福建省自然科学基金(2012j01082)
- 作品数：7 被引量：14H指数：3
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- 铜胁迫下小白菜叶片基因表达谱的cDNA-AFLP分析被引量：4
- 2014年
- 本研究以小白菜品种‘上海青’为试验材料，利用Cu2＋质量浓度为10mg·L-1的营养液水培小白菜幼苗，通过cDNA—AFLP技术分析小白菜响应铜胁迫相关基因及其表达情况。试验中利用多态性较好的135对引物进行扩增，共获得5800多条转录衍生片段（TDFs），平均每个5J物组合扩增出30～60条，片段大小主要集中在100～1000bp，根据条带强弱和有无的变化，其表达模式可以分为持续表达、瞬时表达、上调表达和下调表达4种情况。通过筛选获得180条差异表达TDFs，其中上调表达77条（42．8％），下调表达61条（33．9％），瞬时表达42条（23.3％）。选取其中152条差异表达TDFs进行回收测序，最终得到151个有效序列，其中上调表达68条（45％1，下调表达50条（33．1％），瞬时表达33条（21．9％）。Blastx比对结果显示，112条TDFs序列与已知基因具有较高的相似度，涉及能量代谢、物质合成与运输、逆境响应、信号转导等多种途径，16条TDFs序列与功能未知或假定基因的同源性较高，其余23条TDFs序列与已知功能基因的同源性较低或零匹配，可能是一些新的铜胁迫应答基因。从151条TDFs选取4条TDFs，以小白菜actin基因为内参照，对其在不同胁迫处理时间的表达情况进行荧光定量RT—PCR验证，分析结果与cDNA．AFLP结果基本吻合，表明cDNA—AFLP技术是研究小白菜铜胁迫相关基因差异表达的有效方法。小白菜铜胁迫相关基因表达情况较为复杂，涉及多种代谢途径。本研究结果可为探讨小白菜铜胁迫的分子机理和相关基因的克隆提供理论依据。
- 赵瑞丽钟凤林林义章高世超林俊芳叶丽萍
- 关键词：小白菜铜胁迫基因表达谱CDNA-AFLP
- 外源NO对铜胁迫下小白菜SBPase基因表达特性及其光合速率的影响被引量：3
- 2016年
- 【目的】本研究通过克隆小白菜光合暗反应中限制核酮糖-1,5-二磷酸(Ru BP)再生的关键酶景天庚酮糖-1,7-二磷酸酶(sedoheptulose-1,7-bisphosphatase,SBPase)基因,分析铜胁迫及添加外源一氧化氮(NO)供体硝普钠(SNP)缓解铜胁迫时该基因的表达情况,并将其与对应处理下小白菜净光合速率(Pn)的变化情况结合在一起进行分析,以期为全面了解外源NO缓解铜胁迫植物光合作用机理提供理论依据。【方法】以小白菜品种"上海青"3~4片真叶大的幼苗为材料,采用RT-PCR技术克隆小白菜SBPase基因,铜处理浓度为200μmol/L,外源NO供体SNP浓度为300μmol/L,同时设置相关的4个对照组排除其他可能因素的干扰,在添加处理液后的0、4、8、12d上午九点测定各处理小白菜相同节位叶片的净光合速率,并利用实时荧光定量PCR技术检测在对应的处理时间及对应节位小白菜叶片中SBPase基因的表达情况。试验环境条件为光照强度200μmol/(m^2·s),光周期12 h,温度25℃/18℃。【结果】1)克隆得到小白菜SBPase基因(Genbank登录号:AHY18974.1),开放阅读框为1182 bp,编码393个氨基酸,蛋白质分子量为42.34k D,理论等电点为5.85。2)序列分析表明其含有氧化还原活性位点,包含一个具有59个氨基酸残基的叶绿体转移肽序列。小白菜SBPase基因推导的氨基酸序列与其他物种中已分离的SBPase编码的氨基酸序列具有很高的同源性。3)实时荧光定量PCR分析表明,SBPase基因在铜胁迫下的小白菜叶片中表达量下降,且随着胁迫时间的延长下降程度加剧;而在铜胁迫的基础上添加外源NO可以在一定程度上缓解铜胁迫引起的小白菜叶中SBPase基因表达量的下降。4)铜胁迫下小白菜叶片Pn显著下降,且随着胁迫时间的延长,Pn下降加剧,施加外源NO后Pn的下降得到一定程度的缓解,各处理下Pn的变化与SBPase基因表达量变化趋势一致。【结论】铜胁迫及在铜胁迫的基�
