江苏省自然科学基金(BK2012703)
- 作品数：13 被引量：50H指数：4
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- SNARE／Munc18b复合体介导脓毒症血小板α颗粒释放及CORM-2的干预机制被引量：3
- 2017年
- 目的探讨可溶性N-乙基马来酰亚胺敏感因子附着蛋白受体及其调节因子突触融合蛋白结合蛋白b（SNARE/Munc18b）复合体介导的脓毒症血小板α颗粒释放及一氧化碳释放分子Ⅱ（CORM-2）的干预机制。方法采集健康成人肘静脉血，差速离心法分离出富含血小板血浆（PRP），并随机分为对照组、脂多糖（LPS）组（10 mg/L）、LPS＋iCORM-2组（10 mg/L LPS ＋ 50 μmol/L无活性CORM-2），LPS＋L-CORM-2组（10 mg/L LPS ＋ 10 μmol/L CORM-2）、LPS ＋ H-CORM-2组（10 mg/L LPS ＋ 50 μmol/L CORM-2）。各组于37？℃、湿度95%、5% CO2培养箱孵育30 min取上清液，用酶联免疫吸附试验（ELISA）检测血小板α颗粒释放物质血小板因子4（PF4）、血小板源性生长因子BB（PDGF-BB）和基质金属蛋白酶2（MMP-2）含量；流式细胞仪检测血小板P-选择素的表达；透射电镜和激光共聚焦显微镜下观察血小板α颗粒的分布；蛋白质免疫印迹试验（Western Blot）检测血小板关键膜融合分子Munc18b及相关SNARE蛋白囊泡相关膜蛋白-8（VAMP-8）、突出相关蛋白-23（SNAP-23）、突出融合蛋白-11（STX-11）的表达；免疫沉淀法检测SNARE/Munc18b复合体的形成。结果与对照组比较，LPS组血小板α颗粒释放PF4、PDGF-BB、MMP-2、P-选择素的量明显升高；而低、高浓度CORM-2能有效抑制LPS刺激后血小板α颗粒的释放〔PF4（μg/L）：7.69±0.58、6.03±0.71比10.13±0.82，PDGF-BB（μg/L）：112.71±1.79、102.91±5.86比128.78±1.39，MMP-2（ng/L） ：32.94±2.73、27.58±3.36比53.26±1.21，P-选择素：（17.14±0.57）%、（15.35±0.68）%比（23.78±0.62）%，均P〈0.01〕，且呈剂量依赖趋势。透射电镜和激光共聚焦显微镜下观察，CORM-2能减少LPS刺激后血小板α颗粒向血小板膜周围分布，并可抑制与包膜融合。与对照组比较，LPS刺激后血小板Munc18b和相关SNARE蛋白表达，以及SNARE/Munc18b复合体形成均显著�
- 庄明峰孙炳伟刘大东石源
- 脓毒症时糖原合酶激酶3相关作用的研究进展被引量：3
- 2014年
- 脓毒症是由感染引起的全身炎症反应综合征（SIRS）,是严重创伤、休克及感染后常见的并发症,进一步发展可导致脓毒性休克、多器官功能障碍综合征（MODS）,即便在基础与临床研究及重症监护手段高度发展的现代,其临床治疗仍然收效甚微,病死率居高不下[1].脓毒症的病理生理过程极其复杂,近年研究表明机体的炎症反应和凝血系统功能紊乱在脓毒症的发生发展过程中具有重要作用[1-3].大量研究揭示,糖原合酶激酶3（GSK-3）在脓毒症炎症反应、凝血异常中发挥重要作用[4-5].GSK-3是一种多功能的丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶,是参与糖代谢的主要限速酶之一.
