国家自然科学基金(31101704)
- 作品数：8 被引量：4H指数：1
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- 相关机构：江西农业大学扬州大学江苏农牧科技职业学院更多>>
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- 鸭CD8α基因启动子的分析及其转录活性被引量：1
- 2012年
- 【目的】对鸭CD8α基因启动子活性区域进行分析,为鸭CD8α基因功能和表达调控机理研究提供依据。【方法】利用前期基因组步移技术获得的鸭CD8α基因的启动子区序列,制备一系列启动子缺失突变体(-625/-1 bp,-1 110/-1 bp,-1 413/-1 bp,-2 151/-1 bp),定向亚克隆至荧光素酶表达载体pGL3-Basic中,构建荧光素酶报告基因重组载体,采用Lipofectamine 2000将重组质粒瞬时转染DT40细胞,分析CD8α基因启动子系列缺失突变体在细胞内的转录活性。【结果】鸭CD8α基因5′侧翼区长片段具有较强的启动子活性,-1110—-625启动子活性最强,且-625—-1和-625—-1 110 bp区域均存在正调控元件。【结论】成功构建了荧光素酶报告基因真核表达载体,确定了鸭CD8α基因调控区,为进一步研究其转录调控机制奠定了基础。
- 徐琪陈阳黄正洋张扬陈昌义赵荣雪李秀段修军陈国宏
- 关键词：启动子转录活性
- Ⅰ型雏鸭肝炎病毒侵染后鸭组织中ALB基因表达的分析被引量：1
- 2012年
- 检测Ⅰ型雏鸭肝炎病毒侵染后ALB基因mRNA以及ALB蛋白分别在肝脏、脾脏、肺脏、肾脏、大脑、小脑、腿肌和胸腺等组织中的相对表达量和含量并分析其意义。分别利用实时荧光定量RT-PCR技术和ELISA法检测ALB基因在易感组、抗病组和对照组各组织中mRNA的表达量以及ALB蛋白含量。总体而言,除腿肌外,ALB基因mRNA在易感组中的表达量极显著低于对照组和抗病组(P<0.01),抗病组显著或极显著低于对照组(P<0.01或P<0.05);各处理组间,肝、小脑和胸腺中ALB蛋白含量与ALB基因mRNA相对表达量规律一致,在其他组织中,各处理组间ALB蛋白含量差异均不显著(P>0.05)。RT-PCR与ELISA的结果比较可见,两者在肝脏、胸腺、小脑等与雏鸭肝炎病直接相关的指示性组织中表现一致。本试验研究结果,进一步揭示了ALB基因为Ⅰ型雏鸭肝炎病的抗性基因,与前期抑制性消减杂交法得到的结果一致,其表达量的变化可以作为区分易感鸭和抗病鸭的标志。
- 李秀毕瑜林徐琪赵文明张扬陈昌义陈阳黄正洋甄霆段修军陈国宏
- 关键词：实时荧光定量RT-PCRELISA
- 鸭基因组整体DNA甲基化差异与部分免疫性状的关系
- 2013年
- DNA甲基化是真核细胞基因组主要表观遗传修饰方式之一,是调节基因组功能的重要手段。本试验以金定鸭、樱桃谷北京鸭、番鸭、半番鸭(番鸭♂×金定鸭♀、番鸭♂×樱桃谷北京鸭♀)为试验材料,应用MethylFlash整体甲基化定量试剂盒检测其甲基化程度,采用全自动生化分析仪测定总蛋白、球蛋白、IgA、IgM和IgG等部分免疫性状,并分析了两者的关系。结果表明,两个远缘杂交种(番鸭♂×金定鸭♀、番鸭♂×樱桃谷北京鸭♀)的DNA整体甲基化程度显著高于或极显著高于亲本(金定鸭、樱桃谷北京鸭、番鸭),而3个亲本间以及两个远缘杂交种间差异不显著(P>0.05)。所有免疫指标性状值大致表现为家鸭高于番鸭,番鸭高于半番鸭。鸭基因组整体DNA甲基化水平与免疫性状间呈负相关,其中与总蛋白、球蛋白和IgM相关达显著或极显著水平。试验结果揭示了半番鸭及其亲本基因组整体DNA甲基化对部分免疫性状的影响。
