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霍英东教育基金(94020)

作品数：4 被引量：13H指数：2
相关作者：邝冠明郑召民李佛保董智勇吕游更多>>
相关机构：中山大学附属第一医院香港大学更多>>
发文基金：霍英东教育基金广东省自然科学基金更多>>
相关领域：医药卫生更多>>

文献类型

  • 4篇中文期刊文章

领域

  • 4篇医药卫生

主题

  • 4篇腺相关病毒
  • 3篇蛋白
  • 3篇基因
  • 3篇骨形成
  • 3篇骨形成蛋白
  • 2篇荧光
  • 2篇荧光蛋白
  • 2篇人骨形成蛋白
  • 2篇绿色荧光
  • 2篇绿色荧光蛋白
  • 2篇骨组织
  • 2篇骨组织工程
  • 2篇成骨
  • 1篇形态发生蛋白
  • 1篇诱导成骨
  • 1篇增强型绿色
  • 1篇增强型绿色荧...
  • 1篇体外
  • 1篇体外转染
  • 1篇人骨

机构

  • 4篇中山大学附属...
  • 1篇香港大学

作者

  • 4篇郑召民
  • 4篇邝冠明
  • 3篇李佛保
  • 3篇董智勇
  • 1篇刘辉
  • 1篇陈辉
  • 1篇张奎渤
  • 1篇吕游

传媒

  • 1篇中华外科杂志
  • 1篇中国修复重建...
  • 1篇中华创伤骨科...
  • 1篇中国组织工程...

