国家自然科学基金(30070802)
- 作品数：9 被引量：42H指数：4
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- 同源盒基因Pax-6在晶状体发育过程中的表达分析被引量：4
- 2003年
- 目的 建立晶状体连续发育模型,检测Pax-6基因在小鼠晶状体发育的不同阶段的表达情况,探讨该基因在小鼠晶状体发育中的作用。 方法 利用RT-PCR法和Western blot法,检测Pax-6在小鼠晶状体发育不同阶段中的表达状况。 结果 在鼠胚9.5 d(E 9.5)即可检测到Pax-6的表达,在其连续发育阶段的E12.5,E17.5及新生10、20、60 d均可检测到Pax-6的表达。Western blot法同样发现在体外培养的原代细胞,传第1、第2及第3代的晶状体上皮细胞(LECs)中均能检测到Pax-6蛋白水平的表达。 结论 小鼠晶状体发育的各个阶段均具有Pax-6基因,该基因的正常表达是晶状体发育的必要条件。
- 夏朝霞刘奕志刘欣华
- 关键词：晶状体蛋白同源盒基因
- 兔晶状体蛋白质组的双向电泳和质谱鉴定研究被引量：15
- 2004年
- 目的 探讨双向电泳和质谱鉴定在晶状体蛋白质组特性研究中的价值 ,为白内障的防治提供新的有效途径。方法 采用固相 pH梯度 (IPG)等电聚焦双向凝胶电泳方法对兔龄为 3个月的新西兰兔透明晶状体蛋白质进行分离 ,使用ImageMaster 2DElite 3.0 1图像分析软件分析电泳图像 ,使用基质辅助激光解吸附飞行时间质谱仪对主要的高丰度晶状体蛋白质进行鉴定。结果 双向电泳图谱显示 ,在 2 5 0 μg兔晶状体中蛋白质分布在等电点 (PI)为 pH值 5～ 9、相对分子质量为14 0 0 0～ 94 0 0 0的区域内 ;而高丰度晶状体蛋白质的相对分子质量为 14 0 0 0～ 4 0 0 0 0。图像分析软件定量检出 180个蛋白质斑点的近似PI、相对分子质量及蛋白质相对含量 ,质谱鉴定得到其中 16个高丰度晶状体蛋白质的种类。结论 双向电泳和质谱鉴定可有效分离和分析晶状体蛋白质组的特性 ,为分析白内障形成过程中蛋白质的表达改变提供了新的方法和途径 ,为白内障的防治带来了新的前景。
- 刘奕志张敏柳夏林黄强刘欣华夏朝霞吴明星
- 关键词：双向电泳质谱鉴定白内障
- 兔眼晶状体再生模型的建立及观察被引量：7
- 2002年
- 目的:建立兔眼晶状体再生模型,探讨晶状体上皮细胞生长及晶状体再生的机制。方法:在8只新西兰白兔兔眼上行超声乳化晶状体吸除术,建立晶状体囊袋模型,术后裂隙灯观察晶状体再生并行再生晶状体的组织学检查。结果:术中撕囊口较小并有相对完整囊袋结构的实验兔眼可观察到晶状体再生;再生晶状体周边及前囊下有较好的透明性,越接近中央及后囊越混浊;组织学研究表明再生晶状体的赤道部晶状体上皮细胞增殖分化形成晶状体纤维,中央区LEC未参与增殖分化;再生晶状体的混浊部位其晶状体纤维排列混乱;囊膜皱折区有大量细胞增殖。结论:保留晶状体囊袋空间结构的相对完整性,可使兔眼晶状体再生;晶状体再生是赤道部晶状体上皮细胞增殖分化形成,囊膜形态结构影响细胞的增殖和分化。眼科学报 2002;18:230-234,248.
- 柳夏林张新愉刘奕志刘欣华
- 关键词：晶状体动物模型
- 成纤维细胞生长因子与后发性白内障的关系被引量：8
- 2002年
- 目的 研究碱性成纤维细胞生长因子 (basefibfroblastgrowthfactor ,bFGF)对白内障术晶状体上皮细胞增生过程中的影响。方法 在培养的牛晶状体上皮中添加bFGF ,甲基噻唑基四唑 (methylthiazoly1tetrazolium ,MTT)法测定细胞增生情况以及流式细胞仪分析细胞周期。结果 bFGF浓度为 10 -1～ 10 -2 ng/ml对牛眼晶状体上皮细胞增生有促进作用 ,且以 10ng/ml浓度作用最佳。结论 bFGF与其受体结合后可促进晶状体上皮细胞增生 。
- 刘欣华刘奕志柳夏林吴明星
- 关键词：晶状体上皮细胞成纤维细胞生长因子后发性白内障BFGF
- 高糖对人晶状体上皮细胞缝隙连接细胞间通讯的影响被引量：4
- 2005年
- 【目的】研究高糖对人晶状体上皮细胞缝隙连接细胞通讯活性(GJIC)的影响。【方法】将人晶状体上皮细胞(SRA01/04)培养于正常葡萄糖浓度(5.5mmol/L),传代时将其接种于16个35mm的培养皿中,实验分为4组(每组4个培养皿):正常糖浓度组(培养基葡萄糖含量是5.5mmol/L)、高糖组(培养基葡萄糖含量是30mmol/L)、佛波酯(TPA)组(阳性对照)及二甲基亚砜(DMSO)组(阴性对照)。当细胞生长至90%融合时,用划痕荧光染料示踪技术(SL/DT)检测其缝隙连接细胞间通讯活性。【结果】在高糖培养的人晶状体上皮细胞划痕荧光黄向两侧传递的细胞列数为2.23±0.33,明显少于正常糖浓度培养的人晶状体上皮细胞(3.75±0.57,P<0.01)。TPA显著抑制晶状体上皮细胞的GJIC,与正常糖浓度组比较差异具有显著性(1.65±0.26vs3.75±0.57,P<0.01)。【结论】人晶状体上皮细胞缝隙连接细胞间通讯活性在高糖中受到抑制,可能在糖尿病晶状体渗透水肿和离子代谢紊乱中发挥作用。
