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幽门螺杆菌hp0521基因编码蛋白的生物信息学分析被引量：1: 2016年; 目的:对4株幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,Hp)中hp0521基因编码的细胞毒素相关基因2(cytotoxin-associated gene 2,Cag2)蛋白从生物信息学角度进行基本理化性质、信号肽及功能的预测分析。方法:用PCR技术克隆测序获得4株Hp菌株的hp0521基因序列,生物信息学工具分析其编码Cag2蛋白的基本理化性质、有无信号肽及蛋白指纹图谱。结果:成功克隆测序4株Hp菌株的hp0521基因序列,提交基因库后获得相应登录号;hp0521基因编码的Cag2蛋白氨基酸数目和相对分子质量大小不同,理论等电点偏碱性,为稳定亲水性蛋白,不存在信号肽;Cag2蛋白指纹图谱分析存在DNA拓扑异构酶Ⅰ、IL-3细胞因子、抗增殖蛋白BTG1家族、介导细胞壁延伸的蛋白、卤酸脱卤酶/环氧水解酶、调节染色体凝集功能RCC1家族等蛋白标签。结论:Hp中hp0521基因编码的Cag2蛋白可能介导细胞壁延伸和调节染色体凝集,参与致病信号通路的传导,可能具有DNA拓扑异构酶Ⅰ、卤酸脱卤酶/环氧水解酶等相应酶活性。; 沈以新倪颖徐青青凃晶晶沈楚莹李欣悦邵世和; 关键词：幽门螺杆菌 CAG致病岛生物信息学

幽门螺杆菌Ⅳ型分泌系统cagQ基因缺失株的构建与鉴定被引量：1: 2014年; 目的:构建幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,H.pylori)Ⅳ型分泌系统cag Q基因缺失株。方法:通过PCR扩增出cag Q基因编码区侧翼同源臂序列,经TA克隆后进行双酶切,并将纯化后上下游同源臂连接至两端含有卡那霉素抗生素基因的载体p Bluscript SK II(-),构建为cag Q基因自杀质粒。利用电穿孔法将自杀质粒导入H.pylori,进行同源重组。培养后通过卡那霉素抗生素筛选出基因缺失株,并经PCR及核酸序列分析进一步确定基因缺失株。结果:H.pylori的cag Q基因自杀质粒p Blue KM40-△cag Q经酶切验证无误,进行电转化后经PCR及核酸序列分析结果正确。结论:成功获得H.pylori cag Q基因缺失株,命名为Hp26695-△cag Q。; 姚逸正王华倪颖沈以新徐驰孙凤英邵世和; 关键词：幽门螺杆菌 CAG Q 基因缺失株

酸浆水煎液抑制人胃癌BGC-823细胞增殖: 2016年; 目的:观察酸浆水煎液对胃癌BGC-823细胞增殖的影响并探讨其机制。方法:将对数生长期的BGC-823细胞随机分为对照组、1.562 5、3.125、6.25、12.5、25 g/L实验组,分别用空白培养基和对应浓度酸浆水煎液培养24,48,72 h,倒置显微镜观察各组细胞生长状况和形态;MTT法检测各组细胞增殖活性;分别用3.125,6.25,12.5 g/L酸浆水煎液培养BGC-823细胞24,48 h,采用流式细胞术分析各组细胞周期。结果:对照组细胞排列紧密、形态规则,随酸浆水煎液浓度增加和作用时间延长,实验组BGC-823细胞逐渐出现接触松散,变圆变小,数量减少等生长抑制现象,12.5,25 g/L实验组变化明显;与对照组相比,不同浓度酸浆水煎液组细胞存活率明显降低(P<0.05);3.125,6.25,12.5 g/L酸浆水煎液作用细胞24,48 h后,G_2期细胞比例较对照组明显升高(P<0.05),且呈时间和浓度依赖性。结论:酸浆水煎液抑制胃癌BGC-823细胞增殖,且呈时间和浓度依赖性,其机制可能与细胞周期阻滞于G_2/M期有关。; 倪颖徐青青凃晶晶张嘉文沈楚莹王梦茹邵世和; 关键词：人胃癌BGC-823细胞增殖抑制

