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柯萨奇B组病毒VP1胞质表达系统的建立: 2005年; 目的　利用T7RNA聚合酶介导的胞质表达系统增加目的抗原的表达量 ,提高基因疫苗的免疫效果。方法　 (1)构建带有T7启动子、脑心肌炎病毒 (EMCV) 5′非编码区和柯萨奇B组病毒衣壳蛋白VP1的质粒pT7EMCVP1。将该质粒和编码T7RNA酶的pAR 3132共转染HeLa细胞和小鼠腹腔巨噬细胞 ;(2 )将上述质粒分别转化减毒鼠伤寒沙门菌SL72 0 7,让带有不同质粒的两种载体细菌共感染小鼠腹腔巨噬细胞。结果　 (1)经共转染 ,在HeLa细胞和小鼠腹腔巨噬细胞中 ,目的抗原VP1在胞质中的表达比单独转染真核表达质粒pcDNA3VP1增加 2～ 4倍 ;(2 )两种质粒载体细菌感染小鼠巨噬细胞后 ,目的抗原VP1也能在细胞中较好表达。结论　pT7EMCVP1和pAR 3132能在HeLa细胞和小鼠腹腔巨噬细胞胞质中表达。; 陈洪刘晶星陈淑云何平胡宝瑜李振红; 关键词：VP1 小鼠腹腔巨噬细胞柯萨奇B组病毒 HELA细胞共转染胞质

以减毒沙门菌作为DNA疫苗载体的研究被引量：2: 2004年; 目的　以真核表达质粒pCMVβ为报告基因 ,研究用芳香族氨基酸合成缺陷的沙门菌SL72 0 7为载体以提高DNA疫苗免疫应答的可行性。方法　携带质粒pCMVβ的SL72 0 7体外感染小鼠腹腔巨噬细胞后 ,用X gal染色方法和RT PCR方法检测巨噬细胞内 β gal的表达。小鼠口服免疫SL72 0 7(pCMVβ)后 ,用RT PCR方法检测 β gal基因在淋巴组织中的转录产物 ;用ELISA方法检测体液免疫 ;用3H TdR掺入法检测脾淋巴细胞增殖 ;用JAM试验检测杀伤性T淋巴细胞反应。结果　SL72 0 7能有效地将质粒DNA传递到体外培养的巨噬细胞中并进行表达 ;小鼠口服携带有pCMVβ的SL72 0 7后 ,能在脾脏、派伊尔结、肠系膜淋巴结中检测到目的基因的转录 ,并可诱导小鼠产生特异性体液免疫和细胞免疫。与肌内注射pCMVβ相比较 ,口服SL72 0 7(pCMVβ)能更有效地诱导出细胞免疫应答。结论　减毒沙门菌SL72 0 7作为DNA疫苗的载体 ,可经口服途径进行免疫 ,并可将质粒直接传递给抗原递呈细胞 ,诱导出以细胞免疫为主的免疫应答。; 何平陈洪刘晶星陈淑云胡宝瑜; 关键词：CMV 沙门菌减毒 RT-PCR方法 ELISA方法

口服基因疫苗质粒稳定性测定被引量：4: 2003年; 在研究口服基因疫苗的过程中 ,为确保口服疫苗剂量 ,对转化细菌中质粒稳定性的动态变化 ,细菌浓度OD60 0 值与有效细菌 (携带质粒的细菌 )的关系等进行了测定 ,结果显示PAR3132在培养 10h前 ,pcDNA3 VP1在培养 6h前质粒在细菌中的稳定性可维持在 95 %以上 ,但当培养时间超过 16h ,2种质粒的稳定性在Amp为 5 0g/L时均不足 2 0 %。高浓度Amp可提高质粒稳定性。在质粒稳定性维持于 95 %的时段内 ,细菌浓度的OD60 0 值与有效细菌的量呈线性关系。因此 ,在确定口服基因疫苗剂量时 ,应根据细菌各自的情况决定振摇的时间和采用的OD值。; 陈洪刘晶星何平陈淑云; 关键词：质粒稳定性免疫方法

口服基因疫苗预防柯萨奇B组病毒性心肌炎的实验研究被引量：1: 2000年; 为研制防治病毒性心肌炎的口服基因疫苗 ,本文以减毒鼠伤寒杆菌SL72 0 7作载体 ,将表达CVB3VP1基因的pcDNA3 VP1重组质粒转化入该细菌中 ,制备成口服基因疫苗。经口服免疫小鼠后 ,检测其免疫效果 ,并用CVB3攻击小鼠 ,观察其免疫保护作用 ,结果表明小鼠经 1次口服免疫后 ,血液中即产生了高滴度的抗体 ;病毒攻击后 ,免疫小鼠产生了明显的保护作用。; 朱莉刘晶星陈洪陈淑云陆德源; 关键词：柯萨奇B组病毒病毒性心肌炎

CAR的表达调节对肝癌基因治疗中腺病毒载体感染效率的影响被引量：3: 2008年; 目的:通过抑制Raf-MEK-ERK信号转导途径调节肝癌细胞表面柯萨奇病毒和腺病毒受体(coxsackie-adenovirus receptor,CAR)的表达,探索肝癌基因治疗中CAR表达与腺病毒(adenovirus,Ad)感染效率之间的关系。方法:选择两株人肝癌细胞株SMMC-7721及HepG2,以Raf-MEK-ERK信号转导抑制剂U0126作用后,应用Western blotting检测细胞表面CAR蛋白的表达水平。选用能表达GFP的非复制型E_1A缺陷的Ad感染人肝癌细胞SMMC-7721及HepG_2,应用FACS分析U0126处理前后Ad感染效率的变化。结果:细胞经MEK抑制剂U0126处理后,细胞膜表面CAR的表达呈明显上调趋势。FACS检测显示,经U0126处理后,在相同感染复数(10 MOI)Ad-GFP的感染下,GFP^+细胞率明显升高,SMMC-7721细胞由(71.65±6.21)%上升至(86.54±5.70)%;HepG_2细胞由(77.53±4.62)%上升至(87.06±2.83)%(均P<0.05)。结论:抑制剂U0126抑制Raf-MEK-ERK信号转导途径后,可上调肝癌细胞膜表面CAR的表达,从而导致Ad在肝癌细胞感染效率的提高。; 吴赟郑辉陈宏新黄孝天沈佐君刘晶星; 关键词：U0126 腺病毒基因治疗

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国家自然科学基金(39970691)