国家自然科学基金(31101669)
- 作品数：2 被引量：8H指数：2
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- 相关领域：生物学更多>>
- 家蝇MdSOD3基因的鉴定及其在抵抗重金属胁迫中的作用被引量：5
- 2012年
- 超氧化物歧化酶(SOD)是一种重要的抗氧化酶,在昆虫抗氧化保护过程中起着重要作用。本研究通过RT-PCR技术鉴定了家蝇Musca domestica MdSOD3基因(GenBank登录号为JQ408979),cDNA序列817bp,开放阅读框534bp,推导的多肽序列含有177个氨基酸。同源性分析及NJ法系统分析表明MdSOD3与其他物种的Cu/ZnSOD关系较近。荧光定量PCR检测该基因在家蝇幼虫脂肪体、肠、表皮和血细胞中不存在差异表达;在受到不同浓度重金属Cd2+刺激时,MdSOD3基因呈诱导性表达,5mmol/L时表达量最高。通过RNAi策略技术成功敲低MdSOD3表达水平。将RNA干扰60h的幼虫置于5mmol/LCd2+处理24h后死亡率明显升高,并且出现中毒表象。NBT活性染色检测到体外重组表达的MdSOD3具有明显的酶活性。结果提示MdSOD3基因可能在家蝇抗逆防御过程中起着重要作用。
- 唐婷高一夫刘艳娟葛旭东李响柳峰松
- 关键词：家蝇超氧化物歧化酶RNA干扰重金属胁迫
- 家蝇Denfensin-1基因的克隆、诱导表达及启动子活性分析被引量：4
- 2013年
- 【目的】鉴定一种新的家蝇Musca domestica防御素基因,并分析其功能。【方法】从家蝇转录组数据库中鉴定了1条新的防御素基因cDNA序列,并将其命名为家蝇防御素1(Md-defensin-1)基因Mdde-1。利用生物信息学网站、软件预测其结构等信息。以实时荧光定量PCR技术研究该基因的表达模式,并且利用基因步移技术获得了启动子序列,同时采取细胞转染技术验证Mdde-1启动子活性。【结果】该序列包含一个276 bp的开放阅读框,编码91个氨基酸残基。推导的氨基酸序列N端包括1个23个氨基酸残基的信号肽和1个28个氨基酸残基的前肽。成熟肽由40个氨基酸残基组成,含有1个典型的CSαβ基序。实时荧光定量PCR结果显示,家蝇2龄幼虫受金黄色葡萄球菌Staphylococcus aureus(G+)刺激后Mdde-1表达明显上调,而大肠杆菌Escherichia coli(G-)刺激后表达下调;Mdde-1在家蝇幼虫受到热激时呈上调表达。为进一步研究其调控机制,克隆了Mdde-1启动子,并证明了该启动子具有活性。【结论】据此认为Mdde-1是一种新的家蝇防御素,并且在免疫革兰氏阳性菌方面发挥重要作用;同时我们首先证明了Mdde-1的启动子具有活性。本研究为进一步研究家蝇防御素的作用机制奠定了基础。
- 卢丹郑立王欣欣王凡唐婷柳峰松
- 关键词：家蝇先天免疫抗菌肽防御素启动子
