国家科技重大专项(2008ZX10003-004)
- 作品数：13 被引量：111H指数：8
- 相关作者：王峰桂静李庆阁张军罗道泉更多>>
- 相关机构：厦门大学深圳市慢性病防治中心厦门市疾病预防控制中心更多>>
- 发文基金：国家科技重大专项福建省自然科学基金中国全球基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 深圳地区结核分枝杆菌耐药分离株分子特征与表型特征相关性研究被引量：8
- 2010年
- 目的 研究深圳地区2007-2008年分离的结核分枝杆菌耐药株分子特征与表型特征的相关性.方法 参照WHO/IUATLD标准,使用L-J药敏培养基,1%比例法药敏试验筛选针对异烟肼、利福平、链霉素、氧氟沙星、卡那霉素5种药物耐药或敏感的临床分离株,通过PCR扩增经筛选菌株的rpoB、katG、rpsL、rrs1、gyrAB、rrs2基因的相关序列,运用DNAStar和BLASTN进行序列分析,应用二倍稀释法测定其表型最低抑菌浓度（MIC）值.结果 筛得实验菌株123株,其中耐药株73株,全敏感株50株.异烟肼耐药株katG基因突变率为84.6%,突变位点全部为S315T或S315N.利福平耐药株rpoB基因突变率为93.6%,突变位点主要集中在S531L（30/44,68.2%）和H526D（9/44,20.5%）或H526R（1/44,2.3%）.链霉素耐药株以rpsl基因突变为主,突变位点为K43R（19/27,70.4%）和K88Q（6/27,22.2%）;rrs1基因突变较少见,仅491C→T（2/27,7.4%）及513A→C（1/27,3.7%）;2个基因突变率合计为65.9%.氧氟沙星耐药株突变率为100%,以gyrA基因突变为主,突变位点包括D94A（2/11,18.2%）、S91P（4/11,36.4%）和A90V（3/11,27.3%）,3个突变位点总突变率为81.8%（9/11）;S95T存在于所有氧氟沙星耐药株及部分全敏感株gyrA基因中;gyrB未发现突变.卡那霉索耐药株rrs2基因突变率为61.1%;突变位点为1400 A→C（9/11,81.8%）和1483 G→T（2/11,18.2%）.其他突变位点在全敏感株中未发现.临床耐药株同一耐药组别所包含耐药类型不同,相关耐药基因的突变位点相同,其MIC值基本一致;相关耐药基因突变位点不同,其MIC值存在明显差异.结论 结核分枝杆菌耐药基因突变存在一定的地域特性,表型特征因耐药基因突变位点不同存在耐药程度差异.
- 桂静王峰李金莉罗道泉姚立泰
- 关键词：结核分枝杆菌耐药聚合酶链反应分子特征
- PCR-探针熔解分析法检测结核分枝杆菌利福平耐药性的临床应用被引量：5
- 2012年
- 目的评价PCR-探针熔解分析法(probe melting analysis assay,PMAA)检测结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis,MTB)对利福平(rifampin,RFP)耐药性的临床应用价值。方法采用常规比例法和PCR-PMAA对512株MTB临床分离株进行RFP药敏试验,并进行RFP耐药相关基因rpoB DNA测序。结果以常规比例法为标准,PCR-PMAA检测RFP耐药性的敏感性、特异性分别为97.5%、96.2%,阳性和阴性预测值分别为94.1%、98.4%、符合率及约登指数分别为96.7%及0.93。193株比例法和PCR-PMAA两法检测均耐药的菌株,经DNA测序证实174株rpoB基因RFP耐药决定区(RFP resistance determining region,RRDR)发生单位点密码子突变,19株RRDR发生不同组合型的双位点密码子联合突变;5株比例法检出耐药、PCR-PMAA敏感的菌株,DNA测序rpoB基因未见突变;12株比例法检出敏感、PCR-PMAA耐药的菌株,DNA测序证实其中7株511位点密码子突变,5株533位点密码子突变;302株两法检测均敏感菌株DNA测序结果未见rpoB耐药相关的基因位点突变。PCR-PMAA检测MTB临床分离株rpoB基因突变结果与DNA测序结果完全一致。结论 PCR-PMAA法能高效检出MTB对RFP耐药的相关基因突变,用于检测MTB对RFP耐药性的敏感性高、特异性强,方法简便、快速、价廉,具有良好的临床应用前景。
- 李国利李庆阁王倩张灵霞
- 关键词：结核分枝杆菌利福平耐药基因突变
- 结核分枝杆菌相关γ-干扰素体外释放试验在结核病诊断中的应用价值被引量：5
- 2011年
- 目的探讨结核分枝杆菌相关γ-干扰素体外释放试验(TB-IGRA)在结核病诊断中的应用价值。方法用国产TB-IGRA试剂定量检测268例结核病患者和104例体检健康者外周血结核特异性γ-干扰素的含量,同时与澳大利亚QFT-GIT试剂和结核菌素纯化蛋白质衍生物(PPD)皮试进行平行比较分析。结果国产TB-IGRA试剂、QFT-GIT试剂和PPD皮试3种方法的敏感性分别为90.7%、88.1%和75.4%,特异性分别为76.9%、80.8%和54.8%,阳性预测值分别为91.0%、92.2%和81.1%,阴性预测值分别为76.2%、72.4%和46.3%,准确性分别为86.8%、86.0%和69.6%。三种方法对肺结核与肺外结核的检测效果无显著差异。结论 TB-IGRA法对诊断结核病有较高的敏感性和准确性,在结核病防控中有较好的应用价值。
