GFP特异性IgG和IgA抗体,与对照组相比较,差异显著(P<0.05)。结果表明重组减毒沙门菌口服免疫可以有效运送外源抗原至宿主免疫系统,并诱导产生特异性细胞免疫应答和黏膜免疫应答。
- 张辉焦新安潘志明胡茂志唐丽华
- 关键词：减毒沙门菌ELISPOT黏膜免疫
- 减毒鼠伤寒沙门氏菌运送CD8^+ T细胞表位的细胞免疫应答被引量：18
- 2006年
- 目的:探索减毒沙门氏菌运送CD8+T细胞表位诱导机体产生特异性细胞免疫应答的规律性。方法:通过构建融合表达OVA257~264aa和LCMVNP118~132aaCD8+T细胞表位的原核表达质粒ptG2F,以电穿孔法转化减毒鼠伤寒沙门氏菌SL7207,筛选重组菌SL7207(ptG2F)。采用静脉注射免疫C57BL/6和BALB/c小鼠,间隔2wk,分别于第2次和第3次免疫后,取免疫小鼠脾细胞,用ELISPOT法检测特异性IFN-γ分泌细胞和IL-4分泌细胞。结果:携带CD8+T细胞表位的重组菌SL7207(ptG2F)能诱导产生细胞免疫应答。在提呈OVACD8+T细胞表位时,2次免疫后,诱导产生的细胞免疫应答趋向于Th1;而在3次免疫后,呈现Th1/Th2的平衡转换。在提呈LCMVNPCD8+T细胞表位过程中,Th2免疫应答水平高于Th1,且有增强趋势。结论:减毒沙门氏菌可以有效运送CD8+T细胞表位并诱导产生特异细胞免疫应答,这为减毒细菌作为运送载体的研究提供了参考依据。
- 张辉焦新安潘志明张晓明
- 关键词：减毒沙门氏菌ELISPOTTH1/TH2细胞
- 禽弯曲菌疫苗研究进展
- 弯曲菌是引起人大肠炎的主要病原菌,与人神经炎病变关系密切。禽被认为是重要的传染源,通常呈高携带率、无症状状态。疫苗被认为是控制和减少禽弯曲菌最有效、安全的方法。论文对禽弯曲菌疫苗的研究进展做一综述。
- 黄金林袁标焦新安
- 关键词：弯曲菌疫苗
- 文献传递
- 弯曲菌多重PCR检测方法的建立及其初步应用被引量：54
- 2007年
- 以16S rRNA、mapA和ceuE为靶基因,建立检测空肠弯曲菌和结肠弯曲菌的多重PCR方法。特异性试验能分别扩增出空肠弯曲菌和结肠弯曲菌的特异性条带,其他参考菌株均未扩增出条带;敏感性试验表明,基于增菌培养和选择性培养的多重PCR方法对弯曲菌检测限为10 mL或10 g模拟污染样品,最低可检测0.925 pg.μL-1空肠弯曲菌DNA和1.050 pg.μL-1结肠弯曲菌DNA。以国家标准为参照,应用该方法对180份生鲜鸡肉样品进行检测,结果表明多重PCR方法具有快速、简便、特异性强和灵敏度高等特点,可克服传统生化鉴定和血清学方法的不足,为弯曲菌检测提供新的技术。
- 何蕊黄金林许海燕苏洁潘志明焦新安
- 关键词：空肠弯曲菌多重PCR
- 禽致病性大肠杆菌未知功能基因突变株的构建及致病特性分析
- 2015年
- 采用抑制差减杂交技术(SSH)对禽致病性大肠杆菌(APEC)高致病株E037(血清型O78)与非致病菌株K-12 MG1655进行基因组差异片段克隆与分析。从E037株中共检出17个特异性差异片段,选取其中的编号为88#的基因进行突变株的构建。通过PCR扩增出88#的目的基因片段,并插入到T-easy载体的多克隆位点中,随之克隆到p MEG-375自杀性载体中,构建自杀性载体p MEG375-88#,将突变载体转化到受体APEC E037中,根据同源重组原理,筛选出E03788#基因插入突变株E037-1。对21日龄白来航SPF鸡右胸气囊分别接种E037、E037-1株0.1 mL(108cfu/mL),在6,24和48 h分别扑杀SPF鸡,无菌采集血液、心脏、肝、脾、左肺、肾进行细菌学检查,同时进行病变观察。结果显示:接种鸡6 h后,E037-1在肝、脾和肺中的细菌数比E037明显降低,差异极显著(P<0.01);接种鸡24 h后,E037-1在心脏、肝、脾和肺中的细菌数与E037比较有所降低,差异显著(P<0.05);接种鸡48 h后,E037-1在心、肝中的细菌数比E037明显降低,差异极显著(P<0.01),说明E037-1突变株的致病性明显下降。结果显示88#基因可能是APEC的致病相关基因,其功能值得进一步研究。