- 李霞刘奕志吴明星
- 关键词：晶状体上皮细胞糖性白内障
- 同源盒基因Pax-6在鼠晶状体上皮细胞中的表达分析
- 2005年
- 【目的】检测体外培养的鼠晶状体上皮细胞 LECs,内 Pax-6基因的表达,探讨维持晶状体上皮细胞特性的基因因素。【方法】利用免疫组织化学法和免疫印迹法,检测培养的 LgCs 中 Pax-6基因的表达状况。【结果】在原代培养细胞、传第1代及传第2代的 LgCs 中明显检测到 Pax-6的阳性表达。免疫印迹同样发现在原代培养细胞、传第1代及传第2代的 LECs 中均能检测到 Pax-6蛋白水平的表达,传第3代细胞表达微弱。阴性对照在各阶段点未见 Pax-6的表达。【结论】晶状体囊膜上的 LECs 具有 Pax-6基因,该基因的正常表达是维持 LECs 特性的必要条件。
- 夏朝霞刘奕志吴艺
- 关键词：晶状体上皮细胞免疫组织化学免疫印迹基因表达
- 两个常染色体显性遗传先天性白内障家系突变热点筛查被引量：1
- 2005年
- 【目的】对2个常染色体显性遗传先天性白内障中国家系进行基因突变热点筛查,以了解这两个家系的先天性白内障是否与文献报道的17个突变热点相关。【方法】对两个家系共20名成员(包括患者11人,非患者9人)抽取外周血提取基因组DNA,针对截至2003年1月为止国外文献报道的与常染色体显性遗传先天性白内障发病相关的10个基因上的17个突变热点,包括CRYAA(ARG116CYS),CRYAB(del450A),CRYBA1(EX3-4DEL),CRYBB2(GLN155TER),CRYGC(THR5PRO,5-BPDUPatNT226),CRYGD(ARG14-CYS,PRO23THR,ARG58HIS,ARG36SER),GJA3(ASN63SER,PRO187LEU),GJA8(GLU48LYS,PRO88SER),BFSP2(ARG287TRP)及MIP(GLU134GLY,THR138ARG),设计引物使PCR扩增片段涵盖上述热点,对扩增产物进行序列分析,检测这11名患者在突变热点上是否有相应的序列改变。【结果】20名被检者的10个基因片段序列与GenBank发表序列相同,在17个突变热点均未发现相应基因突变。【结论】初步排除这个家系的先天性白内障与17个突变热点相关。
- 张新愉刘奕志罗莉霞吴明星程钢胡斌
- 关键词：先天性白内障家系常染色体显性遗传突变THR扩增产物
- 同源盒基因Pax-6在鼠晶状体上皮细胞中的表达分析被引量：3
- 2003年
- 目的 观察体外培养的小鼠晶状体上皮细胞 (LEC)内同源盒基因Pax 6的表达 ,探讨维持晶状体上皮细胞特性的基因因素。方法 体外培养小鼠原代、传 1代、传 2代及传 3代LEC ,利用免疫组织化学法和免疫印迹法 ,检测细胞中Pax 6基因的蛋白表达情况 ,利用逆转录聚合酶链反应法检测细胞中Pax 6基因的mRNA表达情况。结果 在原代、传 1代及传 2代培养的LEC中均可检测到Pax 6基因蛋白和mRNA的阳性表达 ,传 3代培养的LEC中仅检测到Pax 6基因蛋白的微弱表达。阴性对照均未见Pax 6基因的表达。结论 体外培养的小鼠LEC中具有Pax 6基因 ,该基因的正常表达是维持LEC特性的必要条件。
- 刘奕志夏朝霞柳夏林黄强
- 关键词：同源盒基因PAX-6晶状体上皮细胞LEC
- 晶状体蛋白质双向凝胶电泳的可重复性及分辨率研究被引量：1
- 2004年
- 目的 对晶状体蛋白质双向凝胶电泳进行可重复性及分辨率研究。方法 用固相pH梯度等电聚焦 (IPG DALT)的方法 ,分别选用不同的上样量 ,10 %或 13 %的SDS 聚丙烯酰胺凝胶电泳 ,用银染或考马斯亮蓝染色的方法对 3个月新西兰兔的晶状体蛋白进行分离。结果 当上样量为 15 0 μg ,13 %的分离胶对晶状体蛋白 (crystallin)的分离效果较好 ,当上样量为 1 2mg ,10 %的分离胶对高相对分子质量蛋白的分离效果较好。凝胶点的匹配率为 83 5 %和 91 7%。 结论 用IPG DALT的方法 ,综合小样本量和低密度凝胶电泳与大样本量高密度凝胶电泳结果 ,可以更好地分析晶状体蛋白的分离效果 。
- 刘奕志张敏刘欣华柳夏林黄强
- 关键词：晶状体蛋白质双向凝胶电泳可重复性分辨率