- 李晓非熊俊辉汪亚玲朱莉莉吕松琴张军
- 关键词：结核分枝杆菌结核病
- 实时聚合酶链反应熔解曲线法快速检测耐多药结核分枝杆菌被引量：9
- 2011年
- 目的应用实时PCR熔解曲线法快速检测MTB对利福平和异烟肼的耐药性，并与比例法检测结果进行比较。方法收集深圳市2007--2009年耐药监测项目、全国耐药基线调查项目和深圳市慢性病防治中心门诊患者临床分离株311株，采用实时PCR熔解曲线法检On,0rpoB基因耐药突变热点区、ahpC启动子区（硝～30及-15～-3位点）、inhA启动子区（-7～-8位点）、inhA94和katG315位耐药突变，并与耐药基因测序及表型药敏试验结果进行比较。以比例法药敏试验结果作为MTB药敏试验的金标准，评价实时PCR熔解曲线法的敏感度、特异度与金标准的符合率。结果实时PCR熔解曲线法2～3h即可完成检测，扩增和结果判定在1个反应管内完成。检测利福平耐药的敏感度为97．8％，特异度为97．1％，准确性为97．4％；检测异烟肼耐药的敏感度为86．6％，特异度为98．7％，准确性为92．6％。对耐多药MTB的检测敏感度为88．6％，特异度为100．O％，重复性为100．0％。结论实时PCR熔解曲线法检测MTB对利福平和异烟肼耐药性，与比例法检测结果比较具有很好的一致性，且具有快速、准确的优点，有较好的临床应用价值。
- 王峰崔运勇胡思玉桂静杨慧李庆阁刘小立
- 关键词：利福平异烟肼聚合酶链反应
- 肺炎克雷伯菌泛耐药株的质粒耐药元件研究被引量：13
- 2015年
- 目的通过对泛耐药肺炎克雷伯菌JM45的质粒1(p JM45-1)耐药元件分析,从基因组水平研究其泛耐药的遗传学基础。方法采用第二代高通量测序技术平台进行全基因组测序,生物信息学方法分析p JM45-1质粒的耐药元件,并与已在NCBI登录的质粒序列作聚类分析(Fast Minimum Evolutin法)。结果 p JM45-1质粒大小为317 156 bp,功能注释分析发现该质粒为可接合转移质粒,携带了抗菌药物耐药编码基因、重金属离子耐受编码基因、毒素编码基因和转座子以及插入序列等83个耐药相关编码基因。p JM45-1质粒与耐药质粒R100(登录号:AP000342.1)的全长94 281个序列中的45 995个序列有99%相同;与接合性质粒F质粒(登录号:AP001918.1)的全长99 159个序列中的8322个序列有87%相同。p JM45-1质粒与源自肺炎克雷伯菌的质粒在同一簇(cluster),与源自其他肠杆菌的质粒不在一个簇。结论肺炎克雷伯菌JM45 p JM45-1质粒携带大量耐药元件,是该菌株进化为泛耐药的主要原因。p JM45-1是可接合转移质粒,可将耐药基因在细菌间进行水平转移,造成耐药菌的播散。
- 朱健铭姜如金吴康乐翁幸鐾孔海深
- 关键词：肺炎克雷伯菌质粒泛耐药全基因组测序转座子
- 探针熔解曲线法快速检测结核分枝杆菌注射类二线药耐药突变被引量：7
- 2015年
- 目的评价结核分枝杆菌注射类二线药耐药突变检测试剂盒MeltPro TB/SL的分析性能以及临床性能。方法首先使用企业参考品对试剂盒的突变检出能力进行考察,之后将野生型基因组DNA以10倍梯度稀释后考察试剂盒的最低检测限,使用野生型质粒以及含常见耐药突变的质粒以不同突变比例混合考察试剂盒检测不均一耐药样本的能力,并使用23株非结核分枝杆菌标准株考察试剂盒的分析特异性,最后使用241份临床分离株对试剂盒进行临床评价。结果该试剂盒可以将9种耐药相关突变与1种野生型多态性与野生型进行区分。可以检测到低至5个拷贝的野生型基因组DNA。当突变比例为30%或更高时,试剂盒可以将其与野生型进行区分。23种非结核分枝杆菌的结果显示该试剂盒有良好的特异性。和比例法药敏试验进行对比,该试剂盒的临床灵敏度为卡那霉素90.0%(9/10),阿米卡星80.0%(8/10),卷曲霉素85.7%(6/7);特异性为卡那霉素98.8%(85/86),阿米卡星98.8%(85/86),卷曲霉素96.6%(86/89)。试剂盒检测结果与测序结果一致。结论该试剂盒灵敏度高、特异性好,可以快速、准确地检测结核分枝杆菌注射类二线药常见的耐药突变,有望应用于临床。
- 张婷付军王国治陈保文杨蕾卢锦标许晔李庆阁
- 关键词：结核分枝杆菌耐药突变
- 深圳市结核分枝杆菌异烟肼耐药流行株的基因分析被引量：2
- 2010年
- 异烟肼（INH）和利福平（RFP）是抗结核药中的一线药物,近年来出现了大量耐药结核分枝杆菌,在中国INH-耐药率高达17.6%[1].INH耐药相关的最主要基因为katG,其次为inhA、ahpC和inhA94.为了解深圳地区INH耐药流行株的主要基因突变类型,本研究对深圳地区303株结核分枝杆菌的katG、inbA、oxyR-ahpC基因进行序列分析.