- 庄明峰刘大东孙炳伟
- 关键词：糖原合酶激酶3脓毒症全身炎症反应综合征苏氨酸蛋白激酶脓毒性休克病理生理过程
- CORM-2通过PKCθ/Munc18a信号途径抑制脓毒症血小板α颗粒的释放被引量：2
- 2016年
- 目的:探讨θ型蛋白激酶C(PKCθ)/Munc18a信号途径介导的脓毒症时血小板α颗粒释放及外源性一氧化碳释放分子Ⅱ(CO-releasing molecules-2,CORM-2)的干预机制。方法:采集健康成年人肘静脉血,差速离心法分离出血小板,随机分为正常对照组,脂多糖刺激组,无活性的CORM-2(i CORM-2,50μmol/L)组,CORM-2(10μmol/L)组,CORM-2(50μmol/L)组。为进一步探讨PKCθ的功能,设立脂多糖+AEB071组和脂多糖+CORM-2(50μmol/L)+AEB071组接受PKCθ抑制剂AEB071(50 nmol/L)干预。随后采用ELISA法检测各组血小板α颗粒释放的血小板源性生长因子BB(platelet-derived growth factor BB,PDGF-BB)和MMP-2,流式细胞术检测血小板P-选择素的表达;免疫荧光法检测血小板α颗粒的分布;同时用蛋白质印迹法检测血小板关键信号分子PKCθ和Munc18a的活性。结果:CORM-2(10、50μmol/L)干预能够有效抑制脂多糖刺激后血小板P-选择素、PDGF-BB和MMP-2的释放(均P<0.05)。免疫荧光检测结果显示CORM-2能抑制脂多糖刺激后血小板α颗粒的释放。脂多糖刺激后血小板PKCθ和Munc18a的磷酸化水平在AEB071组与CORM-2(50μmol/L)组均明显降低(均P<0.05)。结论:CORM-2的干预能够有效地抑制脓毒症时血小板α颗粒的异常释放,其机制可能涉及PKCθ/Munc18a信号途径。
- 庄明峰徐晓涵刘大东宋明明王旭秦魏婷孙炳伟
- 关键词：脓毒症
- 苦柯胺B对脂多糖诱导的脓毒症小鼠小肠炎症反应的抑制作用及分子机制被引量：9
- 2015年
- 目的 探讨苦柯胺B（KB）对脓毒症小鼠小肠炎症反应的抑制作用及其分子机制。方法 按照随机数字表法将24只雄性ICR小鼠分为对照组、模型组、KB干预组，每组8只。腹腔注射脂多糖（I^PS）20mg／kg制备脓毒症动物模型，对照组注射等量生理盐水；KB干预组于制模后4h经尾静脉注射KB20雌mg进行干预。各组于注射LPS后8h取心脏血和空肠、回肠组织，检测血浆LPS含量；采用酶联免疫吸附试验（ELISA）检测血浆及小肠组织肿瘤坏死因子-α（TNF-α,）和白细胞介素-1β（IL-1β）水平；光镜下观察小肠组织病理学改变；比色法检测小肠组织髓过氧化物酶（MPO）活性；免疫组化法观察小肠组织细胞间黏附分子-1（ICAM-1）表达；反转录-聚合酶链反应（RT—PCR）检测小肠组织诱导型-氧化氮合酶（iNOS）mRNA表达；蛋白质免疫印迹试验（WesternBlot）检测小肠组织核转录因子-kB（NF—kB）蛋白表达。结果 模型小鼠表现为肠组织微血管通透性增加，间质水肿，白细胞浸润；血浆LPS、TNF-α、IL—1β水平及小肠TNF-α、IL-1β、MPO活性、ICAM-1阳性表达、iNOS mRNA、NF—kB蛋白表达均明显升高；而经KB干预后，小肠组织微血管通透性降低，水肿程度减轻，白细胞浸润显著减少，血浆LPS、TNF-α、IL-1β及小肠TNF-α、IL-1β、MPO活性、ICAM-1阳性表达、iNOSmRNA和NF—kB蛋白表达均较模型组均明显下降[血浆LPS（kEU／L）：654．09±28．13比1155．65±47．15，TNF—α（ng／L）：12．75±0．47比30．61±0．71，IL-1β（ng／L）：53．06±5．32比64．47±2．61；空肠TNF-α（ng／L）：43．27±1．20比64．82±2．09，IL-1β（ng／L）：326．38±14．47比535．22±13．48．MPO（U，g）：0．14±0．01比0．32±0．02，iNOSmRNA（2^-△△Ct）：2．39±0．13比10．80±0．22，NF—kB蛋白（灰度值）：0．687±0．062比1．404±0．046；回肠TNF-α（ng／L）：62．75±3．9
