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胃癌中新抑癌基因WTX启动子区域甲基化水平的检测(英文)被引量：6: 2013年; 目的探讨抑癌基因WTX启动子区域甲基化水平及其在胃癌中的作用。方法运用MassARRAY定量分析系统分析20例胃癌及配对正常组织和3种胃癌细胞株(MGC803、SCG7901和BGC823)中WTX基因启动子区域甲基化水平。应用5-杂氮-2'-脱氧胞苷(5-aza-dC)对胃癌细胞BGC823进行去甲基化处理,分析其对WTX基因启动子区域甲基化水平的影响。结果在胃癌及其配对正常组织和胃癌细胞株中,WTX基因启动子区域甲基化水平普遍较低,并且3组之间无统计学差异。用5-aza-dC处理后并不能改变胃癌细胞株中WTX基因启动子区域的甲基化水平。结论胃癌中基本不存在WTX基因启动子区域高甲基化状态。; 刘霞王启明牛会林杨学习孙静哲张庆玲丁彦青; 关键词：抑癌基因胃癌甲基化

稳定表达新抑癌基因WTX的胃癌BGC-823/WTX-EGFP细胞株的建立被引量：2: 2011年; 目的构建含有全长WTX(Wilms tumor gene on the X chromosome)目的基因的表达载体,建立稳定表达WTX基因的胃癌BGC-823/WTX-EGFP细胞系,为WTX基因功能研究提供保障。方法以人胚肾293FT细胞为模板,经PCR扩增获得全长WTX cDNA序列,将全长WTX目的基因序列克隆入带有绿色荧光蛋白报告基因的pEGFP-N1表达载体,建立pEGFP-WTX表达载体。经限制性内切酶酶切鉴定、测序并转染293FT细胞观察报告基因表达情况,判断pEGFP-WTX表达载体构建是否成功。构建成功的pEGFP-WTX表达载体转染人胃癌BGC-823细胞,建立稳定表达WTX的BGC-823/WTX-EGFP细胞。qRT-PCR及免疫组化检测转染细胞WTX表达。结果 PCR方法从人胚肾293FT细胞扩增获得全长WTX cDNA,经测序鉴定序列完全正确;pEGFP-WTX质粒DNA经酶切鉴定片段大小正确、转染294FT细胞可见清晰的绿色荧光表达。BGC-823/WTX-EGFP细胞能够稳定表达WTX。结论本研究成功构建了含有全长WTX cDNA的表达载体系统,建立了稳定表达WTX的BGC-823/WTX-EGFP细胞,为WTX基因功能研究奠定了良好基础。; 陈可绪王啓名王啓名吴焕黄怡哲

应用重组慢病毒表达载体建立抑癌基因WTX稳定高表达结直肠癌SW620细胞系: 2015年; 目的构建WTX CDS区全长重组慢病毒表达载体,感染结直肠癌SW620细胞,建立WTX稳定高表达结直肠癌SW620细胞株。方法将WTX基因全长CDS区插入GV287慢病毒质粒载体,重组载体与包装载体共转染人胚肾293T细胞,收集上清、浓缩得到表达WTX的重组慢病毒。慢病毒感染结直肠癌SW620细胞,荧光显微镜初步观察感染效率,G418进一步筛选得到稳定感染细胞株。QPCR及Western blotting检测WTX过表达效率。每部分均设立相应对照。结果载体片段测序结果示成功构建了WTX重组表达载体;包装病毒滴度检测适中,提示WTX表达慢病毒包装成功;慢病毒感染结直肠癌SW620细胞后,WTX基因m RNA以及蛋白表达水平明显增高,有统计学意义,提示SW620结直肠癌细胞WTX高表达稳定株构建成功。结论建立慢病毒感染方法的结直肠癌SW620细胞WTX过表达稳定细胞株,为进一步研究WTX对结直肠癌发生、发展的作用机制提供分子生物学工具。; 马文霞贺莉刘椿张庆玲丁彦青; 关键词：CHROMOSOME 慢病毒载体稳定转染结直肠癌

细胞角蛋白免疫组化染色对胃癌淋巴结转移的诊断意义被引量：1: 2011年; 目的探讨细胞角蛋白(CK)免疫组化染色在判断胃癌淋巴结转移中的作用。方法采用常规HE染色、CK免疫组化染色检测51例胃癌根治术患者的淋巴结转移情况。结果 51例胃癌中,HE、CK免疫组化染色发现淋巴结转移检出率分别为58.8%、80.3%;在送检的848个淋巴结中,HE、CK免疫组化染色显示淋巴结转移率分别为12.3%、23.9%;两种方法的检出率和淋巴结转移率差异有统计学意义(P<0.01或0.05)。CK免疫组化染色的淋巴结转移检出率与胃癌分化呈负相关(r=-0.335,P<0.05)。结论 CK免疫组化染色可明显提高胃癌淋巴结转移的检出率,对判断胃癌分化和指导治疗有重要的临床意义。; 王啓名张庆玲; 关键词：胃癌淋巴结转移免疫组化

