国家自然科学基金(81371901)
- 作品数：13 被引量：75H指数：6
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- 基于信号放大技术的 miRNA 检测方法的研究进展被引量：3
- 2016年
- MicroRNA（miRNA）是一类内源性的单链非编码 RNA，其可通过与靶 mRNA 结合发挥基因转录后调控作用，在生物体的生长发育、代谢调控等生理过程及疾病预测与干预方面起着重要的作用。因此，miRNA 的检测在疾病诊断以及生物学的功能分析方面意义重大。但由于 miRNA 具有序列短、丰度低以及同源性高等自身限制因素，使得一些传统的检测方法存在灵敏度欠佳、操作复杂等不足，因而无法满足当前需求。本文阐释了近年来基于信号放大技术的 miRNA 检测方法的最新研究，对各类新型改良检测技术的优缺点进行了分析。
- 招嘉敏吕微风郑磊
- 关键词：核糖核酸信号放大
- 血清外泌体miR-744-5p在非小细胞肺癌中的表达水平及其临床意义被引量：13
- 2020年
- 目的研究血清外泌体miR-744-5p在非小细胞肺癌中的表达变化及临床应用价值。方法回顾性研究。收集南方医科大学南方医院2016年11月至2018年2月就诊的92例非小细胞肺癌患者和91名健康对照者的血清,分离血清外泌体,同时进行RNA提取。应用实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测血清外泌体miR-744-5p的表达量,利用受试者工作特征(ROC)曲线评价外泌体miR-744-5p的诊断效能。结果非小细胞肺癌患者血清外泌体miR-744-5p的表达水平(0.0122±0.0197)较健康对照组(0.0936±0.0819)明显下调,差异有统计学意义(U=553.5,P<0.001)。在肺癌组中,早、晚期肺癌患者血清外泌体miR-744-5p的表达水平(0.0117±0.0139,0.0126±0.0212)与健康对照组相比,均明显降低(U=72.5,U=471.5,P均<0.001);肺腺癌外泌体miR-744-5p表达水平(0.0106±0.0203)低于肺鳞癌(0.0173±0.0178),差异具有统计学意义(U=394.5,P<0.001)。ROC曲线显示血清外泌体miR-744-5p能够有效区分非小细胞肺癌患者和健康人群,曲线下面积为0.9339(95%CI=0.8996~0.9681,P<0.0001);外泌体miRNA-744-5p能够有效诊断早期肺癌,曲线下面积为0.9431(95%CI=0.8837~1.0000,P<0.0001)。结论血清外泌体miR-744-5p有希望作为非小细胞肺癌非侵入性的分子诊断标志物,但尚需要进一步比较研究和扩大验证。
- 李少鹏张鑫张涵郑磊
- 关键词：外泌体微RNAS
- 基于催化茎环自组装技术的非酶依赖性microRNA荧光检测的方法学研究
- 研究背景和目的微小核糖核酸（microRNA,miRNA）是一类内源性的非编码单链RNA,广泛存在于真核细胞中,被认为是一类极具应用潜能的新型生物标志物,有望在疾病诊疗和预后判断等方面发挥重要作用。然而,成熟miRNA的...
- 招嘉敏
- 关键词：微小核糖核酸生物传感器
- 电化学生物传感器在microRNA检测中的应用被引量：2
- 2015年
- MicroRNA(miRNA)是一种内源性的单链非编码RNA,参与细胞的增殖凋亡分化和代谢等重要生理过程。近年来发现循环miRNA能够耐受RNA酶消化、强酸强碱、煮沸等极端条件,是一种潜在的疾病标志物。因此,miRNA的检测对疾病的早期诊断具有重要的生物学意义。电化学生物传感器由于其简易、便携、灵敏、反应快速以及价格低廉等特点而被研究者广泛应用于mi RNA检测的研究。本文综述了miRNA的电化学传感器的研究进展,评述了各类方法的优缺点,并对mi RNA电化学检测的发展趋势进行了展望。
- 马雯吕微风郑磊
- 关键词：生物标志物电化学生物传感器
- miRNA-27b抑制PPARγ促进乳腺癌细胞增殖被引量：6
- 2014年
- 目的:通过体外实验研究过表达miR-27b对乳腺癌细胞系MCF-7增殖方面的影响,并探讨miR-27b的作用机制。方法:通过脂质体介导,将miR-27b mimics转染入MCF-7细胞,用荧光定量PCR检测细胞miR-27b的表达,用Western Blot检测PPARγ与NHE1的表达情况,再通过CCK8实验观察细胞增殖能力的改变。结果:MCF-7转染miR-27b mimics后,miR-27b的表达明显上调(P<0.05)。在蛋白水平,过表达miR-27b后,PPARγ的表达明显下调,而NHE1的表达明显上调。CCK8结果显示过表达miR-27b,细胞增殖作用增强。结论:miR-27b可抑制MCF-7细胞中靶基因PPARγ的表达,上调NHE1的表达水平,并且促进细胞增殖。
