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高表达AQP7改善3T3-L1脂肪细胞胰岛素抵抗的机制研究被引量：3: 2013年; 目的探讨脂肪细胞中水通道蛋白7（AQP7）表达与胰岛素抵抗的关系。方法培养3T3-L1前体脂肪细胞，诱导分化为成熟的脂肪细胞，并用地塞米松（DXM）处理建立胰岛素抵抗模型。构建Ad—AQP7重组腺病毒，转染胰岛素抵抗的脂肪细胞，检测AQP7表达水平的改变与脂肪细胞甘油释放水平、葡萄糖代谢能力以及磷酸化PKB表达改变的关系，从而阐明AQP7改善胰岛素抵抗的可能机制。结果100nmol／LDXM作用分化成熟的脂肪细胞诱导胰岛素抵抗，48h后P—PKB水平和葡萄糖消耗量明显减少（P〈0．01），为胰岛素抵抗的最佳状态。胰岛素抵抗状态下AQP7mRNA和蛋白水平明显减少（均P〈0．01）。Ad—AQP7腺病毒转染胰岛素抵抗的脂肪细胞72h，随着AQP7表达增加，培养基中甘油释放浓度增加．胰岛素刺激下的p-PKB水平呈现同样上升趋势，并且葡萄糖代谢能力得到明显改善。结论AQP7可能参与胰岛素抵抗的分子机制；高表达AQP7可改善胰岛素抵抗，其机制可能与PKB信号通路改善有关。; 谷雪梅沈飞霞潘伟叶菁顾雪疆倪连松李卫平林迪妮; 关键词：胰岛素抵抗蛋白激酶B

大鼠AQP7基因重组腺病毒载体的构建及其在3T3-L1脂肪细胞中的表达被引量：1: 2012年; 目的:构建携带大鼠AQP7基因的腺病毒载体,并检测其在3T3-L1脂肪细胞中的表达。方法:采用RT-PCR方法,从大鼠脂肪组织中扩增克隆大鼠AQP7基因,插入到穿梭质粒中获得重组质粒pDC316-AQP7。PCR、酶切鉴定后,重组穿梭质粒和骨架质粒经脂质体2000转染293细胞出毒产生重组腺病毒。经PCR进行鉴定,转染293细胞扩增并纯化,半数组织培养感染剂量(TCID 50)方法测定腺病毒滴度。体外转染分化成熟的3T3-L1细胞,用Western blot方法检测AQP7的表达水平。结果:PCR、酶切及测序证实重组穿梭质粒构建正确。同时成功构建AQP7重组腺病毒,并制备出高滴度的病毒保存液,可以有效转染3T3-L1细胞。结论:成功构建了含大鼠AQP7基因的重组腺病毒载体且其可以在3T3-L1细胞中有效表达,为今后更好地研究AQP7在肥胖发生发展过程中的调控机制奠定了基础。; 潘伟谷雪梅沈飞霞; 关键词：重组腺病毒 3T3-L1细胞