- 刘静徐亚亚卢炜陈祥高崧
- 关键词：禽致病性大肠杆菌抑制差减杂交
- 禽弯曲菌疫苗研究进展
- 2010年
- 弯曲菌是引起人大肠炎的主要病原菌,与人神经炎病变关系密切。禽被认为是重要的传染源,通常呈高携带率、无症状状态。疫苗被认为是控制和减少禽弯曲菌最有效、安全的方法。论文对禽弯曲菌疫苗的研究进展做一综述。
- 黄金林袁标焦新安
- 关键词：弯曲菌疫苗
- 副溶血弧菌在低温贮藏过程中的失活动力学特征被引量：6
- 2008年
- 本实验对在4℃和-20℃贮藏温度下接种于带鱼样品中的4株副溶血弧菌的失活动力学特征进行了研究,结果表明:在4℃冷藏过程中,60d贮藏期内带鱼样品中副溶血弧菌的残活细胞数降低了6.55～8.22lgCFU,在起始20d内失活速度缓慢,平均下降速率为0.06～0.1lgCFU/d,在第25～35d内失活速度变快,平均下降速率为0.16～0.2lgCFU/d,而在第35～60d的平均下降速率为0.11～0.12lgCFU/d,不同菌株之间下降速度有所差异,其中菌株Vp06001下降速度显著快于其它3个菌株(p<0.01)。在-20℃冷冻过程中,在开始5d内下降速度最快(0.39lgCFU/d),在10～60d下降速度缓慢(0.027lgCFU/d),菌株之间没有显著差异(p>0.05)。应用线性模型、Weibull模型和Log-logistic模型对残活曲线进行了拟合,通过拟合方程计算分析预测值与实测值之间的精确因子(Af)、偏差因子(Bf)、均方根差(RMSE)和相关系数平方(R2)4个评价参数,结果表明:在4℃冷藏过程中Log-logistic模型拟合的精确度显著高于线性模型和Weibull模型(p<0.01);而在-20℃贮藏温度下Weibull模型可以较好的描述Vp的失活动力学特征。
- 杨振泉焦新安
- 关键词：副溶血弧菌低温贮藏失活动力学
- 猪肉加工、流通过程中主要食源性病原细菌的监测被引量：15
- 2006年
- 猪肉安全是食品安全的一个重要组成部分,食源性病原细菌是猪肉安全的重点监测对象。选择猪肉加工、流通过程的主要环节,应用PCR技术对沙门氏菌、产单核细胞李斯特菌、空肠弯曲菌、结肠弯曲菌和大肠杆菌O157等主要食源性病原细菌进行跟踪监测。结果表明:在所监测的6个环节中,均存在不同程度的病原菌污染,其中取内脏环节污染率最高,达49%;在监测的病原菌中,结肠弯曲菌的污染率最高,平均污染率为8.4%。取内脏、冷藏和销售环节是猪肉发生病原菌交叉污染的关键点。
- 黄金林何蕊许海燕苏洁潘志明焦新安
- 关键词：猪肉
- 重组减毒大肠杆菌对真核表达的CD8^＋T细胞表位的运送研究
- 2008年
- 目的:分析体外、体内重组减毒大肠杆菌运送真核表达的CD8+ T细胞表位的效应。方法:将携带融合表达绿色荧光蛋白(GFP)与OVA CD8+ T细胞表位基因真核表达质粒的重组大肠杆菌13A(pG2F)感染抗原提呈细胞(APC)LKb和骨髓源树突状细胞(BMDC),应用体外抗原提呈试验检测APC对重组菌运送的CD8+ T细胞表位的提呈效应。同时,重组菌13A(pG2F)以静脉注射方式免疫C57BL/6小鼠,应用ELISPOT法检测特异性IFN-γ分泌细胞。结果:感染试验表明,大肠杆菌13A能向APC中运送真核表达质粒,并且外源GFP基因获得了表达。体外抗原提呈试验结果显示,在感染的早期(2小时),LKb和BMDC均可提呈重组菌13A(pG2F)运送的T细胞表位;在感染的晚期(48小时),LKb细胞对CD8+ T细胞表位的提呈效应增强。在同样的作用条件下,BMDC对减毒菌运送的抗原表位的提呈效应要强于LKb细胞。体内结果显示,大肠杆菌可以有效运送真核表达的CD8+ T细胞表位并诱导小鼠产生特异性细胞免疫应答。结论:重组减毒大肠杆菌在体外和体内均能有效运送真核表达的CD8+ T细胞表位,为基于减毒细菌的新型基因工程疫苗的分子设计提供了有益借鉴。
- 潘志明张晓明焦新安Richard Lo-ManClaude Leclerc刘秀梵
- 关键词：真核表达ELISPOT
