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重组酵母发酵半纤维素水解液生产酒精的研究被引量：10: 2010年; 玉米秸秆中的半纤维素主要由五碳糖组成,普通的酿酒酵母不能发酵五碳糖。今利用基因重组酵母Sacchromyces cerevisiae ZU-10发酵玉米秸秆半纤维素水解液生产酒精,针对半纤维素水解液中的主要发酵抑制物,研究了硫酸根离子、乙酸、糠醛对重组酵母生长的影响,发现S.cerevisiae ZU-10细胞对SO42·,乙酸和糠醛的耐受浓度分别为5g·L·1、0.25g·L·1和0.08g·L·1。对玉米秸秆半纤维素的水解工艺进行了比较研究,结果表明,玉米秸秆采用1%H2SO4(固液比1:10),在95℃水解12h,其中的半纤维素水解率达到93%,发酵抑制物相对较少。半纤维素水解液经石灰中和、真空浓缩及离子交换处理后,可用于酒精发酵。半纤维素水解液的糖浓度与浓缩倍数及发酵抑制物浓度成正相关,对于重组酵母S.cerevisiae ZU-10,半纤维素水解液的适宜糖浓度为80g·L·1。在此浓度下,接种量1.2g·L·1(细胞干重计)、30℃、厌氧发酵96h,酒精浓度为31.05g·L·1,水解液中的木糖利用率达到95.85%。该研究结果对于促进半纤维素资源的转化利用,加速秸秆酒精的产业化进程具有重要意义。; 赵晶夏黎明; 关键词：酒精发酵木糖半纤维素

厌氧真菌内切-β-葡聚糖酶基因在里氏木霉中的重组与表达被引量：11: 2011年; 里氏木霉(Trichoderm reesei)是重要的纤维素酶生产菌,为了显著提高其产酶性能,拟利用分子生物学技术构建高产的基因工程菌株。将前期优化后的瘤胃厌氧真菌内切-β-葡聚糖酶基因af 2置于里氏木霉纤维二糖水解酶I强启动子Pcbh1(及其信号肽)和终止子Tcbh1之间,并进一步以pCAMBIA1300为载体骨架,构建成含潮霉素B抗性标记的重组质粒pCB-hF。以里氏木霉ZU-02为宿主,采用优化的根瘤农杆菌介导转化技术将重组质粒转入经萌发处理的分生孢子。以潮霉素B为抗性标记初筛到318个阳性转化子,进一步接种到以羧甲基纤维素钠为唯一碳源的筛选培养基上,复筛到8株生长较快的转化子。以重组转化子基因组DNA为模板,分别进行PCR检测,均可获得目的基因片段,表明厌氧真菌内切-β-葡聚糖酶基因已整合到里氏木霉的染色体DNA上。在摇瓶条件下,分别对8个重组转化子进行产酶试验,获得3个高产内切-β-葡聚糖酶活力的转化子。发酵培养96 h时,发酵液的内切-β-葡聚糖酶活力最高可达到126.3 IU?mL-1左右,是出发菌株的4.23倍。研究结果表明:厌氧真菌内切-β-葡聚糖酶基因已在里氏木霉细胞中得到高效表达并实现了胞外分泌。; 金欣夏黎明; 关键词：厌氧真菌基因克隆里氏木霉

利用葡萄糖转苷酶制备纤维素酶可溶性诱导物的研究被引量：7: 2009年; 在纤维素酶生产中,常用的诱导物纤维素是不溶性的固体高分子化合物,存在着传质阻力大、不易于流加培养、产酶效率低等问题。今以葡萄糖为原料,利用葡萄糖转苷酶的催化作用,定向合成纤维素酶的可溶性诱导物。经高效液相色谱分析,发现转糖苷产物中含有纤维素酶的强诱导物槐糖。在50℃下,转糖苷反应的适宜葡萄糖浓度为300～500mg·mL-1,pH3～4.5,反应100h,产物中槐糖含量可达40mg·mL-1。将葡萄糖经转苷酶作用后的复合物用于纤维素酶的生产,与直接采用葡萄糖相比,产酶时间提前25h,滤纸酶活力提高14倍。该研究结果为酶法制备纤维素酶的高效可溶性诱导物探明了一条新途径,对于提高纤维素酶的生产效率、加速其工业化应用具有重要意义。; 黄振艳夏黎明; 关键词：纤维素酶

重组毕赤酵母发酵产纤维二糖酶被引量：2: 2011年; 采用含黑曲霉(Aspergillus niger)纤维二糖酶基因的重组毕赤酵母发酵生产纤维二糖酶,对重组酵母的基因表达调控及发酵性能进行了研究。摇瓶试验结果表明:产酶培养基中甘油和玉米浆粉的适宜浓度分别为2.0%和3.0%,培养基最适pH值为6.0。甲醇作为碳源和基因表达的诱导物,对重组毕赤酵母的发酵结果有重要影响。发酵过程中每24h加入体积分数为1.0%的甲醇、质量浓度为0.2%的甘油及质量浓度为0.3%的玉米浆粉,有利于重组毕赤酵母持续合成纤维二糖酶。摇瓶发酵8d,发酵液中纤维二糖酶活力可达到9.01 IU/mL。; 冀彤王冰冰夏黎明; 关键词：重组毕赤酵母纤维二糖酶发酵