3T3-L1脂肪细胞水通道蛋白7对胰岛素信号通路的影响被引量：1: 2017年; 目的探讨3T3-L1脂肪细胞水通道蛋白7(AQP7)的表达对胰岛素信号通路的影响,寻求改善胰岛素抵抗的新途径。方法体外培养3T3-L1脂肪细胞,以油红O染色鉴定分化成熟的脂肪细胞。以肿瘤坏死因子-α(TNF-α)处理脂肪细胞,检测葡萄糖代谢能力以及培养基中甘油浓度的变化;同时分别用荧光定量聚合酶链反应(Real-time PCR)和蛋白免疫印迹法(Western Blot)分析AQP7的表达水平。以腺病毒为载体高表达AQP7,检测胰岛素信号通路上胰岛素受体底物1(IRS-1)、蛋白激酶B(PKB)及其磷酸化蛋白水平的改变,从而阐明AQP7表达与胰岛素抵抗的关系。用SPSS 17.0软件进行统计学分析,两组计量资料的比较用独立样本t检验,多组计量资料的比较用单因素方差分析。结果 TNF-α作用分化成熟的脂肪细胞24 h构建胰岛素抵抗模型,与空白对照组比较,葡萄糖代谢水平下降50%,甘油浓度减少35%,而AQP7 m RNA及蛋白水平分别下调了75%和28%,差异均有统计学意义(P<0.01,P<0.05)。在胰岛素抵抗状态下,胰岛素刺激下的PKB磷酸化蛋白(p-PKB)、IRS-1酪氨酸632磷酸化蛋白(p-tyr632)及IRS-1总蛋白表达受到抑制,而IRS-1丝氨酸307磷酸化蛋白(p-ser307)异常升高,差异均有统计学意义(P<0.05)。以腺病毒为载体转染脂肪细胞高表达AQP7,随着AQP7表达上调,可逆转TNF-α的这些作用。结论 AQP7可能参与胰岛素抵抗的分子机制,高表达AQP7对改善胰岛素抵抗的基因治疗有一定的指导意义。; 潘伟沈飞霞谷雪梅; 关键词：脂肪细胞胰岛素信号通路胰岛素抵抗

水通道蛋白7对蛋白激酶B的影响: 2013年; 该文旨在探讨水通道蛋白7(AQP7)在3T3-L1脂肪细胞不同分化阶段的表达以及其对胰岛素信号通路中蛋白激酶B(PKB)的影响。通过培养3T3-L1前体脂肪细胞,诱导分化为成熟的脂肪细胞,用荧光定量PCR、Western blot、酶学方法分析显示,随3T3-L1脂肪细胞分化过程,AQP7与PKB磷酸化水平同步上升,同时培养基中释放的甘油浓度伴随AQP7的表达平行增加。以TNF-α处理分化成熟的脂肪细胞构建胰岛素抵抗模型,AQP7与PKB磷酸化水平均下降,转染高表达AQP7基因的重组腺病毒载体(Ad-AQP7)之后,随着AQP7表达上调,胰岛素刺激下的PKB磷酸化水平提高,并且葡萄糖代谢能力增强。由此可见,AQP7水平随3T3-L1脂肪细胞分化过程逐渐上升,其高表达可能通过增加PKB磷酸化水平改善胰岛素敏感性,提示AQP7可能成为治疗肥胖的一个重要作用靶点。; 潘伟沈飞霞谷雪梅叶菁顾雪疆倪连松李卫平; 关键词：蛋白激酶B 胰岛素敏感性

高脂诱导胰岛素抵抗大鼠对不同脂肪组织水通道蛋白7的影响被引量：1: 2017年; 目的研究胰岛素抵抗大鼠不同脂肪组织水通道蛋白7(AQP7)的表达水平,探讨AQP7与脂肪组织发生胰岛素抵抗的关系。方法 20只雄性SD大鼠随机分为对照组(CG)和高脂喂养诱导胰岛素抵抗模型组(IRG)。观察两组大鼠体重变化,检测TG、TC、HDL-C、LDL-C、甘油、空腹血糖(FBG)、空腹胰岛素(FINS)及脂肪因子的水平,同时比较皮下脂肪和附睾脂肪组织AQP7 m RNA、蛋白以及不同脂肪组织蛋白激酶B(PKB)及磷酸化蛋白的表达水平。结果至12周末,IRG组较CG组血清LDL、FBG、FINS、IL-6、TNF-α及胰岛素抵抗指数(HOMA-IR)明显升高(P<0.05或0.01),而HDL、脂联素水平下降(P<0.05)。对m RNA和蛋白检测发现,在IRG组中内脏脂肪组织AQP7表达水平高于皮下脂肪组织,并且较CG组升高。在IRG组中内脏脂肪组织PKB磷酸化蛋白表达水平较皮下脂肪表达下降,并且较CG组下降。结论内脏脂肪组织AQP7的异常表达,可能与胰岛素抵抗的发生有关。; 潘伟沈飞霞谷雪梅; 关键词：脂肪组织胰岛素抵抗

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浙江省自然科学基金(Y2080418)

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