- 张诗蒙刘非尹小毛郑磊王前
- 关键词：乳腺肿瘤PPARΓNHE1
- 杂交链反应在生物传感检测技术中的应用被引量：1
- 2018年
- 开发功能强大、简单可行且成本低廉的DNA扩增技术对生物分析和生物医学研究意义重大。目前,已开发出了许多信号放大策略,例如聚合酶链反应(PCR)、滚环扩增(RCA)和DNA链置换扩增(SDA)。其中杂交链反应(HCR)是利用一种立足点介导的链置换反应,其具有不需要酶介导、可在等温条件下进行、实验方案简单、扩增效率高等多种优点,引起了研究者的极大兴趣。在典型的HCR反应中,靶物质引发两个DNA发夹的交叉结合,产生类似于交替共聚物的DNA双螺旋结构。作为一个高效的扩增策略,HCR已被用于检测各种分析物,包括核酸、蛋白质、小分子和细胞。该综述对HCR在生物传感检测中的应用进行了总结,同时分析了HCR面临的挑战与机遇。
- 梁栋国陈星兆吴宏祥张晔罗世华郑磊
- 关键词：生物传感核酸扩增技术
- 血清中外泌体及外泌体RNA提取方法的比较被引量：19
- 2016年
- 目的评价超高速离心法、ExoQuick与TEI试剂盒提取血清中外泌体的价值。方法方法学比较。收集2015年8至11月南方医科大学南方医院检验科健康者3名，采集静脉血至采血管，4℃静置12h使其自然凝固后离心取上清液为血清，采用超高速离心法、ExoQuick与TEI试剂盒提取血清中外泌体，通过透射电子显微镜、蛋白印迹技术和NTA颗粒粒度分析仪检测外泌体形态结构、蛋白表达量和浓度与粒径分布，评估外泌体提取效率；采用超高速离心法＋Trizol LS法、ExoQuick＋SeraMir、TEI＋TER与ExoRNeasy试剂盒提取法分离3例血清中外泌体总RNA（exo—RNA），利用Agilent生物分析仪分析RNA片段分布，实时荧光定量PCR仪检测miRNA表达水平。组间蛋白浓度与miRNA表达量的比较采用方差分析。结果外泌体提取方法中，比较外泌体浓度和其蛋白浓度，ExoQuick与TEI试剂盒提取浓度高于超高速离心法；超高速离心法提取外泌体同时表达CD9、CD63和TSG101蛋白，而ExoQuick与TEI试剂盒提取外泌体仅表达TSG101。外泌体RNA提取方法中，不同方法影响RNA片段分布和miRNA表达，未影响miRNA相对表达趋势；ExoRNeasy提取RNA条带浓度较高，各miRNA表达水平较高；TEI＋TER法未见明显RNA条带，样本中各miRNA表达水平稳定；超高速离心法＋TrizolLS法与ExoQuick＋SeraMir法提取RNA可见范围较广的低浓度条带，此两法提取RNA中各miRNA表达无明显规律。结论外泌体提取方法中传统超高速离心法适用于蛋白组学方面研究，而ExoQuick与TEI试剂盒提取方法适用于血清等稀缺样本外泌体制备。
- 黄依瑶唐月汀覃思华徐咏安泰学郑磊
- 关键词：外泌体微RNAS超速离心法
- 循环microRNA检测技术及分析前质量控制被引量：1
- 2015年
- miRNA在许多疾病中起着重要作用，如与细胞增殖、分化和凋亡等相关。鉴于循环miRNA的稳定性，血液标本获取的无创性，因此它可作为生物标志物应用于临床。目前miRNA检测方法多样，影响其检测的因素很多，无统一操作规程，本文即对miRNA的检测技术及分析前影响因素进行探讨。
- 曹顺旺尹小毛郑磊王前
- 关键词：微RNAS临床实验室技术生物学标记
- 尿液细胞外囊泡检测及其临床应用进展被引量：1
- 2017年
- 细胞外囊泡(EV)是机体内细胞在向外出芽和细胞膜裂变过程中释放出的微小囊泡,内含特异性生物活性分子,如蛋白质、核酸和脂质,因此有望成为临床疾病新型标志物。EV广泛存在于人类的各种体液中,其中尿液是研究EV的良好对象,具有标本量充足、标本易得且无创等特点。尿液EV内容物是潜在的疾病标志物。文章对尿液EV的检测方法及其临床应用作了综述。
- 徐咏郑磊
- 关键词：尿液
- 基于DNA自组装放大系统的mcr--1耐药基因电化学传感检测技术的方法学研究
- 多粘菌素是从多粘杆菌的培养液中分离得到的多肽类抗生素，对多数革兰氏阴性需氧菌有杀灭作用，但因其显著的肾毒性和神经毒性，在过去很少用于临床。但是，随着近些年来超级细菌等多重耐药菌的不断涌现，大多数抗菌药物束手无策，而多粘菌...
- 柴志欣
- 关键词：多粘菌素
- 文献传递