- 叶丽萍钟凤林林义章林琳琳
- 关键词：小白菜铜胁迫一氧化氮实时荧光定量PCR
- 小白菜RING锌指蛋白基因的克隆及其表达分析
- 2014年
- 锌指蛋白在调控植物防御和抗性方面具有重要作用。根据从小白菜中获得的与铜胁迫相关的RING锌指蛋白基因TDF片段设计引物,应用RACE技术克隆出具有完整阅读框的小白菜RING锌指蛋白基因,该基因全长855 bp,开放阅读框606 bp,编码202个氨基酸,分子量为21.32 ku,理论等电点为6.87,属于中性蛋白。结构分析结果表明,该蛋白C-端含有1个保守的C3HC4型RING锌指结构域。进化树分析结果显示,小白菜RING锌指蛋白与芜菁RING锌指蛋白的相似度高达98%,属于C3HC4型RING锌指亚家族。RT-PCR分析结果表明,在铜胁迫下该基因下调表达,推测其可能参与对铜胁迫的应答反应。此结果为进一步研究该基因在小白菜逆境应答中的作用机制奠定基础。
- 赵瑞丽钟凤林林俊芳高世超胡海非杨碧云林义章
- 关键词：小白菜RACE
- 铜胁迫对小白菜膜透性及酶活性的影响
- 2013年
- 试验采用水培的方法,研究小白菜在浓度为5 mg/L的铜胁迫下膜透性和抗氧化酶活性的动态变化。结果表明,铜胁迫5 d时2个小白菜品种细胞膜透性、MDA含量、SOD和POD活性均降低,CAT活性升高。‘上海青’在胁迫15 d时细胞膜透性、MDA含量、SOD和POD活性回升至最高,CAT活性降至最低;‘五月慢’在胁迫15 d时细胞膜透性和MDA含量显著提高,10 d时SOD和POD活性上升至最高,CAT活性降至最低。
- 赵瑞丽曾志雄钟凤林张凤云高世超黄思文林义章
- 关键词：铜胁迫小白菜细胞膜透性酶活性
- 小白菜BcUBCE2基因的克隆及表达分析被引量：5
- 2014年
- 采用cDNA-AFLP和RACE技术从小白菜中克隆得到泛素结合酶E2基因(ubiquitin conjugating enzyme E2),命名为BcUBCE2。序列分析表明,BcUBCE2基因cDNA全长830bp,包含1个456bp的开放阅读框,编码152个氨基酸。结构分析发现,该序列包含一个泛素结合酶E2活性位点和一个高度保守的半胱氨酸。进化分析显示,小白菜BcUBCE2蛋白同拟南芥E2蛋白的亲缘关系最近。qRT-PCR分析表明,BcUBCE2基因在小白菜根、茎、叶中均有表达,铜处理10d时BcUBCE2基因的表达量最高。研究认为,BcUBCE2基因可能在铜胁迫响应中发挥重要作用。
- 赵瑞丽钟凤林林义章高世超林俊芳杨碧云胡海非
- 关键词：小白菜RACE铜胁迫
- 外源NO对重金属胁迫下植物光合作用的缓解效应研究进展被引量：2
- 2015年
- 从光合速率、气孔特性、光合色素、叶绿体结构、光合电子传递、光合碳同化等方面,概述外源NO对重金属胁迫下植物光合作用影响的研究进展,以期为外源NO对重金属胁迫下植物光合作用的缓解机制提供理论依据。
- 叶丽萍钟凤林沈立林义章林琳琳郑燕萍
- 关键词：一氧化氮重金属光合作用
- 不结球白菜氯离子通道蛋白ClC-d基因的克隆及表达分析
- 2014年
- 根据从不结球白菜中获得的与铜胁迫相关的氯离子通道蛋白基因ClC-d的TDF片段设计引物,运用RACE技术克隆出具有完整阅读框的不结球白菜氯离子通道蛋白基因ClC-d,该基因全长2 752bp,开放阅读框为2 376bp,编码792个氨基酸,分子量为87.06kD,理论等电点为8.35,为碱性蛋白。结构分析表明:该蛋白含有1个电压门控的氯离子通道和2个CBS结构域。进化树分析显示,不结球白菜氯离子通道蛋白基因ClC-d推导的氨基酸序列与拟南芥氯离子通道蛋白基因的相似度高达100%,属于ClC类氯离子通道蛋白。RT-PCR结果表明在铜胁迫下该基因表达量增加,处理10d时达到最高,推测其可能参与对铜胁迫的应答反应。本研究结果有助于进一步研究该基因在不结球白菜逆境应答中的作用及其作用机制。
- 赵瑞丽钟凤林林义章高世超叶丽萍林琳琳
- 关键词：不结球白菜RACERT-PCR
