国家自然科学基金(30672614)
- 作品数：3 被引量：14H指数：3
- 相关作者：曾庆平赵昌尹录录黄瑛杨瑞仪更多>>
- 相关机构：广州中医药大学广州军区广州总医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金广东省科技计划工业攻关项目更多>>
- 相关领域：生物学农业科学更多>>
- 啤酒酵母鲨烯合酶基因的克隆及其基因表达载体的构建被引量：3
- 2009年
- 【目的】克隆啤酒酵母鲨烯合酶基因及构建其基因表达载体,为在微生物体内重建青蒿素合成途径打下基础。【方法】采用聚合酶链反应(PCR)扩增、扩增片段与T-载体连接和克隆片段的序列分析;酶切并回收目的基因,反向插入酵母表达载体pGAPZαA,双酶切鉴定重组子。【结果】通过PCR扩增获得1 335 bp片段,克隆后经PCR和酶切反应进行了鉴定。初步测序结果与GenBank上已登录的酵母鲨烯合酶基因序列基本吻合,相差仅数个碱基对;将此片段反向插入酵母表达载体pGAPZαA,构建了反义酵母表达载体,并通过双酶切加以鉴定。【结论】成功克隆了啤酒酵母鲨烯合酶基因并进行了测序,同时构建了反义酵母表达载体。
- 冯丽玲卢文婕曾庆平
- 关键词：啤酒酵母基因复制
- 青蒿素合成cDNA和新EST的克隆及其低温诱导表达的定量分析被引量：3
- 2008年
- 为了开展基于青蒿发育特异及环境诱导转录物组学的新基因分离与鉴定,本研究采集经低温处理的盛花期青蒿(Artemisia annua)叶片提取总RNA,并进行全长cDNA表达序列标签(expres sedsequence tags,EST)克隆,经测序和同源性检索后提交GenBank.在已注册的75个序列中,共有4个全长cDNA与青蒿已知基因高度同源,其余71个EST在青蒿基因中无测序记录,但其中有34个序列与其他植物基因同源,包括24个已知蛋白编码序列和10个未知蛋白编码序列,另外37个序列在任何植物基因中均无测序记录,为首次克隆的植物新基因.为了研究青蒿基因对极端环境胁迫的响应模式,采用半定量PCR(semi-quantitative PCR,SQ-PCR)对冷处理前后青蒿试管苗中青蒿素合成基因ADS,CYP71AV1和CPR的表达水平进行了测定.结果显示,ADS和CYP71AV1基因受冷胁迫强烈诱导,但CPR基因未受明显影响.同时还发现这种冷胁迫诱导作用可被Ca2+通道抑制剂氯化镧(LaCl3)或Ca2+螯合剂EGTA所阻遏,表明Ca2+-CaM信号转导通路可能参与冷胁迫诱导ADS和CYP71AV1基因的表达.对冷胁迫青蒿试管苗的实时荧光定量PCR(real-time fluorescent quantitative PCR,RFQ-PCR)测定结果表明,CaM基因的表达水平上调2.5倍,从而印证了上述CaM介导信号转导与冷胁迫诱导基因表达之间相关的推论.利用RFQ-PCR对7个新分离青蒿EST进行了功能注释,结果显示,D/LTSRP,UBE,AR/DAP和POD1基因的冷胁迫诱导表达水平分别上调约8.0,5.0,2.3和1.5倍,而CHI和RGP基因的表达无明显上调或下调.本研究首次在转录水平上对青蒿素合成基因及青蒿新EST的冷胁迫诱导表达模式进行了初步探讨,有助于深入了解青蒿素合成与累积的内在规律及其协同调节机制,为促进青蒿的遗传性状改良及代谢工程指导的育种工作打下基础.
- 曾庆平赵昌尹录录杨瑞仪曾晓梅黄瑛冯丽玲杨雪芹
- 关键词：表达序列标签非生物胁迫荧光定量
- 非生物胁迫诱导青蒿素生物合成基因的表达(英文)被引量：8
- 2008年
- 对离体培养青蒿试管苗中3个青蒿素合成相关基因的非生物胁迫诱导表达模式进行了初步研究．半定量RT—PCR测定结果表明，当暴露于冷、热和紫外光后，青蒿植株的紫穗槐-4，11-二烯合酶基因（ADS）和细胞色素P450单加氧酶基因（CYP71AV1）转录上调；相反，在未经胁迫处理的情况下，ADS和CYP71AV1基因的表达水平较低，而在胁迫处理前后细胞色素P450还原酶基因（CPR）转录所产生的mRNA均保持恒定．同时，冷胁迫的诱导效果也得到实时荧光定量RT—PCR测定数据的支持．经低温锻炼的青蒿试管苗，其ADS和CYP71AV1基因的转录产物拷贝数比对照分别提高11倍和7倍，而CPR基因的mRNA拷贝数与对照基本持平．短暂预冷处理还可显著提高青蒿试管苗的青蒿素含量，达到7．5—8．8mg／g干重，比对照提高66．7％-95．6％，为进一步探索利用环境胁迫促进青蒿素高产的新途径提供了可能性．
- 尹录录赵昌黄瑛杨瑞仪曾庆平
- 关键词：青蒿素转录非生物胁迫
