国家自然科学基金(39970788)
- 作品数：5 被引量：12H指数：2
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- 相关机构：第四军医大学唐都医院第四军医大学西京医院更多>>
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- HSV-tk、重组人IL-2、TNF-α融合基因对喉癌细胞Hep-2杀伤作用的体外研究被引量：1
- 2002年
- 目的:观察自杀基因HSV-tk与不同细胞因子基因(IL-2、TNF-α)构建的不同融合基因表达产物对喉癌细胞系的体外杀伤作用。方法:分别构建不同融合基因逆转录表达载体PL(TI)SN,PL(N)SN,PL(TK)SN,在LipofectAMINETM2000介导下转染PA317包装细胞,G418筛选,直至出现抗性克隆,扩大培养,用NIH3T3测定病毒滴度,将各重组病毒分别感染人喉癌细胞系Hep-2,G418筛选出抗性克隆,分别命名为Hep/TI,Hep/TT,Hep/TK,以RT-PCR及Southern blot检测各融合基因的整合及表达。通过观察各基因修饰细胞生长状况及GCV杀伤实验鉴定融合基因的表达及杀伤效应。结果:RT-PCR及South-ern blot分析证明各重组外源基因在人喉癌细胞系Hep-2中均有整合及表达。Hep/TI,HeP/TK生长速度无明显差别,Hep/TT细胞增殖速度受到抑制。在GCV杀伤试验中,Hep/TI,Hep/TT,Hep/TK均显示出对GCV的高敏感性,其中GCV对Hep/TT的杀伤作用最为明显,各基因修饰细胞与不同比例亲本细胞混合,均显示出明显旁观者效应。结论:自杀基因与细胞因子基因共表达体系对喉癌细胞系Hep-2体外杀伤具有协同作用,并且有明显的旁观者效应,可望成为肿瘤基因治疗的新途径。
- 成诗银张惠中鱼兵
- 关键词：HEP-2杀伤作用喉癌HSV-TK基因
- 不同前药联合HSV-tk自杀基因系统对喉癌细胞体外杀伤效应的比较研究被引量：1
- 2003年
- 目的 观察并比较不同前药与自杀基因HSV -tk共同作用对喉癌细胞Hep -2的体外杀伤作用。方法 构建tk基因逆转录表达载体pL(tk)SN ,在LipofectAMINETM2 0 0 0介导下转染PA3 17包装细胞 ,G418筛选 ,直至出现抗性克隆 ,扩大培养 ,用NIH3T3测定病毒滴度 ,将重组病毒分别感染人喉癌细胞Hep -2 ,G418筛选出抗性克隆命名为Hep/tk ,以RT -PCR及Southernblot检测tk基因的整合及表达。通过观察tk基因修饰细胞生长状况及比较不同前药对喉癌细胞杀伤效应以探讨不同前药作用机理。结果 RT -PCR及Southernblot分析证明tk基因在人喉癌细胞系Hep -2中有整合及表达 ;Hep/tk与未转基因的原肿瘤细胞相比 ,二者生长速度及形态结构无明显差别 ;在不同前药敏感性试验中 ,Hep/tk显示出对GCV的高敏感性 ,而tk阳性和tk阴性细胞均显示对ACV和BVdU相对不敏感 ,tk基因修饰细胞与不同比例亲本细胞混合后经GCV治疗均显示出明显旁观者效应。结论 人喉癌细胞系Hep -2对HSV -tk/GCV系统高度敏感 ,并且有明显的旁观者效应 ,可望成为喉癌基因治疗的新途径。
- 闫露栗艳沈敏
- 关键词：喉癌HSV-TK基因
- hTERT基因启动子调控HSV-tk/GCV系统对HeLa细胞杀伤作用被引量：4
- 2006年
- 目的:研究人端粒酶逆转录酶(hTERT)基因核心启动子调控的人单纯疱疹病毒胸苷激酶基因/更昔洛韦(HSV-tk/GCV)系统对宫颈癌细胞的体外杀伤作用.方法:构建hTERT基因启动子调控的tk基因真核表达载体pCI-neo/hTERT-tk,分别用脂质体法转染宫颈癌细胞(HeLa)和正常血管内皮细胞(ECV304),新霉素(G418)筛选阳性克隆扩增.用RT-PCR法比较两种细胞tk基因的表达情况;给予前药更昔洛韦(GCV),用流式细胞术检测hTERT调控的HSV-tk/GCV系统对两种细胞的杀伤作用.结果:hTERT启动子调控下的HSV-tk/GCV系统对宫颈癌HeLa细胞有明显的杀伤作用,使36.7%的细胞凋亡;而对正常细胞ECV304作用则不明显.结论:hTERT启动子调控的tk基因治疗是一种具有肿瘤特异性的治疗方法,有望解决肿瘤基因治疗中的特异性杀伤及降低毒副作用等问题.
