国家自然科学基金(31270894)
- 作品数：4 被引量：6H指数：2
- 相关作者：顾永清周平坤尹姣姣周丽君王豫更多>>
- 相关机构：南华大学中国人民解放军海军总医院军事医学科学院更多>>
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- 电离辐射下调miR-34a-5p促进辐射诱导的肺上皮间质转化被引量：3
- 2020年
- 目的探究辐射下调miR-34a-5p在辐射诱导上皮间质转化(EMT)中的作用及其机制。方法Western blotting和流式细胞术检测60Coγ射线照射后肺上皮细胞中EMT相关标志蛋白的表达变化;RT-qPCR检测60Coγ射线照后不同时间点A549细胞和BEAS-2B细胞中miR-34a-5p的表达;将miR-34a-5p过表达或敲低后,Western blotting检测辐射诱导时EMT的表达。生物信息学预测miR-34a-5p的靶基因,RT-qPCR和Western blotting检测miR-34a-5p对靶基因的调控效果。结果6 Gy 60Coγ射线照射后48 h肺上皮细胞发生EMT,RT-qPCR检测显示miR-34a-5p表达下调;过表达miR-34a-5p可逆转辐射诱导的EMT,下调表达miR-34a-5p时,CD44表达升高,并且促进电离辐射诱导的EMT。结论60Coγ射线下调miR-34a-5p促进辐射诱导肺上皮细胞发生EMT,提示miR-34a-5p可能抑制辐射诱导EMT及放射性肺纤维化,有望成为放射性肺纤维化防治的新靶点。
- 王铎刘政刘晓畅顾永清顾永清
- 关键词：MICRORNACD44上皮间质转化电离辐射
- 人PIF1解螺旋酶克隆表达及2种细胞裂解法纯化PIF1蛋白比较
- 2013年
- 目的克隆、表达人类全长PIF1解螺旋酶,建立PIF1纯化方法。方法从Hela细胞的cDNA文库中PCR扩增得到PIF1解螺旋酶cDNA,插入N-末端融合有六聚组氨酸的表达载体pET15b产生pET15b-PIF1重组质粒,转化RosettaTM2(DE3)感受态细胞使PIF1蛋白在大肠杆菌中表达,分别用溶菌酶热裂解法和玻璃珠震荡法裂解大肠杆菌细胞,再用高效液相的镍亲和柱亲和层析纯化PIF1蛋白,比较2种方法释放的PIF1蛋白。结果克隆了PIF1基因,并使PIF1蛋白在大肠杆菌中得到成功表达,2种裂解法均能使PIF1蛋白释放出来,玻璃珠裂解法释放的PIF1蛋白较热裂解法高2倍。结论玻璃珠震荡法裂解细胞能释放更多的PIF1蛋白,是纯化PIF1蛋白的一个较好的选择。
- 赵德根王建校李珊珊顾永清
- 关键词：蛋白表达细胞裂解
- 盐诱导激酶2对放射损伤后细胞周期检查点中的调节作用被引量：1
- 2014年
- 目的 了解盐诱导激酶2（SIK2）在电离辐射诱发G2/M细胞周期阻滞中的作用,并探讨其作用机制.方法 60Coγ射线照射HeLa细胞,慢病毒载体（pSicoR）构建SIK2的小干扰RNA（shRNA）表达载体,Lipofectamine 2000介导转染构建SIK2敲低表达细胞模型.Western blot检测SIK2的蛋白表达含量,流式细胞术检测细胞周期,磷酸化组蛋白3（pH3 Ser10）作为流式细胞检测分子标记物分析G2/M期检测点功能.结果 γ射线照射能诱发HeLa细胞SIK2蛋白表达增加.成功构建shRNA敲低HeLa细胞SIK2表达的细胞模型,并通过该细胞模型观察到在不同剂量照射后（1、2、4、6 Gy）降低SIK2蛋白表达水平导致细胞的放射敏感性增高（t=-3.445、-2.581、-3.251、-2.553,P＜0.05）,γ射线诱发的细胞周期G2/M边界阻滞在照后5、6h被提前解除（=4.341、6.500,P＜0.05）.Western blot检测结果表明,SIK2敲低细胞与对照细胞相比,放射损伤诱发的磷酸化CHK2蛋白提前消退.结论 SIK2在细胞放射损伤反应中参与细胞的G2/M检查点功能的调节,影响细胞的放射敏感性.
- 尹姣姣周丽君王豫刘晓丹顾永清周平坤
- 关键词：细胞周期组蛋白H3G2Γ射线
- 60Coγ射线对盐诱导激酶2的诱导表达作用被引量：2
- 2014年
- 目的探讨电离辐射对盐诱导激酶2（SIK2）蛋白和mRNA的诱导表达作用及细胞周期相关性。方法HepG2细胞用60Coγ射线照射，蛋白质印迹法和实时定量PCR法分别检测细胞的SIK2蛋白和mRNA的表达，胸腺嘧啶双阻滞法同步化细胞，流式细胞术测定细胞周期的变化。结果HepG2细胞2Gy照射后4、6、10h，SIK2蛋白表达显著增加（t=3．00、3．98、4．17，P〈0．05）；10Gy大剂量照射后，SIK2蛋白表达增加的趋势与2Gy一致，但增加的幅度较前者低。2和10Gy照射后SIK2基因mRNA均在10h出现了增加（t=4．54、2．74，P〈0．05）。照后10h出现了细胞G：／M阻滞高峰。利用同步化细胞分析表明，细胞周期不同时相中SIK2mRNA的表达无明显差别。结论2和10Gy照射均能诱导SIK2蛋白表达增加，2Gy的作用更加明显。细胞照射后10h，SIK2mRNA的表达水平增加，但与辐射诱发细胞G2／M期阻滞引起不同时相细胞的分布变化无关。
- 谭伟尹姣姣周丽君黄波刘晓丹王豫顾永清让蔚清周平坤
- 关键词：电离辐射基因表达G2M期阻滞