- 吕汪洄秦魏婷张锦丽沈唯长王旭孙炳伟
- 关键词：脂多糖小肠炎症反应
- 外源性一氧化碳对脓毒症时肝、肺组织中性粒细胞过度浸润的抑制作用及其机制被引量：4
- 2015年
- 目的 探讨外源性一氧化碳对脓毒症时肝、肺组织中性粒细胞过度浸润的抑制作用及其机制.方法 （1） 32只雄性小鼠按随机数字表法分为假手术组、盲肠结扎穿孔组（CLP组）、CLP＋外源性一氧化碳释放分子2（CORM-2）（8 mg/kg）干预组（CORM-2干预组）、CLP＋无活性CORM-2（iCORM-2）（8 mg/kg）干预组（iCORM-2干预组）,每组8只.术后24 h分别取肝、肺组织,检测病理改变、髓过氧化物酶（MPO）活性及丙二醛（MDA）含量.（2）另取60只小鼠分组同（1）,每组15只;术后连续观察72 h,进行存活率分析.（3）分离小鼠骨髓中性粒细胞,分为正常对照组、脂多糖（LPS,1μg/ml,浓度下同）刺激组（LPS组）、LPS＋低浓度CORM-2（10 μmol/L）刺激组（低浓度组）、LPS＋高浓度CORM-2（50 μmol/L）刺激组（高浓度组）、LPS＋iCORM-2（50 μmol/L）刺激组（iCORM-2组）,1h后进行琼脂糖凝胶平板趋化实验,定量PCR、免疫荧光检测趋化因子甲酰肽受体1（FPR1）含量.结果 与假手术组比较,CLP组MPO活性明显增强[肝（9.1±1.1）U/g、肺（16.3±2.8）U/g] （P ＜0.05）,MDA含量明显上升[肝（76.5±11.3） nmol/mg、肺（32.4 ±10.3） nmol/mg] （P ＜0.05）,72 h存活率仅为20％（P＜0.05）;CORM-2干预组能显著抑制MPO活性[肝（5.2±0.8）U/g、肺（7.5±2.4）U/g]（P＜0.05）及MDA含量的增高[肝（46.7 ±6.1）nmol/mg、肺（23.8 ±7.3） nmol/mg] （P ＜0.05）,72 h存活率为67％ （P ＜0.05）.与正常对照组比较,LPS组中性粒细胞[（61.3±7.1）个]趋化能力增强（P＜0.05）,FPR1表达增多且富集于细胞膜;低浓度组、高浓度组可有效抑制上述变化,且呈剂量依赖性[低浓度组（43.3±6.1）个、高浓度组（23.3±5.9）个]（P＜0.05）.结论 外源性一氧化碳通过下调脓毒症时FPR1表达、减少细胞膜FPR1含量及有效抑制脓毒症时中性粒细胞趋化能力抑制肝、肺组织中性粒细胞过度浸润,减�
- 王旭宋明明沈唯长秦魏婷吕汪洄孙炳伟
- 关键词：脓毒症一氧化碳趋化
- 外源性一氧化碳释放分子2对脓毒症小鼠肝脏能量代谢的调控作用及机制被引量：2
- 2014年
- 目的:观察脓毒症小鼠肝脏能量代谢的变化,同时探讨外源性一氧化碳释放分子2(carbon monoxide-releasing molecules-2,CORM-2)对其调控及作用机制。方法:将48只C57BL/6小鼠随机均分成对照组,盲肠结扎穿孔(CLP)组,CORM-2组,无活性CORM-2(inactivated CORM-2,iCORM-2)组。采用CLP术制作脓毒症模型,对照组不作任何处理,CORM-2组和iCORM-2组除术后使用CORM-2或无活性CORM-2外,其余处理同CLP组,术后72 h内连续监测各组12只小鼠血糖浓度的动态变化及存活情况。