年份

  • 1篇2010
  • 1篇2009
  • 1篇2007
  • 1篇2006
共 4 条 记 录，以下是 1-4
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排序方式：
人骨形成蛋白4基因腺相关病毒及绿色荧光蛋白基因腺相关病毒体外诱导成骨的比较
2010年
背景:由于骨形成蛋白的释放速度与新骨生长速度不匹配,单纯应用骨形成蛋白的效果尚不理想,因此,应有合适的载体来调节骨形成蛋白的释放速度。目的:观察重组人骨形成蛋白4基因腺相关病毒及绿色荧光蛋白基因腺相关病毒诱导兔骨髓间充质干细胞向成骨方向分化的作用。方法:全骨髓法培养兔骨髓间充质干细胞,分别应用人骨形态形成蛋白4基因腺相关病毒载体及绿色荧光蛋白基因腺相关病毒转染兔骨髓间充质干细胞,设定感染复数值为5×104,观察两组细胞形态改变,分别行碱性磷酸酶染色、Von Kossa染色、茜素红染色及碱性磷酸酶含量测定,比较两组成骨活性差异。结果与结论:人骨形态形成蛋白4基因腺相关病毒组转染骨髓间充质干细胞后,细胞形态呈现典型的成骨改变,碱性磷酸酶染色及Von Kossa染色、茜素红染色均出现成骨的特征性改变。绿色荧光蛋白基因腺相关病毒组未观察到上述改变。人骨形态形成蛋白4基因腺相关病毒组碱性磷酸酶含量高于绿色荧光蛋白基因腺相关病毒组(P<0.01)。提示人骨形态形成蛋白4基因腺相关病毒转染骨髓间充质干细胞后,骨髓间充质干细胞表现出更加明显的成骨活性改变。
赵希春董智勇郑召民邝冠明
关键词：人骨形成蛋白绿色荧光蛋白腺相关病毒骨组织工程
兔骨髓基质干细胞成骨诱导及增强型绿色荧光蛋白基因腺相关病毒体外转染的研究被引量：10
2006年
目的探讨重组增强型绿色荧光蛋白基因腺相关病毒（AAV—EGFP）对细胞生物学行为的影响，为组织工程寻找一种理想的病毒载体及细胞示踪标记方法。方法采用全骨髓法分离培养BMSCs，诱导培养液诱导细胞成骨转化，行细胞形态学检查、细胞表面抗原鉴定、碱性磷酸酶（ALP）染色及Von Kossa染色，评价细胞成骨情况。在此基础上转染AAV—EGFP，观察细胞形态学改变及荧光表达的时间与强度，计算转染效率，确定转染的较佳感染复数（MOI）值，MTT法描记细胞生长曲线，观察AAV载体对细胞活性的影响。结果细胞扩增迅速、形态良好、纯度较高，经诱导后呈现明显的成骨改变。实验确定AAV转染细胞的较佳MOI值为1×10^5，以此值转染AAV—EGFP后细胞荧光持续高效稳定表达（〉8周），并可随细胞有丝分裂传至子代，可以满足示踪标记的需要，AAV转染效率高，对细胞活性影响小。结论AAV长期稳定表达目的基因，是一种理想的组织工程病毒载体；基于基因转染方法高效稳定表达EGFP，可作为种子细胞良好的示踪标记方法。
郑召民董智勇邝冠明李佛保
关键词：骨髓基质干细胞成骨诱导腺相关病毒增强型绿色荧光蛋白转染
人骨形成蛋白4基因修饰的组织工程化骨促进脊柱融合的研究被引量：1
2009年
目的探讨人骨形成蛋白4（hBMP-4）基因修饰的组织工程化骨促进兔脊柱融合的能力，为自体骨寻找理想的移植替代材料。方法重组hBMP-4基因腺相关病毒（AAV-hBMP-4）和重组增强型绿色荧光蛋白（EGFP）基因腺相关病毒（AAV—EGFP）分别按实验确定的最佳感染复数（MOI）值转染兔骨髓间充质干细胞，复合Ⅰ型胶原海绵，构建出表达hBMP-4基因的组织工程化骨及表达对照基因EGFP的人工骨。采用新西兰兔后外侧脊柱融合模型，自身侧侧对照进行实验。14只实验动物随机分为2组，A组右侧为hBMP-4植入侧，左侧为自体骨对照侧。B组右侧为hBMP-4植入侧，左侧为EGFP对照侧。融合术后12周处死动物，评价不同移植物促进脊柱融合的情况。结果术后2组各6只新西兰兔符合标准。术后第12周X线片、三维CT及扪诊检查示hBMP-4侧共11例达到骨性融合（11／12），自体骨侧5例融合（5／6），EGFP侧仅2例融合（2／6）。大体标本观察hBMP-4及自体骨侧新生骨增生明显；EGFP侧成骨量少。结论hBMP-4基因修饰的组织工程化骨在动物体内可以有效地促进成骨，提高脊柱融合率，可望成为一种理想的自体骨移植替代物。
郑召民董智勇邝冠明陈辉吕游张奎渤刘辉李佛保
关键词：骨形态发生蛋白质类基因修饰腺相关病毒
重组人骨形成蛋白4基因腺相关病毒载体的构建被引量：5
2007年
目的构建重组人骨形成蛋白4(human bone morphogenetic protein 4,hBMP-4)基因腺相关病毒载体。方法根据hBMP-4的基因序列设计引物,上游引入EcoR位点,下游引入Sal位点,以EX-A0242-M01-hBMP-4为模板扩增目的基因。将hBMP-4基因克隆入pUC18载体中,获得重组质粒pUC18-hBMP-4。然后用EcoR与Sal酶切pUC18-hBMP-4及质粒pSNAV,回收酶切片段,T4DNA连接酶16℃过夜,转化大肠杆菌DH5α感受肽细胞,筛选阳性克隆获得pSNAV-hBMP-4,EcoR/Sal双酶切鉴定,并行全基因测序。转染BHK21细胞,G418筛选培养,获得抗药克隆细胞株。HSV1-rc/△UL2感染,包装此细胞株并收获病毒载体AAV-hBMP-4。行DNA点杂交法测定病毒滴度,SDS-PAGE分析判断病毒纯度。结果PCR电泳及酶切鉴定表明,pSNAV-hBMP-4重组成功,基因测序显示装入pSNAV质粒中的hBMP-4基因正确;AAV-hBMP-4病毒的大致滴度为1.5×1012μg/ml,分泌蛋白浓度为0.124mg/ml,病毒载体纯度在95%以上。结论实验获得的病毒载体滴度高、感染性好,可以满足骨组织工程的需要。
董智勇郑召民邝冠明李佛保
关键词：骨组织工程重组人骨形成蛋白腺相关病毒
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