中性内切-β-葡聚糖酶基因在里氏木霉中的重组与表达被引量：9: 2013年; 中性内切-β-葡聚糖酶在棉织物生物整理方面具有重要的应用价值,研究首先从特异腐质霉(Humicola insolens)菌株中克隆到一个中性内切-β-葡聚糖酶基因,将该基因置于里氏木霉(Trichoderma reesei)纤维二糖水解酶I强启动子Pcbh1(及其信号肽)和终止子Tcbh1之间,并以pCAMBIA1300为载体骨架构建重组质粒pCB-PHT。采用根瘤农杆菌介导转化技术将重组质粒pCB-PHT导入里氏木霉的分生孢子中,进一步筛选得到八个重组里氏木霉转化子。摇瓶发酵培养72 h时,发酵液的中性内切-β-葡聚糖酶活力最高可达到98.8 IU mL 1左右,是出发菌株的5.1倍。研究成功地实现了外源中性内切-β-葡聚糖酶在丝状真菌里氏木霉中的重组与胞外表达,有关研究结果将在牛仔布水洗工业中发挥出重要作用。; 顾斌涛江守坤夏黎明; 关键词：里氏木霉基因重组牛仔布生物整理

厌氧真菌内切型-β-葡聚糖酶基因af1在大肠杆菌中的表达: 2014年; 厌氧真菌能够产生高比活力的纤维素酶,但由于对厌氧环境的生产条件要求严格,生长速度缓慢,并不适合规模生产。本研究将厌氧真菌内切型-β-葡聚糖酶基因af1与大肠杆菌表达载体pET-28a(+)连接,得到重组质粒pET-28a(+)-af1。以大肠杆菌BL21(DE3)为宿主,重组质粒转化后获得重组大肠杆菌BL21(DE3)/pET-28a(+)-af1。采用SDS-PAGE蛋白电泳对重组大肠杆菌的表达产物进行分析,在40 kDa附近得到与目的基因af1表达蛋白理论值相当的明显条带。AF1酶蛋白的最适pH为6.0,最适温度为45°C。重组大肠杆菌的摇瓶产酶试验结果显示:诱导培养18 h时,内切型-β-葡聚糖酶(CMC酶)活力可达410 U/mL。该项研究工作为进一步构建内切型-β-葡聚糖酶高产菌株奠定了良好的基础。; 孟楠金欣夏黎明; 关键词：生物化工厌氧真菌重组大肠杆菌基因表达

重组毕氏酵母产中性纤维素酶条件的优化被引量：1: 2012年; 通过对6个重组毕氏酵母转化子的产酶试验,筛选出一个优良转化子。在摇瓶条件下对该重组毕氏酵母的发酵过程进行了研究,得到适宜的培养条件为:250 mL三角瓶装液量30 mL,培养基起始pH4.8,此后不加控制,接种量10%,发酵过程中每隔24h补加1%的甲醇对产酶有明显的促进作用,中性纤维素酶活力可达1 144U/mL。研究结果表明:重组毕氏酵母中性纤维素酶的适宜催化条件为:50℃、pH 6.0;Zn2+和Mg2+对该酶有激活作用,Fe2+、Fe3+和Cu2+对该酶有抑制作用。牛仔服水洗试验结果显示:重组毕氏酵母中性纤维素酶可以明显降低靛蓝对牛仔服的反染作用,其工业应用前景良好。; 江守坤顾斌涛夏黎明; 关键词：毕氏酵母中性纤维素酶基因重组牛仔布生物整理

黑曲霉纤维二糖酶基因的克隆及其在里氏木霉中的表达被引量：15: 2011年; 引言里氏木霉（Trichoderma reesei）是目前常用的纤维素酶生产菌种,其分泌的纤维素酶是一个多组分的复合体系,主要包括5种内切型-β-葡聚糖酶（endo-β-glucanase,EG,EC3.2.1.4）,; 王冰冰夏黎明杜风光; 关键词：纤维二糖酶黑曲霉里氏木霉纤维素酶

植物纤维素原料的生物转化与利用被引量：4: 2010年; 采用生物技术对植物纤维原料进行转化利用,是一项具有重要意义的研究工作。本文简要介绍了纤维素酶的生产、利用纤维素原料生产酒精、乳酸、2,3-丁二醇及木糖醇等方面的研究进展。; 夏黎明; 关键词：植物纤维纤维素酶生物材料

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国家科技支撑计划(2007BAD66B02)

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