另选32只小鼠分组同上,术后24 h收集肝脏组织及血浆,检测肝组织的18F-FDG分布、葡萄糖激酶活性、乳酸含量,全自动生化分析仪检测血浆丙氨酸转氨酶(ALT),天冬氨酸转氨酶(AST)。结果:与对照组比较,CLP组葡萄糖代谢水平增强,葡萄糖激酶、AST、ALT活性以及乳酸含量均明显增高(P均<0.05);CORM-2干预后上述指标明显降低(P均<0.05)。与对照组比较,各手术组小鼠血糖在术后36 h内持续下降,且组间差异无统计学意义。结论:CORM-2能明显减少脓毒症小鼠肝18F-FDG摄取、葡萄糖激酶活性和乳酸含量,从而改善脓毒症小鼠肝脏能量代谢紊乱,提高生存率。
- 梁峰孙炳伟王旭秦魏婷刘大东仇雪枫
- 关键词：脓毒症肝脏^18F-FDG
- 微小RNA-191抑制巨噬细胞EGR1介导小鼠巨噬细胞对脓毒症的影响
- 2021年
- 目的探讨微小RNA-191(miR-191)抑制巨噬细胞早期生长反应蛋白1(EGR1)介导小鼠巨噬细胞对脓毒症的影响。方法无特定病原级雌性BALB/c小鼠,构建脓毒症模型后分为对照组(n=10)和miR-191组(n=10)。对照组经腹腔注射10 mg/kg的0.9%氯化钠溶液,miR-191组经腹腔注射10 mg/kg的miR-191质粒。观察48 h记录小鼠生存情况,采用腹腔灌洗法收集腹腔灌洗液检测细菌负荷,苏木精伊红染色法观察肺脏组织变化。培养腹腔巨噬细胞并进行体外实验,分为A组和B组,A组加入miR-191质粒,B组加入等体积0.9%氯化钠溶液。检测A组和B组EGR1含量和细菌数目。结果miR-191组小鼠生存率高于对照组,腹腔和血液细菌负荷数小于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。对照组小鼠肺泡结构紊乱,肺泡间隔明显增宽,肺间质有明显充血水肿,部分肺不张,有大量中性粒细胞浸润;miR-191组小鼠肺泡结构基本完整,肺泡间隔增宽,肺间质充血水肿明显改善,中性粒细胞浸润明显减少。体外实验结果显示,A组小鼠巨噬细胞EGR1水平低于B组,细胞内细菌存活数低于B组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论miR-191通过抑制EGR1表达,有效降低脓毒症小鼠氧化应激反应,减轻肺组织病理损伤,提高细菌清楚能力,这可为临床治疗脓毒症提供参考。
- 石源张雪峰秦海东
- 关键词：小鼠脓毒症
- 苦柯胺B对脓毒症小鼠肺脏炎症反应的抑制作用被引量：7
- 2014年
- 目的 探讨苦柯胺B（KB）对脓毒症小鼠肺部炎症反应的抑制作用及分子机制.方法 将28只雄性ICR小鼠按随机数字表法分为对照组（8只）、脂多糖（LPS）组（10只）、LPS ＋KB组（10只）.腹腔注射LPS 20 mg/kg制备脓毒症模型（LPS组）;对照组给予等体积生理盐水;LPS ＋KB组于LPS刺激4h后经尾静脉注射KB 20 μg/kg.于LPS刺激后8h检测动物血浆LPS浓度及肺组织髓过氧化物酶（MPO）活性;采用酶联免疫吸附试验（ELISA）检测血浆、肺泡灌洗液及肺组织匀浆中肿瘤坏死因子-α（TNF-α）和白细胞介素-1β（IL-1β）的含量;用蛋白质免疫印迹试验（Western Blot）检测肺组织核转录因子-κB（NF-κB）活性和诱导型一氧化氮合酶（iNOS）蛋白表达;用苏木素-伊红（HE）染色观察肺组织病理学改变;免疫组化法观察肺组织中细胞间黏附分子-1 （ICAM-1）蛋白表达.