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猪感染肺炎支原体后肺组织TLR2、TLR4及促炎症因子TNF-α、IL-1β基因表达的变化被引量：8: 2011年; Toll样受体(TLR)作为一种重要的模式识别受体,在动物的天然免疫中发挥重要作用,是机体抵抗感染的第1道屏障。该研究通过建立猪肺炎支原体感染模型,探讨猪感染肺炎支原体后肺组织TLR2、TLR4及促炎症因子TNF-α、IL-1βmRNA的表达及意义。选取80日龄无注射气喘病疫苗苏钟猪14头,随机分为攻毒组和对照组,攻毒组气管内注射猪肺炎支原体组织强毒,对照组气管内注射灭菌生理盐水。感染后观察临床症状,攻毒后18 d时X射线透视猪肺部,记录体重;攻毒后28 d时检测抗体,记录体重,扑杀剖检,采集肺脏。应用Real-time PCR方法检测肺组织TLR2、TLR4及TNF-α、IL-1βmRNA的表达变化。结果显示:猪感染肺炎支原体后,生长缓慢,体重下降;X射线透视,肺部出现典型阴影;攻毒组猪出现典型的病理变化;TLR2、TLR4及TNF-α、IL-1β表达显著升高(P<0.05)。表明:猪肺炎支原体感染后TLR2、TLR4及促炎症因子TNF-α、IL-1β表达量增加,导致肺部炎症;猪肺炎支原体感染与TLR2、TLR4的变化有密切联系,启示肺炎支原体可能通过TLR信号传导通道。; 刘筱方晓敏邹晓龙赵芳孟翠任守文; 关键词：肺炎支原体 TLR 促炎因子基因表达肺部炎症

去乙酰化酶SIRT1及其对细胞凋亡调控的研究进展被引量：3: 2012年; 细胞凋亡在机体生理功能中起着重要作用,是机体清除体内损伤、衰老及具有潜在威胁性细胞的一种基本方式。沉默信息调节因子2相关酶1(silent information regulator 2homolog 1,SIRT1)作为哺乳动物Sirtuin家族的一员,自发现以来作为重要的调控因子被广泛研究;最近研究报道SIRT1调控一系列转录因子如p53、FOXO家族和NF-κB,在细胞凋亡中起关键的作用。作者主要阐述了SIRT1的分子生物学特性、表达调控及SIRT1与细胞凋亡的关系。; 赵芳李碧侠任守文刘红林王学敏方晓敏; 关键词：细胞凋亡 SIRT1

猪SIRT1基因荧光定量PCR检测方法的建立被引量：5: 2011年; SIRT1基因对细胞的生存、衰老、凋亡等生理活动起着十分重要的调节作用。为了建立荧光定量PCR技术检测猪SIRT1基因表达量,根据GenBank中猪SIRT1 mRNA序列设计引物,建立基于SYBR Green I染料技术的荧光定量PCR检测方法。结果表明,所建立的荧光定量PCR检测方法具有快速、敏感和特异性强等特点,为猪SIRT1基因定量分析提供了技术平台。; 李碧侠赵芳任守文王学敏方晓敏; 关键词：SIRT1 荧光定量PCR

猪Toll样受体4基因(TLR4)外显子SNP检测及生物信息学分析被引量：3: 2011年; Toll样受体4(Toll-like receptor 4,TLR4)是天然免疫系统识别病原微生物的主要受体,其多态性与动物对相关病原的免疫力有着明显的相关性。为了对猪TLR4基因进行多态性分析,试验采用PCR-SSCP结合核苷酸测序法研究了梅山猪、二花脸猪、苏钟猪、姜曲海猪、淮猪、金华猪、大约克猪、皮特兰猪及金华与皮特兰杂交F2代猪(JPF2)9个群体共90个样本TLR4基因外显子序列的单核苷酸多态性,并对猪TLR4基因进行了生物信息学分析。结果检测到4个突变:G400A、G962A、C1027A、G960A,其中前3个为有义突变,且C1027A突变引起编码氨基酸性质的改变;生物信息学分析表明猪TLR4基因含有一个2 526 bp的开放阅读框,编码841个氨基酸;序列比较发现猪与牛、绵羊、人和小鼠TLR4基因cDNA序列相似性分别为87%、86%、79%、73%,编码的氨基酸序列相似性分别为81%、80%、73%、64%。TLR4基因多态性检测结果表明猪TLR4基因的单核苷酸多态性在中外猪种中存在明显差异,结合生物信息学分析推测该基因编码蛋白质LRR(富含亮氨酸重复序列)功能域上的突变可能与猪种对疾病的易感性不同有关。; 刘筱方晓敏任守文李碧侠王学敏; 关键词：TOLL样受体4 SNP 生物信息学

苏钟猪TLR4多态性及编码区C1027A功能分析被引量：2: 2012年; 【目的】研究苏钟猪TLR4的多态性及其编码区第1 027 bp处突变对TLR4蛋白功能的影响。【方法】采用PCR-SSCP的方法检测TLR4在苏钟猪中的多态性并利用real-time PCR方法检测不同基因型(CC型和AC型)的猪肺泡巨噬细胞经脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)诱导后,TLR4及促炎症因子TNF-α、IL-1β表达量的变化情况,探讨该处突变对TLR4识别LPS的影响。【结果】①共检测到3个突变:G962A、C1027A、G960A,其中前两个为有义突变,且C1027A突变可引起编码氨基酸性质的改变;②LPS能快速诱导猪肺泡巨噬细胞中TLR4及促炎症因子TNF-α和IL-1β表达水平上调且TLR4编码区C1027A不同基因型(CC型和AC型)的猪肺泡巨噬细胞(pulmonary alveolar macrophages,PAMs)对LPS的敏感性及反应强度存在显著性差异。【结论】苏钟猪TLR4编码区的序列相对保守、多态含量较低,群体遗传变异程度较小。TLR4编码区C1027A突变能影响TLR4识别LPS的能力,等位基因C为苏钟猪抗革兰阴性菌感染的优势基因。; 刘筱方晓敏邹晓龙赵芳任守文; 关键词：苏钟猪 PCR-SSCP LPS TNF-Α IL-1Β

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转基因生物新品种培育专项(2009ZX08009-153B)