- 卞卡张惠中任继鸿赵辉成诗银
- 关键词：末端转移酶TK基因
- Hsv-tk、重组人TNF-α融合基因表达载体的构建及瞬时表达被引量：5
- 2002年
- 目的 :构建 pEGFP -TK -rhTNF -α表达载体 ,观察其在喉癌细胞Hep - 2中的瞬时表达。方法 :应用PCR方法对各目的基因进行扩增并经测序载体 pGEM -T -Easy测序 ,利用逆转录病毒载体PLXSN中的多克隆位点将二者融合为融合基因TK -rhTNF -α并将其亚克隆至pEGFP -N3的EcoRI和BamHI位点间 ,成功构建表达载体 pEGFP -TK -rhTNF -α ,并在该载体转染人喉癌细胞Hep - 2后观察融合蛋白表达情况。结果 :酶切鉴定证实TK -rhTNF -α融合基因片段已克隆到pEGFP -N3的EcoRI和BamHI位点间 ,并在转染人喉癌细胞Hep - 2中观察到TK -rhTNF -α融合基因及绿色荧光蛋白的表达。结论 :pEGFP -TK -rhTNF -α表达载体便于观察转染细胞中TK -rhTNF -α融合蛋白的表达情况及蛋白定位 。
- 成诗银鱼兵张惠中
- 关键词：HSV-TK基因肿瘤坏死因子-Α融合基因
- 联合应用自杀基因和细胞因子基因对人喉癌抑制作用的实验研究(英文)被引量：1
- 2004年
- 摘要背景:目前喉癌的治疗方法对于晚期复发和远隔转移病例难以获得满意效果,自杀基因联合免疫基因疗法可能能够长期提高肿瘤患者的生存率及生活质量。目的:构建含有单纯疱疹病毒胸苷激酶基因(HSV-tk)、重组人白介素2(rhIL-2)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)(rhTNF-α)不同组合融合基因的反转录病毒表达载体,寻找一个更有利于患者生存期内不易复发、根治效果良好、有利于社会、心理、生活质量基因治疗的理论基础。设计:前瞻性实验研究。地点和对象:实验在第四军医大学唐都医院全军骨肿瘤研究所完成,对象为HSV-tk、白介素2(IL-2)、TNF-α融合基因。干预:以RT-PCR制备人IL-2cDNA,分别以PCR方法扩增3目的基因,扩增产物纯化、测序后以定向克隆方法依次将各片段正向插入至pLXSN表达载体的多克隆位点间,以构建含不同融合基因的真核表达载体。主要观察指标:各目的基因PCR扩增结果,目的载体的酶切鉴定,PCR鉴定目的载体。结果:pL(TIT)SN经EcoRI,BamHI双酶切得到大小约2.07kb融合基因片段,pL(TI)SN经EcoRI,XhoI酶切得到大小约1.58kb融合基因片段,pL(TT)SN经EcoRI,BamHI双酶切得到大小约1.59kb融合基因片段,pL(TK)SN经EcoRI,BamHI双酶切得到大小约1.13kb片段。经限制性酶切分析及PCR方法鉴定,各插入基因及融合基因大小、?
- 鱼兵成诗银张惠中
- 关键词：基因白细胞介素2肿瘤坏死因子基因表达