miR-572在胃癌组织中的表达被引量：2: 2014年; 目的观察miR-572在胃癌及配对正常胃组织中的表达情况及差异性。方法利用实时荧光定量PCR技术检测26例胃癌组织及其正常胃黏膜组织中miR-572的表达,并分析其与临床病理资料的关系。结果与配对正常胃黏膜组织比较,miR-572在14例胃癌组织中呈高表达,在12例胃癌组织中呈低表达。miR-572在胃癌组织中的表达均高于正常胃黏膜组织(P<0.05);胃癌组织中不同年龄、性别、临床分期、组织学类型、分化程度和有无淋巴结转移之间miR-572的表达差异无统计学意义(P>0.05);而胃癌组织中腺癌、低分化、低分期和淋巴结转移者miR-572呈高表达的趋势。结论 miR-572在胃癌组织中高表达,可能与胃癌发生发展有关,但其临床病理学意义和具体作用机制有待进一步探讨。; 唐开强薛小磊刘霞牛会林王啓名张庆玲; 关键词：胃癌实时荧光定量PCR

新抑癌基因WTX在肾肿瘤中的表达及意义被引量：3: 2011年; 目的探讨定位于X染色体的新抑癌基因WTX mRNA及其蛋白在肾肿瘤及对应正常肾组织中的表达及意义。方法采用地高辛标记cDNA探针原位杂交及免疫组织化学S-P法检测40例肾细胞癌、10例肾母细胞瘤以及对应正常肾组织中WTX mRNA及其蛋白的表达情况。结果 WTX mRNA及其蛋白在正常肾组织中普遍高表达,而在肾母细胞瘤中表达明显降低,差异有统计学意义(P<0.001),在肾细胞癌中表达降低,差异有统计学意义(P<0.05)。WTX mRNA与蛋白表达具有较好的一致性。结论 WTX抗体的应用为WTX蛋白的生物学功能研究奠定了实验基础。WTX表达降低与肾肿瘤有关,可能在肾肿瘤的发生、发展中发挥重要作用。; 张庆玲于莉娜丁彦青; 关键词：肾肿瘤 X染色体

CDC42沉默对结直肠癌细胞形态的影响: 2016年; 目的根据CDC42蛋白二级结构,设计CDC42 si RNA干扰片段,构建CDC42稳定干扰sh RNA载体。观察CDC42有效沉默对结直肠癌SW480细胞形态的影响。方法根据CDC42基因CDS区序列,设计4条si RNA片段。Western blot筛选最有效沉默片段,酶切插入真核表达载体,将构建的sh RNA质粒载体,瞬时转染结直肠癌SW480细胞,QPCR及Western blot验证CDC42沉默效率;观察转染前后,SW480细胞形态变化。结果 4条si RNA转染细胞后,验证结果显示si RNA-3沉默效率大于50%,沉默效果最好,将此片段插入真核表达载体,测序结果提示CDC42 sh RNA构建成功,转染SW480细胞后,CDC42基因m RNA及蛋白水平表达明显下降,差异有统计学意义;显微镜观察CDC42沉默后,SW480细胞周边伪足伸出减少,细胞变光滑,细胞整体体积明显减小。结论成功根据基因序列设计有效沉默片段,构建CDC42稳定沉默载体,证实CDC42沉默可以逆向改变结直肠癌细胞高侵袭性形态,为研究CDC42对结直肠癌的发生、发展提供分子工具。; 贺莉马文霞张庆玲; 关键词：CDC42 结直肠癌细胞形态

CD133/1及Klf4蛋白免疫荧光共定位分析鉴定结直肠癌肿瘤干细胞被引量：2: 2012年; 目的建立新鲜肿瘤组织的肿瘤干细胞筛选方法,寻找结直肠癌组织中肿瘤干细胞。方法收集新鲜结肠癌组织40例,常规冰冻切片后,以CD133/1和Klf4抗体行免疫荧光双染色。比较免疫荧光染色双阳性细胞数量。结果 40例结直肠癌组织中,33例CD133/1阳性,阳性样本中,癌细胞CD133/1阳性率约5%;27例样本Klf4阳性,其内癌细胞的阳性率约10%。其中CD133/1和Klf4双表达的病例样本有26例,样本内CD133/1和Klf4双表达的细胞约占2%。结论 CD133/1和Klf4蛋白共表达细胞可能是候选的结直肠癌干细胞,为肿瘤干细胞筛选及相关抗肿瘤治疗提供保障。; 张庆玲汪志勋丁彦青; 关键词：结直肠癌干细胞 CD133 KLF4

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国家自然科学基金(81071989)

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