幽门螺杆菌cag1基因缺陷株的构建与鉴定被引量：1: 2013年; 目的:构建幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,H.pylori)细胞毒素相关基因致病岛(cytotoxin associated gene pathogenicity island,cag PAI)中的第1个编码基因hp0520/cag1基因缺陷株,为进一步研究cag1基因在cag PAI中的功能奠定基础。方法:使用同源重组技术,通过PCR扩增出cag1基因两侧同源臂序列,酶切纯化后分别连接于带卡那霉素抗性标志的载体两端,构建成cag1基因自杀质粒。将该质粒通过电穿孔导入受体野生株中,通过抗性筛选与PCR验证得到cag1基因缺陷株,与人胃上皮GES-1细胞共培养后,与野生株比较,观察细胞形态变化。结果:成功敲除H.pylori cag1基因,获得cag1基因缺陷株;与野生株相比,cag1基因缺陷株破坏细胞的能力降低。结论:成功获得幽门螺杆菌cag1基因缺陷株;cag1基因缺失后H.pylori对GES-1细胞的毒力减弱。; 凌峰王晓春陈珵余敏朱虹罗彩凤邵世和; 关键词：幽门螺杆菌基因缺陷

幽门螺杆菌CagL蛋白单克隆抗体的制备与鉴定被引量：1: 2013年; 目的:制备幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,H.pylori)CagL蛋白单克隆抗体(monoclonal antibody,mAb),并鉴定其特性。方法:用原核表达并纯化的CagL融合蛋白免疫BALB/c小鼠,6周后取小鼠脾细胞与骨髓瘤细胞融合,经亚克隆筛选获得阳性杂交瘤细胞株;ELISA法鉴定mAb的亚型;间接ELISA法测定杂交瘤细胞培养上清和腹腔积液效价及其相对亲和力;相加ELISA法分析mAb的识别表位;蛋白质印迹法鉴定mAb特异性;冻溶法检测杂交瘤细胞株的稳定性。结果:获得3株能稳定分泌抗CagL的杂交瘤细胞株,其中两株单抗属IgM类,一株单抗属IgG2a类,轻链型别均为κ型;杂交瘤细胞培养上清效价在1∶64～1∶128之间,腹腔积液的效价均达1∶16 000以上;相对亲和力较高;3株mAb识别3种不同的抗原表位;3株mAb都能与融合蛋白反应,其中两株能与H.pylori全菌蛋白发生特异性反应;杂交瘤细胞经冻存复苏后,体外传代仍能稳定分泌mAb。结论:成功制备了抗H.pylori CagL蛋白的单克隆抗体,为深入研究幽门螺杆菌CagL蛋白的功能和Ⅳ型分泌系统的致病机制奠定了基础。; 朱虹陈珵凌峰邵晨余敏邵世和; 关键词：幽门螺杆菌单克隆抗体杂交瘤

幽门螺杆菌cag致病岛CagⅠ蛋白的生物信息学分析被引量：1: 2014年; 目的用生物信息学分析方法对幽门螺杆菌(HP)cag致病岛中的CagⅠ蛋白进行综合分析,推断其结构和功能,并探索其在HP致病中的作用。方法用antherprot V5.0软件和网络数据库等分析预测其结构,BLAST程序搜索其同源序列;用PROSITE SCAN和Fingerprint服务器分析推测其潜在的功能。结果 CagⅠ蛋白有361个氨基酸残基,分子量(Mr)为39 370,理论等电点为5.56;N'端20个氨基酸残基为信号肽,有三段跨膜区,二级结构和三级结构中螺旋结构为主体(约80%);CagⅠ为稳定的疏水蛋白,保守性很强,有N-糖基化作用位点、蛋白激酶C磷酸化位点、酪蛋白激酶Ⅱ磷酸化位点和豆蔻酰化作用位点;存在膜蛋白、菌毛蛋白、转运蛋白、ATP/GTP酶、转录调节因子、分泌系统蛋白等多个蛋白质标签。结论 CagⅠ蛋白定位于HP外膜,是Ⅳ型分泌系统重要组成蛋白质,在信号转导和物质转运过程中充当信使或载体,可能具有水解酶及ATP/GTP酶活性。; 谢立苹姚逸正朱虹徐驰田树伟梁广舒倪颖邵世和; 关键词：幽门螺杆菌 CAG致病岛生物信息学功能分析

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