- 崔运勇王峰刘小立桂静胡思玉杨慧
- 关键词：结核分枝杆菌耐药异烟肼
- 体外释放酶联免疫法检测结核杆菌γ-干扰素的实验研究被引量：13
- 2011年
- 目的:研究体外释放酶联免疫法检测结核分枝杆菌相关γ-干扰素定量试验对结核病的诊断价值。方法:收集2008年7月-2010年10月来盐都区疾病控制中心结核病诊疗门诊就诊的肺结核、疑似肺结核及肺外结核患者共883人,采用体外释放酶联免疫法定量检测结核分枝杆菌相关γ-干扰素,判断是否感染结核分枝杆菌。结果:TB-IGRA在痰菌涂片阳性肺结核、临床诊断肺结核、肺外结核病例中检出率分别为89.11%、84.48%、85.71%,检测结果的特异性为91.57%。结论:TB-IGRA检测可作为结核分枝杆菌感染诊断的一种常规实验方法,且TB-IGRA的动态检测对抗结核治疗效果具有较好的评价作用。
- 王荣堂陈春梅朱晓华葛胜祥王剑甦张宏兰袁中杭符美娟
- 关键词：体外释放酶联免疫法Γ-干扰素结核分枝杆菌
- 218例涂阳肺结核吡嗪酰胺耐药情况分析被引量：12
- 2012年
- 目的分析肺结核患者对吡嗪酰胺的耐药情况,为防治提供参考。方法采用WHO推荐的BACTEC MGIT-960系统法对218例涂阳肺结核进行吡嗪酰胺耐药性检测分析。结果 218例涂阳肺结核中耐吡嗪酰胺39例(17.9%)。其中163例初治患者耐吡嗪酰胺23例(14.1%),55例复治患者耐吡嗪酰胺16例(29.1%);91例耐多药((multi-drug-resistant,MDR)患者耐吡嗪酰胺36例(39.6%),127例非MDR患者耐吡嗪酰胺3例(2.4%)。复治患者吡嗪酰胺耐药率明显高于初治患者(P<0.05),MDR患者吡嗪酰胺耐药率明显高于非MDR患者(P<0.01)。结论 MDR肺结核耐吡嗪酰胺率较高,应重视对MDR肺结核的吡嗪酰胺耐药性检测,以便采用更合理有效的方案治疗之。
- 梁庆福郑金凤陈求扬林淑芳魏淑贞赵永林建
- 关键词：肺结核耐药性吡嗪酰胺
- γ-干扰素体外释放试验在结核性脑膜炎诊断中的应用被引量：12
- 2012年
- 目的:探讨体外干扰素释放试验对结核性脑膜炎诊断的意义。方法:检测结核性脑膜炎组32例,非结核性脑膜炎组56例(包括化脓性脑膜炎33例,病毒性脑膜炎23例)病人外周血中体外干扰素释放水平,同时与脑脊液抗结核抗体、脑脊液抗酸染色、核酸检测、PPD及脑脊液抗酸杆菌培养结果进行比较。结果:经比较体外干扰素释放试验对结核性脑膜炎检测敏感度达87.5%,均高于其它几种方法,并且具有较高特异性,且阳性似然比为9.83,正确诊断指数达78.6%。结论:体外干扰素释放试验是一种可辅助结核性脑膜炎诊断的方便、快速、有效的方法。
- 钱福初何建方沈轶群秦基取王伟洪杨水新戴利成
- 关键词：结核性脑膜炎