- 徐琪陈阳黄正洋张扬李欣玉甑霆李秀段修军陈国宏
- 关键词：DNA甲基化免疫性状
- 雏鸭肝炎病毒感染后鸭CD8α基因及其通路相关基因表达变化
- 2013年
- 本研究旨在了解雏鸭肝炎病毒感染后鸭CD8α基因及其通路相关基因表达变化。通过对3日龄无母源抗体的金定鸭雏鸭感染雏鸭肝炎病毒(DHV),构建雏鸭肝炎感染实验动物模型,对雏鸭肝炎病毒发病组、未发病组和对照组的胸腺、肝脏、脾脏、肺、肾脏、大脑、小脑等组织CD8α基因及其信号通路上MHCⅠ、MHCⅡ、TNF-α等基因进行RT-qPCR检测。结果表明:在攻毒组(发病组和未发病组)扩增出DHV 3D基因的保守区域特异性条带,表明成功构建了雏鸭肝炎感染模型CD8α基因,RT-qPCR结果显示,CD8α、MHCⅠ和MHCⅡ基因在发病组各组织表现为不同程度的下调,在未发病组表现为不同程度的上调;而TNFα在发病组和非发病组的肝、脾、肺和肾等组织中表现为不同程度的上调。研究揭示了雏鸭肝炎病毒感染后CD8α基因及其通路相关基因表达变化,其结果有助于更好地了解duCD8α基因在细胞免疫中表达调控作用。
- 徐琪陈阳黄正洋童一宇荣光辉赵文明张扬李秀段修军陈国宏
- 关键词：雏鸭肝炎病毒基因表达
- 鸭血清白蛋白基因克隆及其在病毒感染过程中的表达变化
- 2013年
- 【目的】克隆鸭血清白蛋白(duck serum albumin,DSA)基因,并对其进行生物信息学分析和mRNA表达规律研究。【方法】以前期抑制性消减杂交技术筛选的白蛋白(albumin,ALB)基因为候选基因,通过构建雏鸭肝炎病毒和聚肌苷酸胞苷酸(polyinosinic polycytidylic acid,Poly(I:C))感染模型,利用RT-PCR、RACE技术和基因组步移技术分别克隆ALB基因cDNA序列和5′侧翼序列,并对其进行生物信息学分析;同时利用RT-qPCR检测ALB基因各组织时空表达量。【结果】①ALB cDNA全序列长为2 107 bp,包括47 bp的5′UTR、212 bp的3′UTR和1 848 bp的开放阅读框(open reading frame,ORF);其5′侧翼序列具有典型的TAAT box、CAAT box以及HSF、HNF、C/EBP等多个肝脏富含的潜在转录因子结合位点;②RT-qPCR显示,ALB mRNA呈肝脏组织特异性表达,且在雏鸭肝炎病毒和Poly(I:C)等抗原刺激后,肝脏组织ALB mRNA表达量总体表现水平为先上升后下降,24 h后保持在稳定水平。【结论】成功克隆了鸭ALB基因cDNA和5′侧翼序列,该基因在不同禽类(鸡、鸭、火鸡)中表现为相当保守,主要在肝脏组织中表达,且在雏鸭肝炎病毒和Poly(I:C)感染下,ALB mRNA表现水平为先上升后下降。
- 徐琪陈阳李秀黄正洋张扬李欣钰童一宇段修军陈国宏
- 关键词：克隆基因表达
- 鸭CD8α基因克隆及不同禽类分子进化分析
- 2012年
