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氨基酸对猪卵母细胞成熟及重构胚发育的影响被引量：1: 2014年; 本研究旨在对比必需氨基酸和非必需氨基酸对猪卵母细胞体外成熟及重构胚发育的影响。在卵母细胞成熟培养液或重构胚培养液中分别添加1%的必需氨基酸或1%非必需氨基酸或同时添加2种氨基酸,无氨基酸组作为对照,分别统计卵母细胞成熟率和囊胚率。结果表明,在成熟培养液中添加非必需氨基酸组的卵母细胞成熟率为83.0%,显著高于其他各组(P<0.05);而在重构胚培养过程中,与对照组相比,非必需氨基酸组的囊胚率最高为20.3%(P<0.05),另外2组的囊胚率下降(P<0.05)。在卵母细胞成熟过程中添加2类氨基酸均能提高成熟率,但只有非必需氨基酸能够促进重构胚的发育。; 马红付博李忠秋王文涛刘娣; 关键词：必需氨基酸非必需氨基酸卵母细胞体外成熟重构胚

东北野猪成纤维细胞HSP70基因表达对寒冷应激的响应被引量：2: 2013年; 以东北野猪成纤维细胞为研究对象，利用实时荧光定量PCR技术，分析4、15、25和32℃不同温度冷应激条件下细胞内HSPT0mRNA表达变化规律。结果显示在冷应激的低温处理过程中，HSP70mRNA转录量在各温度均为见显著增加；在冷应激的复温培养过程中，HSP70mRNA转录量在4℃和15℃处理后4h后，复温培养的4～8h显著增加（P〈O．05）；在25℃和32℃处理后4h后，复温培养未能诱导细胞内HSP70mRNA转录量显著增加（P〉0．05）；细胞在4℃和15℃处理2、4、6和8h后，复温培养4h，HSP70mRNA转录量随处理温度的减低和时间的延长而增加，处理4～8h组显著高于对照组（P〈0．05），在25℃和32℃处理2、4、6和8h后，复温培养未能显著诱导HSP70mRNA的转录（P〉0．05）。结果表明，冷应激诱导东北野猪成纤维细胞内HSP70mRNA转录量的增加，不是发生在低温处理的应激阶段，而是发生在复温后的细胞应激阶段，温和冷应激（25～32℃）未能诱导复温后HSP70mRNA转录量的显著增加，强度冷应激（4～15℃）诱导复温后HSP70mRNA转录量的显著增加，且与冷应激的强度和时间成正比。; 李忠秋刘春龙马红汪亮付博孙金艳马建章刘娣; 关键词：HSP70 荧光定量PCR 冷应激成纤维细胞

影响猪卵母细胞体外受精效率因素的研究被引量：2: 2013年; 通过比较参与受精的卵母细胞颗粒细胞存在与否、精子上浮时间、精卵共孵育时间、不同受精液等4个方面的因素,研究这些因素对猪卵母细胞体外受精后胚胎发育能力的影响,以求找到最佳的猪卵母细胞体外受精体系。将选择带有不同颗粒细胞的卵丘卵母细胞复合体分为3组：含全部颗粒细胞、2~3层颗粒细胞和裸卵;调整精子在受精液里的上浮时间为0、30、60、120min研究其受精能力;比较3、6、20h精卵共孵育时间对体外受精的影响;结果表明：在本试验体系下,在mTBM受精液中,将精子上浮处理60min,与含2~3层颗粒细胞的卵丘-卵母细胞复合体共孵育6h的IVF体系最为有效,其卵裂率为（77.6±2.3）%,囊胚率为（25.7±2.6）%。; 马红王文涛付博仁亮刘娣; 关键词：卵母细胞体外成熟体外受精

激素对猪卵母细胞体外成熟及孤雌胚胎发育的影响被引量：4: 2013年; 为研究不同激素及其组合在猪卵母细胞体外成熟及对其后孤雌胚胎发育的影响,我们对比了孕马血清促性腺激素(PMSG)与人绒毛膜促性腺激素(hCG)组合、卵泡刺激素(FSH)与促黄体素(LH)组合、雌二醇(E2)及这些卵母细胞经孤雌激活后囊胚率的影响;以及不同FSH和LH浓度组合对猪卵母细胞体外成熟率。结果表明,在卵母细胞体外成熟液中添加10 U/mL PMSG和10 U/mL hCG的成熟率和孤雌囊胚率都达到最高(85.9%和55.3%);FSH与LH的组合次之,分别为77.1%和53.5%;E2最差,成熟率仅为54.0%囊胚率为19.5%。而在FSH与LH不同浓度配比中以10 U/mL FSH和20 U/mL LH时,猪卵母细胞成熟率最高达到80.9%。; 马红付博仁亮李忠秋刘娣; 关键词：卵母细胞激素体外成熟孤雌发育