结果 与对照组比较,LPS组血浆LPS浓度（kEU/L：1 155.650±147.149比31.390±18.859）、MPO活性（U/g：1.177 ±0.093比0.775±0.166）、NF-κB活性（灰度值：1.557±0.105比0.824±0.032）、iNOS蛋白表达（灰度值：0.650±0.129比0.392±0.097）均显著升高（均P＜0.05）;KB干预后LPS浓度（624.461±149.012）、MPO活性（0.919±0.023）、NF-κB活性（1.127±0.074）、iNOS蛋白表达（0.425±0.066）均被明显抑制（均P＜0.05）.与对照组比较,LPS组血浆、肺泡灌洗液、肺组织匀浆中TNF-α（ng/L：47.325±13.864比6.534±0.544,13.382±2.231比3.748±0.692,31.127±7.399比14.948±4.673）、IL-1β（ng/L：74.329±11.890比29.921±6.487,9.422±2.674比1.105±0.364,528.509±32.073比109.945±13.561）浓度均显著增加（均P＜0.05）;而应用KB干预后TNF-α（20.331±7.789、7.145±1.202、15.966±2.946）、IL-1β（57.707±8.098、2.212±0.878、426.154±11.270）浓度均明显降低（血浆TNF-α：F=16.052、P=0.002,IL-1β：F=20.649、P=0.000;肺泡灌洗液TNF-α：F=31.134、P=0.001,IL-1β：F=22.792、
- 张锦丽秦魏婷吕汪洄沈唯长王旭孙炳伟
- 关键词：脓毒症炎症反应
- 脓毒症时中性粒细胞胞外诱捕网的研究进展被引量：11
- 2015年
- 脓毒症（sepsis）是由感染引起的全身炎症反应，严重时可导致多器官功能衰竭、脓毒性休克，甚至死亡。当前，脓毒症的发病率和病死率仍然居高不下，在美国，脓毒症在危重患者致死因素中居首位，每年有75万新增脓毒症患者，而其中又有21万患者因脓毒症而死亡。脓毒症的发病机制十分复杂，至今仍未完全阐明，脓毒症早期，感染部位招募大量中性粒细胞，通过吞噬病原菌、脱颗粒释放蛋白酶等物质来达到杀菌的作用。
- 宋明明王旭孙炳伟
- 关键词：脓毒症患者多器官功能衰竭诱捕全身炎症反应危重患者
- 磷酸肌醇3激酶-Rac-Nadrin通路在血小板肌动蛋白细胞骨架重构中的作用被引量：1
- 2015年
- 目的 观察磷酸肌醇3激酶（PI3K）-Rac-Nadrin通路在血小板肌动蛋白（actin）细胞骨架重构和细胞形态改变中的作用.方法 选择健康成年志愿者50名,采集外周静脉血,提取洗涤血小板,取200μl经正常洗涤的血小板（3＆#215;1011/L）,设为A组,另取200μl洗涤后的血小板（3＆#215;1011/L）,用渥曼青霉素（100 nmol/L）预处理后15 min后,设为B组,将两组进行血小板聚集率的检测.提取经脂多糖（LPS）内毒素刺激聚集和铺展的两组血小板的总蛋白,进行比较,用鬼笔环肽（Phalloidin）和两组血小板的肌动蛋白丝（F-actin）特异性结合,采用共聚焦激光扫描显微镜分析两组血小板F-actin含量的变化.同时观察两组血小板内F-actin排列和分布的改变,以及血小板形态的变化.结果 血小板聚集仪检测两组血小板聚集率,结果显示,在渥曼青霉素作用下血小板聚集率明显降低（P＜0.05）,显示渥曼青霉素能够抑制血小板聚集.同时,经渥曼青霉素作用的A组血小板,其F-actin平均荧光强度明显降低,为B组的（58.8±6.9）％,差异有统计学意义（P＜0.05）.和B组比较,A组血小板骨架发生解聚,应力纤维的排列和分布以及血小板形态明显改变.结论 PI3 K-Rac-Nadrin通路在血小板F-actin细胞骨架重构中发挥重要作用.
- 陈静家刘大东庄明峰孙炳伟
- 关键词：肌动蛋白