- 采用RT-PCR和LD-PCR技术克隆了5个鸭种(金定鸭、樱桃谷北京鸭、番鸭、绿头鸭和斑嘴鸭)CD8α基因编码区序列,结合GenBank中已有禽类(红色原鸡、北京油鸡、斑胸草雀和火鸡)的CD8α序列,采用Jmodeltest最适核苷酸替代模型筛查,使用DAMBE V4.5.2对核苷酸替换(转换/颠换)的饱和性进行检测;并采用最大似然法检测各位点承受的选择压力。测序结果表明,不同鸭种间仅发现少数点突变,其编码区序列相当保守;AIC信息量准则检验结果发现9种禽类CD8α基因的最优核苷酸替代模型为"GTR+G",核苷酸替换的饱和性检测结果表明序列的核苷酸替换并未饱和;应用MEGA 5.0构建了禽类CD8α基因的系统发育关系树,不同禽类CD8α基因大致划分为3类;"位点-特异"模型检测到7个受到正选择作用的位点,其中4个位于功能重要的区域。本研究成功地克隆了鸭CD8α基因编码区序列,并发现不同禽类CD8α基因在分子进化中是保守的,研究结果为进一步了解禽类CD8α基因进化历程、结构与功能变异提供理论依据。
- 徐琪黄正洋孙志明陈阳赵文明张扬李秀段修军陈国宏
- 关键词：CD8Α克隆进化
- 鸭CD8α基因启动子区的克隆及荧光素酶报告基因重组体的构建被引量：1
- 2012年
- 旨在了解分化群α基因可能的调控序列及其转录调控机制。本研究利用基因组步移技术扩增鸭CD8α基因的启动子区序列,使用在线软件进行序列分析;分别将鸭肝炎易感组和抗性组的CD8α基因启动子区定向亚克隆至荧光素酶表达载体pGL3-Basic中,利用酶切与测序技术进行鉴定;并瞬时转染细胞,采用荧光素酶报告基因系统检测启动子载体的活性。结果,扩增出一条长度为2 480bp的片段(包含第一外显子56bp,启动子区2 424bp)。经序列分析,鸭CD8α基因启动子区具有典型的TATA-box、GC-box和CAAT-box,其转录起始位点位于翻译起始密码子ATG上游-406bp处,且发现了CdxA、Nkx-2、GATA-1、SRY等41个潜在转录因子结合位点。经酶切与测序鉴定,成功构建了鸭CD8α基因荧光素酶报告基因重组体。荧光素酶报告基因检测系统显示,构建的鸭肝炎易感组和抗性组的报告基因启动子载体具有相当的活性。研究结果为进一步探讨CD8α基因的转录调控奠定了基础。
- 徐琪陈阳黄正洋赵文明张扬李欣钰赵荣雪李秀段修军陈国宏
- 关键词：启动子荧光素酶报告基因
- ALB、TLR7、PSPH和WSB1基因在雏鸭肝炎病毒易感与抗性群体间的差异表达分析被引量：1
- 2013年
- 采用实时荧光定量RT-PCR技术检测雏鸭肝炎病毒侵染后对照组、易感组与抗性组ALB、TLR7、PSPH和WSB1mRNA分别在肝、脾、肺、肾、大脑、小脑、腿肌和胸腺等组织中的相对表达量并分析其意义。结果表明,除腿肌外,ALB和TLR7基因在易感组中的表达量极显著低于对照组和抗性组(P<0.01),抗性组的表达量显著或极显著低于对照组的表达量(P<0.01或P<0.05);PSPH和WSB1基因在易感组中的表达量极显著高于对照组(P<0.01),而抗性组与对照组差异不显著(P>0.05)。研究结果揭示了鸭ALB和TLR7基因为雏鸭肝炎病毒的抗性基因,其表达量的变化可以作为区分易感鸭和抗病鸭的标志。
- 李秀毕瑜林徐琪赵文明张扬陈昌义陈阳黄正洋甄霆段修军陈国宏
- 关键词：雏鸭肝炎病毒