曲古抑菌素A和5-氮杂-2'-脱氧胞苷对猪孤雌胚胎发育的影响: 2013年; 为了研究曲古抑菌素A(TSA)和5-氮杂-2'-脱氧胞苷(5-Aza-CdR)对猪孤雌胚胎发育及胚胎质量的影响,试验采用猪卵母细胞孤雌激活的方法,孤雌激活后在胚胎培养液中分别添加不同浓度TSA和5-Aza-CdR,比较其对猪孤雌胚胎发育的影响。结果表明:40 nmol/L TSA处理24 h能显著提高孤雌胚胎的囊胚率及囊胚细胞个数(P<0.05),卵裂率无明显变化(P>0.05);30 nmol/L5-Aza-CdR处理48 h能显著提高孤雌胚胎的囊胚率(P<0.05),卵裂率与囊胚细胞个数均无明显变化(P>0.05)。说明在一定浓度条件下,TSA和5-Aza-CdR对猪孤雌胚胎发育的囊胚率有显著促进作用,5-Aza-CdR处理对卵裂率、囊胚细胞个数的影响不大,但TSA处理可以明显提高囊胚细胞个数,从而提高胚胎质量。; 康雅雅马红任亮赵诚悦齐贵龙柳樱子刘娣; 关键词：孤雌胚胎

东北野猪耳皮成纤维细胞系的建立及生物学特征被引量：2: 2013年; 研究了东北野猪耳皮组织成纤维细胞的分离、培养、纯化方法和生长特性,并对培养细胞进行了污染检测及冷冻保存和复苏培养观察。结果显示:原代培养在接种5d组织块边缘开始游离出单个细胞,到10d细胞生长旺盛;用酶消化法和差速贴壁法得到纯化的东北野猪成纤维细胞;冷冻前和复苏后的细胞活率分别为96.7%和92.7%,差异不显著(P>0.05);分离纯化的东北野猪成纤维细胞生长曲线正常;支原体和病毒检测呈阴性;成功建立东北野猪成纤维细胞系。; 李忠秋刘春龙马红付博马建章刘娣; 关键词：成纤维细胞生物学特征

脂质体法介导EGFP基因在细胞中的表达分析: 2013年; 为了研究增强型绿色荧光蛋白(enhanced green fluorescent protein,EGFP)在上皮细胞中的表达情况,试验采用脂质体法介导真核表达质粒EGFP-C1转染PK15细胞和JEG-3细胞,分别在转染的24小时和48小时观察荧光的表达情况。结果表明:在荧光显微镜下,EGFP蛋白在PK15细胞和JEG-3细胞中均得到表达,相同条件下PK15细胞的转染效率高于JEG-3细胞,且在JEG-3细胞中EGFP均一表达,而在部分PK15细胞中EGFP表达主要聚集于细胞核区域,细胞状态对亚细胞定位存在重要的影响。; 张旭马红孙亚蒙汪亮付博李忠秋刘娣; 关键词：绿色荧光蛋白脂质体 PK15细胞 JEG-3细胞

冷应激对东北野猪成纤维细胞HSP90 mRNA转录水平的影响被引量：3: 2012年; 为了揭示热休克蛋白90基因(Heat shock protein 90,HSP90)在细胞冷应激反应过程中的时空表达特性。以东北野猪成纤维细胞为研究对象,采用实时荧光定量PCR技术分析了4、15、25和32℃不同强度冷应激条件下细胞内HSP90mRNA转录变化规律。结果表明,在低温处理过程中,HSP90mRNA转录量在各温度均未见显著增加(P>0.05);在冷应激的复温培养过程中,HSP90mRNA转录量在4和15℃处理4h后复温培养8h内显著增加(P<0.05),峰值出现在6h,在25和32℃处理4h后复温培养8h内均未见显著增加;细胞在4和15℃处理2、4、6和8h后,复温培养4h,HSP90mRNA转录量随处理温度的降低和时间的延长而增加,在25和32℃处理2、4、6和8h后,复温培养未能显著诱导HSP90mRNA的转录。结果提示,冷应激诱导东北野猪成纤维细胞内HSP90mRNA转录量的增加,不是发生在低温处理的应激阶段,而是发生在复温后的细胞应激阶段,温和冷应激(25～32℃)未能诱导复温后HSP90mRNA转录量的显著增加,强度冷应激(4～15℃)诱导复温后HSP90mR-NA转录量的显著增加,且与冷应激的强度和时间成正比。; 李忠秋刘春龙马红付博汪亮彭福刚马建章刘娣; 关键词：成纤维细胞冷应激 HSP90 荧光定量PCR

小鼠黏着斑相关蛋白在不同组织中的表达分析被引量：2: 2013年; 黏着斑相关蛋白(focal adhesion associated protein,FAAP)是近几年新发现的一种分布广泛的蛋白,该蛋白由小鼠D10Wsu52e基因编码。为探索D10Wsu52e基因在小鼠各组织中的表达情况,进一步预测该蛋白的功能,提取小鼠心脏、肾脏、脾脏、肺、背肌、腿肌、小肠、睾丸、附睾及卵巢、子宫的总RNA,利用实时荧光定量PCR技术,检测D10Wsu52e基因在各组织中的相对表达量,寻找组织表达规律及其潜在的功能。结果显示:所提取的小鼠11种组织中均有D10Wsu52e基因的表达,其相对表达量在各组织之间差异显著(P<0.05);D10Wsu52e基因在小鼠11种组织中的表达量由高到低依次为背肌、子宫、卵巢、腿肌、附睾、睾丸、肾脏、脾脏、心脏、肺、小肠,其中D10Wsu52e基因在心脏、肺、小肠中的相对表达量显著低于背肌和子宫(P<0.05)。结果表明:D10Wsu52e基因可能对调控啮齿动物多种组织器官,特别是生殖器官及骨骼肌发育具有一定的作用。; 张旭马红刘娣孙亚蒙汪亮; 关键词：小鼠组织表达谱

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国家自然科学基金(31101700)

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