天津市卫生局科技基金(2012KR07) 作品数:4 被引量:10 H指数:2 相关作者: 吴静超 王金环 冯学泉 徐新女 刘俊 更多>> 相关机构: 天津市环湖医院 天津市第一中心医院 天津市第四中心医院 更多>> 发文基金: 天津市卫生局科技基金 国家自然科学基金 天津市应用基础与前沿技术研究计划重点项目 更多>> 相关领域: 医药卫生 更多>>
Src蛋白及其抑制剂与肿瘤关系的研究进展 被引量:5 2012年 随着细胞内信号通路的研究进展,肿瘤分子靶向治疗逐渐成为研究的热点。Src蛋白与肿瘤的关系十分密切,在多种肿瘤细胞中高度活化和/或过量表达,与体内的多条信号通路相联系,可被多条信号转导途径所激活,并能够促进肿瘤的发生和发展。因此,达沙替尼、塞卡替尼、博舒替尼等Src蛋白的抑制剂在肿瘤中的作用逐渐引起人们的关注。 吴静超 王金环 冯学泉关键词:SRC 肿瘤 信号通路 阻断剂 bFGF与IL-6/STAT3信号通路在胶质瘤细胞中的作用关系研究 被引量:6 2014年 目的 探讨碱性成纤维细胞生长因子(bfGf)与IL-6/STAT3信号通路在胶质瘤细胞中的作用关系。方法将U251细胞分为对照组、空载组和实验组,空载组和实验组按感染复数(multiplicity of infection,MOI)=100分别进行空载体腺病毒(Ad-GFP)和含有bFGF小分子干扰RNA的重组腺病毒(Ad—bFGF—siRNA)转染,通过Westernblot方法检测相关蛋白的表达,并应用ELISA方法检测细胞上清液中IL-6的水平变化。结果实验组细胞经转染Ad-bFGF-siRNA后,Westernblot结果显示,与对照组和空载组相比pSTAT3(TyrT05)和pSTAT3(Ser727)表达下降,呈时间依赖性,同时STAT3上游的激酶pERKl/2、pJAK2、Src及下游的效应蛋白CyclinDl、Bcl—xl表达均降低;ELISA法检测细胞上清液中IL-6的水平显示,实验组上清液中IL-6浓度与对照组和空载体组相比明显降低,差异均有统计学意义(P〈0.05)。结论腺病毒介导的bFGF小干扰RNA通过抑制IL-6的分泌,减少了胶质瘤U251细胞系的STAT3信号通路的活化,包括抑制上游的调节激酶JAK2、ERK及下游的效应分子CyclinDl和Bcl—xl的表达。 冯学泉 刘俊 王金环 徐新女 张飚 吴静超 刘宏胜关键词:成纤维细胞生长因子 白细胞介素6 胶质瘤 靶向信号转导和转录活化因子3的小干扰RNA与塞卡替尼联合治疗胶质瘤 2014年 目的 观察携带靶向信号转导和转录活化因子3(STAT3)的小分子干扰RNA(siRNA)重组慢病毒(LV-STAT3 siRNA)与塞卡替尼(AZD0530)联合治疗在体内外抑制胶质瘤生长的效果.方法 以人脑胶质瘤U87、U251细胞株和U87细胞BALB/c-nu裸鼠动物模型为研究对象,分为阴性对照组、空载体组、LV-STAT3 siRNA组、AZD0530组和LV-STAT3 siRNA与AZD0530联合治疗组.在体外实验中应用细胞计数试剂盒(CCK-8)方法检测细胞增殖,应用流式细胞仪检测细胞凋亡.在体内实验中,应用小动物活体成像技术动态监测肿瘤生长,3周后处死裸鼠,行免疫组织化学染色.结果 体外实验中联合治疗组对U87和U251细胞增殖的平均抑制率分别达28.60%、36.36%(P<0.05);在U87细胞中,联合治疗组凋亡率最高[(55.28±1.59)%],其次为LV-STAT3siRNA组和AZD0530组[(46.38±1.76)%、(35.39±1.23)%],3组之间差异有统计学意义(P<0.05),在U251细胞中结果类似;体内实验中,第1周时LV-STAT3 siRNA组(8.05±1.09)、AZD0530组(7.54±1.07)和联合治疗组(7.19 ±0.73)发光值低于空载体组(11.14±1.59),差异有统计学意义(P<0.05);第2周,AZD0530组(79.63 ±8.25)和空载体组(92.23±17.34)吸光度(A)值差异无统计学意义(P>0.05),LV-STAT3 siRNA组(63.78 ±13.46)和联合治疗组(61.57 ±7.84)A值低于AZD0530组和空载体组,差异有统计学意义(P<0.05).免疫组织化学显示,磷酸化STAT3和B细胞淋巴瘤/白血病-2(bcl-2)蛋白在阴性对照组、空载体组和AZD0530组的表达量分别约是LV-STAT3 siRNA组和联合治疗组的3、4倍(P<0.05).结论 体外实验中联合治疗产生明显的协同抑瘤作用;体内实验中LV-STAT3 siRNA抑瘤效果显著,AZD0530效果不理想. 李家林 尚超 冯学泉 吴静超 徐新女 刘宏胜 刘俊 张飚 王金环关键词:小干扰RNA 慢病毒 胶质瘤 腺病毒介导靶向碱性成纤维细胞生长因子siRNA载体的构建及鉴定 2014年 目的构建一种高效"沉默"碱性成纤维细胞生长因子的小干扰RNA重组腺病毒载体,并为该载体在基因研究中提供相关资料。方法设计、合成优选的靶向bFGF特异性siRNA序列。采用限制性内切酶消化和T4 DNA连接酶连接的方法,将bFGF-siRNA序列克隆至腺病毒穿梭质粒pGStrack上,然后将重组穿梭质粒pGStrack-bFGF-siRNA和腺病毒骨架质粒pGSadeno体外LR位点进行特异性重组,将bFGF-siRNA基因转移至腺病毒骨架质粒pGSadeno上,最后重组骨架质粒pGSadeno-bFGF-siRNA。鉴定正确后经Pac Ⅰ酶切,转染HEK 293细胞,包装成重组腺病毒rAd5-bFGF-siRNA。同时在HEK 293细胞中进行病毒扩增,利用PCR方法对重组腺病毒进行鉴定,用微量全细胞病变法检测腺病毒滴度,用Western blot方法验证所构建载体作用效果。结果 PCR鉴定重组腺病毒rAd5-bFGF-siRNA构建成功;扩增后检测腺病毒滴度约为5×108 PFU/ml,Western blot结果显示目的基因蛋白沉默效率大于90%。结论应用LR重组法能成功构建携带靶向bFGF基因的siRNA重组腺病毒,该载体转染胶质瘤U251细胞株后目的基因蛋白沉默效率较高,为进一步的相关研究奠定可靠的基础。 刘家美 刘俊 冯学泉 徐新女 刘宏胜 张飚 吴静超 王金环关键词:碱性成纤维细胞生长因子 腺病毒 小分子干扰RNA