湖北省科技攻关计划(2006AA301C07)
- 作品数：6 被引量：20H指数：4
- 相关作者：刘松梅周新熊燏杨艳郑芳更多>>
- 相关机构：武汉大学黄石理工学院黄石市中心医院更多>>
- 发文基金：湖北省科技攻关计划国家自然科学基金湖北省自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 糖尿病线粒体DNA常见易感基因位点检测芯片的研制被引量：3
- 2006年
- 目的建立一种快速、准确的检测糖尿病线粒体DNA常见易感基因位点的芯片技术。方法将氨基修饰的16个常见易感基因位点（1888，3200，3206，3243，3290，3316，3394，3593，3426，12026，12258，14577,14693，14709，16189，16223）的野生型和突变型探针，通过Packard芯片点样仪点样于醛基修饰的基片上，室温保湿过夜固定。采用该基因芯片对52份已知和52份未知突变位点的2型糖尿病标本进行检测，每份样本平行测3次，Axon GenePix4000B芯片扫描仪阅读芯片，GenePix Pro4．0版芯片图像分析软件分析结果。结果芯片样点分布均匀、清晰、规整度好、无漏点和连点；片内平行点之间的荧光强度变异系数为0．62％～9．64％，芯片间相同位点之间为1．00％～13．46％；背景信号低（突变型探针和野生型探针的背景荧光强度分别为43．25±2．10，44．56±2．63）；减去背景信号的阳性探针荧光强度明显高于阴性探针（t=8．6，P=0．000），易于判断结果；初步设定筛选和诊断实验的突变型cut—off值；按此标准判断实验结果，筛选实验的假阳性率为11．11％，假阴性率为0．53％；诊断试验的假阳性率为2．22％，假阴性率为6．41％；除16189位点外，验证其他已知突变位点，并在未知突变样本中检出了A12026G突变和C16223T多态性，结果与测序结果一致。结论该芯片可用于糖尿病线粒体DNA15个常见易感基因位点的快速筛查和检验诊断。
- 刘松梅周新涂建成郑芳杨艳汤冬玲蔡春林熊燏
- 关键词：寡核苷酸序列分析糖尿病荧光强度基因位点
- 载脂蛋白E基因型与冠心病和2型糖尿病的易感性研究被引量：4
- 2008年
- 目的探讨载脂蛋白E基因型与冠心病（CHD）和2型糖尿病（T2DM）的易感性。方法应用PCR-限制性片段长度多态性（PCR—RFLP）法、多重特异性扩增突变系统（multi—ARMS）快速分型法和PCR-单链构象多态性（PCR—SSCP）法，对238例CHD、316例T2DM、1892名健康对照的apoE基因第4外显子112位Cys／Arg和158位Arg／Cys进行检测；随机抽取前2种方法分型标本进行DNA测序法验证。并对所有异常带型标本进行DNA测序，确认是否存在基因变异；同时测定空腹血糖和血浆脂质水平。结果CHD组血浆HDL—C（t=2．66）和apoAⅠ（t=2．30）水平显著低于健康对照组（P〈0．05），收缩压（t=8．48）、舒张压（t=5．66）、TG（t=3．38）、LDL—C（t=2．48）、apoB（t=1．67）、Lp（a）（t=4．16）和FBG（t=7．04）水平均显著高于健康对照组（P〈0．05），TC水平在两组问差异无统计学意义（t=0．94，P〉0．05）；T2DM组收缩压（t=5．74）、舒张压（t=3．35）、血浆TG（t=4．56）、TC（t=5．22）、LDL—C（t=7．00）、apoB（t=2．24）、Lp（a）（t=4．15）和FBG（t=16．93）水平亦均显著高于健康对照组（P〈0．05），HDL—C（t=0．74）和apoAⅠ（t=0．41）水平在两组间差异无统计学意义（P〉0．05）。ε2／2、ε2／3、ε3／3、ε4／2、ε4／3、ε4／4基因型在3组中的频率分布为：0．4％，13．4％，58．0％，1．3％，26．5％，0．4％（CHD组）；0．6％，5．7％，72．8％，1．9％，14．9％，4．1％（T2DM）；0．5％，10．5％，69．6％，1．6％，16．8％，1．1％（健康对照组）。CHD组和T2DM组基因型频率分布与健康对照组差异均有统计学意义（Χ^2=14．90，P=0．00；Χ^2=7．08，P=0．03），CHD组ε3／4基因型频率明显高于健康对照组（26．5％对16．8％），而ε3／3基因型频率显著低于健康对照组（58．0％对69．6％）；T2DM组ε4／4基因型频率明显高于�
- 刘松梅涂建成周新熊燏汪春红杨艳庞志宇
- 关键词：载脂蛋白E类基因型冠状动脉疾病疾病易感性
- 膜芯片检测糖尿病相关线粒体基因突变位点
- 2007年
- 目的构建一种快速、系统检测与糖尿病相关的45个 mtDNA 位点的膜芯片。方法针对 mtDNA 的45个突变位点,采用 Primer Premier 5.0和 NCBI BLAST 软件设计野生型和突变型探针;将带有8T 长臂的90条探针,通过紫外交联固定于经5×SSC Buffer 处理的尼龙膜;不对称 PCR 方法制备单链靶序列,纯化后经 Biotin 标记,AP-avidin 作用于 NBT/BCIP 显色,目视化观察结果。采用该膜芯片检测24份已知 mtDNA 序列的糖尿病标本,每份标本平行检测3次,评价检测结果。结果 9对引物可在同一条件下特异性扩增45个基因位点的目的片段;野生型和突变型探针的退火温度分别为(59.01±1.42)℃、(59.34±1.29)℃,能够在相同的温度下完成杂交反应;膜芯片样点清晰、规整度好,分布均匀,无漏点和连点,阳性对照和阴性对照结果理想,阴性对照的信号强度与背景持同;除16189位点外,检测结果与 DNA 测序方法有很好的一致性(x^2=113.132,Kappa 值=0.888,P=0.000)。结论成功构建可一次性检测目前国内外报道与糖尿病相关的44个 mtDNA 突变位点的膜芯片,适用于糖尿病患者和高危人群的检测。
- 刘松梅周新秦汉刘兵涂建成郑芳李霞
- 关键词：基因芯片糖尿病DNA探针
- 线粒体基因突变与糖尿病被引量：5
- 2007年
- 线粒体基凶缺陷型糖尿病按照新的糖尿病分型标准应属于β细胞功能遗传缺陷的特殊类型糖尿病。现对线粒体的分子遗传学特点、与糖尿病相关的线粒体基因突变位点以及线粒体基因缺陷型糖尿病发病的分子机制进行综述。
- 刘松梅刘兵周新
- 关键词：突变糖尿病
- 基因芯片筛查糖尿病线粒体基因突变被引量：7
- 2006年
- 目的建立一种快速、准确的高通量检测线粒体DNA突变的基因芯片技术,并探讨这些突变与糖尿病的关系。方法以尼龙膜为介质,通过紫外交联固定28个待测突变位点的野生型和突变型探针,并采用该基因芯片对200例2型糖尿病患者和210名健康对照的线粒体tRNAleu(UUR)基因及ND1基因进行筛查,DNA测序进一步确证突变位点,Mfold和Antheprot软件预测变异型基因及蛋白质二级结构。结果成功研制可检测28个突变位点的线粒体DNA芯片,在糖尿病组检出tRNAleu(UUR)基因T3290C突变2例(1.0%),ND1基因突变23例G3316A突变6例(3.0%)、T3394C突变5例(2.5%)、A4164G突变8例(4.0%),T4216C突变2例(1.0%),T3593C(0.5%)和A3606G突变各1例(0.5%);对照组检出G3316A突变1例(0.5%)、A4164G突变5例(2.4%)。这些突变位点的测序结果与基因芯片检测结果一致。两组间仅T3394C突变率差异有统计学意义(P=0.027)。G3316A突变导致丙氨酸→苏氨酸,T3394C突变导致酪氨酸→组氨酸,T3593C突变导致缬氨酸→丙氨酸,T4216C突变导致酪氨酸→组氨酸,A3606G和A4164G突变分别为亮氨酸和蛋氨酸的无意义突变,前4种突变型的ND1蛋白二级结构不同于野生型。结论线粒体DNA芯片是一种快速可靠的高通量基因突变检测方法,ND1基因T3394C突变可能参与了线粒体基因缺陷型糖尿病的发病。
- 刘松梅周新郑芳李霞秦汉张红梅李东
- 关键词：糖尿病DNA线粒体突变
- 线粒体基因5个位点与2型糖尿病早发的关联研究被引量：4
- 2008年
- 用PCR-RFLP及DNA测序方法对湖北省汉族人群无血缘关系的102例发病年龄≤45岁2型糖尿病患者及104例正常对照个体的线粒体DNA tRNA Leu(UUR)基因及ND-1基因5个位点进行突变分析。实验组检出3714(A→G)突变2例,两组间仅nt3316(G→A)突变的发生率有统计学差异。推测该位点变异可能与某些核基因或环境因素协同与汉族人群中的线粒体糖尿病的早发及发展有关。
- 熊燏周新钱士匀刘兵杨艳刘松梅
- 关键词：线粒体DNA突变线粒体糖尿病
