国家自然科学基金(30500554)
- 作品数：3 被引量：5H指数：2
- 相关作者：柳夏林李拥军林清刘昌伟刘奕志更多>>
- 相关机构：中山大学北京协和医院杜克大学更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金首都医学发展科研基金更多>>
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- 低氧培养的人视网膜神经胶质细胞对血管内皮前体细胞的作用被引量：2
- 2006年
- 目的探讨低氧环境下视网膜神经胶质细胞介导的低氧反应分子通路对血管内皮前体细胞(EPCs)的作用及其机制。方法人外周血循环EPCs(CD34+、CD33+双标阳性细胞)经荧光免疫激活流式细胞仪分选收集后培养;分别使用低氧(5%O2,实验组)和正常氧(20%O2,对照组)的人视网膜神经胶质细胞生长培养液作为条件培养液,多次处理EPCs,检测和分析EPCs的增殖活性(WST-1比色法)和分化能力(免疫荧光染色法);采用酶联免疫吸附试验检测实验组和对照组视网膜神经胶质细胞血管内皮生长因子(VEGF)的释放量,采用免疫印迹法检测细胞核内低氧反应因子(HIF)-1α的表达。结果实验组EPCs的增殖活性(吸光度值为1·53±0·10)和分化能力[细胞数目为(29±5)个]均较对照组增殖活性(吸光度值为0·88±0·25)和分化能力[细胞数目为(18±8)个]明显增强(P<0·05)。实验组培养6、24h后神经胶质细胞核内均可检测到HIF-1α表达,而对照组表达缺失。实验组视网膜神经胶质细胞VEGF的释放量较对照组明显增加,且具有时相性,培养24h实验组VEGF的释放量[(319·16±34·12)pg/ml]较对照组[(220·28±24·33)pg/ml]增加44·88%(P<0·01)。结论视网膜神经胶质细胞在低氧培养状态下可通过细胞因子的分泌作用直接促进培养的EPCs增殖和分化,这可能在EPCs参与的新生血管形成中发挥重要的介导作用,该作用与神经胶质细胞HIF-1α和VEGF的信号通道激活有关。本研究对神经胶质细胞介入血管前体细胞的病理生理作用进行了初步探讨。
- 柳夏林李拥军刘奕志葛坚
- 关键词：视网膜神经胶质内皮血管细胞
- NGF对人视网膜血管内皮细胞体外成管作用的影响被引量：1
- 2009年
- 目的探讨神经生长因子(nerve growth factor,NGF)对人视网膜血管内皮细胞(human retinal vascular endothelial cells,HRVEC)体外形成毛细血管管腔的影响。方法20g.L-1胰蛋白酶消化人眼球视网膜组织,内皮细胞培养液培养HRVEC,第Ⅷ因子相关抗原抗体DAB染色法及荧光染色法进行HRVEC的组织化学鉴定。取第3代HRVEC接种于铺有基质胶(Matrigel)的24孔板(每孔200×103个细胞),分为100μg.L-1NGF、100μg.L-1NGF+200nmol.L-1K252a、50μg.L-1碱性成纤维细胞生长因子(basic fibroblastgrowth factor,bFGF)、50μg.L-1bFGF+200nmol.L-1K252a和对照组(人内皮细胞培养液)共5组,1h后各组依次添加各种培养液200μL培养12h后观察照相,分析比较5组新生毛细血管结构及面积。结果接种后8d左右梭形HRVEC细胞铺满培养瓶,第Ⅷ因子相关抗原鉴定阳性;测量5组新生毛细血管面积依次为:(2.76±0.31)mm2、(1.79±0.62)mm2、(2.99±0.58)mm2、(2.86±0.61)mm2、(1.41±0.69)mm2;100μg.L-1NGF、50μg.L-1bFGF组HRVEC均形成完整的管状结构,小管面积均明显大于对照组(均为P<0.05);100μg.L-1NGF+200nmol.L-1K252a组小管结构完整性被打破,小管面积小于100μg.L-1NGF组(P<0.05);50μg.L-1bFGF+200nmol.L-1K252a组小管面积、结构与50μg.L-1bFGF组比较无明显改变(P>0.05)。结论NGF可在体外促进HRVEC形成新生毛细血管管腔,K252a可抑制NGF促进HRVEC形成新生毛细血管管腔的作用,但k252a不能阻断bFGF的作用。
- 王丁丁于强陈子林柳夏林
- 关键词：神经生长因子K252A
- 1型糖尿病小鼠下肢缺血恢复受损的机制被引量：2
- 2007年
- 目的研究1型糖尿病小鼠肢体对缺血刺激的血管生成反应,及其骨髓内皮祖细胞的数量和功能。方法雄性C57BL/6小鼠20只,静脉注射四氧嘧啶,建立1型糖尿病模型;年龄、性别相匹配的正常小鼠20只为对照组。所有小鼠均行单侧股动脉结扎切除术,建立下肢动脉缺血模型。应用激光多普勒扫描仪记录肢体血流恢复情况至术后第4周。取缺血下肢肌肉组织行免疫组织化学染色,评价血管密度。分离小鼠股骨和胫骨骨髓间充质干细胞,采用流式细胞术鉴定内皮祖细胞,收集后进行培养,观察其增殖和分化能力。结果小鼠静脉注射四氧嘧啶后,出现典型1型糖尿病表现。1型糖尿病小鼠下肢缺血后血流恢复、缺血肢体肌肉血管密度及1型糖尿病小鼠骨髓内皮祖细胞的数量、增殖和分化能力均显著低于对照组(P<0.001,P<0.05)。结论1型糖尿病小鼠肢体对缺血刺激的反应明显减弱,可能与糖尿病状态下内皮祖细胞的数量和功能降低有关。
- 李拥军柳夏林刘昌伟管珩林清
- 关键词：糖尿病外周血管病变内皮祖细胞
