国家重点基础研究发展计划(2006CB0F0306)
- 作品数：3 被引量：0H指数：0
- 相关作者：张健刘如石胡翔肖鲜朱姣莲更多>>
- 相关机构：湖南师范大学教育部湖南农业大学更多>>
- 发文基金：湖南省教育厅科研基金国家重点基础研究发展计划高等学校科技创新工程重大项目更多>>
- 相关领域：生物学自动化与计算机技术更多>>
- 小鼠Shh蛋白N端基因的克隆与原核表达
- 2008年
- 从小鼠(C57BL/6)10.5 d胚胎中提取总RNA经RT-PCR扩增出编码小鼠Shh基因N端cDNA序列,克隆到大肠杆菌表达载体pQEN3构建重组表达质粒pQEN3-Shh-N.重组质粒转化大肠杆菌BL21,经1.0mmol/L IPTG诱导,在SDS-PAGE上检测到20kDa目的蛋白带,与Shh N端蛋白预期大小一致,其蛋白表达量达到了全菌总蛋白的约30%.重组蛋白经Western blot鉴定结果显示,在20kDa处出现单一的显色条带,说明表达的重组蛋白为ShhN端蛋白,为研究Shh蛋白N端与毛发生长的功能奠定了基础.
- 刘如石任道龙徐甜韩梅胡翔肖鲜张健
- 关键词：SHH基因克隆原核表达
- 运用染色质免疫沉淀技术筛选AP-2α的靶基因
- 2008年
- 在后基因组时代,DNA-蛋白质的相互作用是研究基因表达调控的一个重要领域.染色质免疫沉淀技术(chromatin immunoprecipitation assay,简称ChIP)是目前唯一研究体内DNA与蛋白质相互作用的方法.对与ChIP有关的实验条件进行了优化,获得了较优的实验条件,并运用ChIP实验筛选出了转录因子activatorprotein-2alpha(AP-2α)的未知靶基因,对于进一步研究AP-2α的功能和调控网络打下了基础.
- 贺爱兰肖湘文孙一兵刘如石胡翔周建林张健
- 关键词：靶基因AP-2Α
- 转录因子AP-2α与ACTN1、TES的相互作用
- 2008年
- AP-2α是转录因子AP-2家族中的重要一员,与发育和细胞生长、分化和凋亡都有密切的联系.本文用酵母双杂交的方法筛选得到两个与转录因子AP-2α相互作用的蛋白,经测序鉴定分别为ACTN1与TES基因.在先前对AP-2α与TES基因分别克隆并在表达的基础上,进一步克隆并表达了ACTN1基因,并证实了ACTN1蛋白与AP-2α能够在体外相互作用.而且免疫共沉淀的结果表明在HeLa细胞系中过表达的AP-2α与TES蛋白能够处于同一复合体中.同时发现HeLa细胞系中,内源表达的ACTN1蛋白与GFP-TES有明显的共定位.结果提示这3种蛋白可能存在于同一个大的复合体中,通过这样的结合完成复杂的调节功能.
- 钟英丽朱姣莲胡翔刘如石张健
- 关键词：酵母双杂交AP-2Α免疫共沉淀
