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国家自然科学基金(31071709)
作品数:
1
被引量:2
H指数:1
相关作者:
张友军
王相晶
王少丽
吴青君
谢文
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相关机构:
东北农业大学
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发文基金:
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2012
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小菜蛾ISSR-PCR反应体系的建立与正交设计优化
被引量:2
2012年
以小菜蛾(Plutella xylostella)基因组DNA为模板,采用L16(45)正交试验设计方法,建立小菜蛾的ISSR最佳反应体系。通过梯度退火试验,确定不同引物的最适退火温度。优化得到的反应体系(20μL)为:Mg2+浓度1.5mmol/L、Taq DNA聚合酶2.5U、dNTPs浓度0.2mmol/L、引物浓度1.25μmol/L、模板DNA量20ng。反应程序为:94℃预变性5.0min;94℃变性45.0s,40~61℃(不同引物退火温度各异)退火1.0min,72℃延伸1.5min,40个循环;72℃延伸10.0min;10℃保存。利用所建立的ISSR-PCR反应体系,获得了清晰、重复性好的DNA谱带。
杨家强
王相晶
郭兆将
朱勋
吴青君
谢文
王少丽
徐宝云
张友军
关键词:
小菜蛾
ISSR
正交设计
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