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榄香烯对大鼠胶质瘤C6细胞Bcl-2家族基因及蛋白表达的影响被引量：30: 2005年; 目的探讨莪术提取物-榄香烯诱导大鼠胶质瘤C6细胞系凋亡机制及其对Bcl2家族基因及蛋白质表达的影响。方法应用RTPCR、Westernblot方法检测榄香烯在0、20、40、60、80μg/ml浓度及作用时间为12、24、36、48、72h时处理的大鼠胶质瘤C6细胞系,利用流式细胞仪观察细胞的凋亡、细胞增殖的变化和Bcl2家族基因及蛋白质表达的变化。结果经榄香烯20、40、60、80μg/ml处理大鼠胶质瘤C6细胞48h后,单视野细胞计数分别为(536±9)个、(375±10)个、(246±9)个、(112±10)个,与浓度为0μg/ml时单视野细胞计数(625±12)个相比体外增殖抑制效应比差异有统计学意义(F=1292.416,P<0.05)。经不同浓度榄香烯处理后C6细胞凋亡率分别增加到(27±2)%、(29±4)%、(32±3)%、(35±5)%,同时有亚二倍体凋亡峰,即Ap峰出现。榄香烯可明显下调Bcl2/Bclx/l基因及蛋白质表达,且该作用呈浓度、时间依赖性,而对Bax基因及蛋白质无明显影响。结论下调Bcl2/Bclx/l基因及蛋白质表达可能是榄香烯诱导凋亡、抑制C6细胞增殖的主要机制。; 徐英辉董斌罗其中周洪语贾宜昌杨友峰王以政; 关键词：BCL-2家族榄香烯胶质瘤蛋白表达莪术提取物

榄香烯诱导神经胶质瘤细胞凋亡的实验研究被引量：32: 2003年; 背景与目的:榄香烯是从姜科植物莪术中提取的抗肿瘤药物,我们应用榄香烯治疗神经胶质瘤取得了较为显著的疗效,本研究探讨榄香烯的抗胶质瘤细胞增殖和诱导凋亡作用。方法:3H-TdR掺入法检测榄香烯对鼠源性C6胶质瘤细胞及人源性SHG-44胶质瘤细胞的体外增殖抑制效应,Hoechst33258/PI荧光染色法观察细胞形态学改变,流式细胞仪和DNA凝胶电泳检测细胞凋亡。结果:榄香烯能有效抑制C6/SHG-44胶质瘤细胞的恶性增殖,3H-TdR掺入法检测榄香烯处理不同时间(1～4天)的IC50,C6细胞为7.33～11.02mg/L,SHG-44细胞为13.29～27.16mg/L。在相同药物浓度下,C6细胞较SHG-44细胞敏感。经榄香烯作用后,C6/SHG-44胶质瘤细胞核固缩、边集,核浆比例减小并见有凋亡小体形成,DNA直方图观察到特征性亚倍体峰(Ap峰),DNA凝胶电泳出现有明显的梯状条带。结论:榄香烯有显著的抗胶质瘤细胞增殖作用,并能诱导胶质瘤细胞凋亡。; 周洪语沈建康侯菊生邱永明罗其中; 关键词：榄香烯神经胶质瘤细胞凋亡

大肠杆菌脂多糖2630模拟位的研究被引量：2: 2004年; 目的 :利用纯化的抗大肠杆菌L2 6 30多抗筛选噬菌体环七肽库 ,以获得可模拟脂多糖 (LPS)表位的短肽克隆。方法 :以亲和层析纯化的抗大肠杆菌L2 6 30多克隆抗体为靶分子 ,筛选噬菌体随机环七肽库 ,用双夹心ELISA和竞争抑制ELISA鉴定阳性噬菌体克隆的抗原性。结果 :对噬菌体环肽库进行 3轮筛选后 ,随机挑选 2 0个克隆 ,经鉴定其中 12个可与抗L2 6 30抗体结合 ,即为阳性克隆 ;其中有 5个阳性噬菌体克隆表现出与抗鼠伤寒沙门氏菌LPS多抗结合的活性 ,提示这 5个噬菌体展示的短肽具有模拟大肠杆菌LPS及鼠伤寒沙门氏菌LPS共同表位的性质。经DNA序列分析显示 ,其中 8个克隆的氨基酸序列具有X DGLL XX或X EDGLL X保守序列 ,其余 4个克隆的序列均不相同。结论 :筛选获得的噬菌体环七肽克隆具有模拟大肠杆菌LPS表位的活性 ,为大肠杆菌L2 6 30多表位模拟短肽。其中; 罗海波郑山根朱平富宁; 关键词：脂多糖模拟肽噬菌体肽库

模拟鼠伤寒脂多糖表位合成肽的初步研究被引量：3: 2005年; 目的探讨3种模拟LPS表位的合成肽的抗原性。方法固相合成模拟LPS表位的线性十二肽P12(GPPQW-FFSQPQL)、环七肽13a(SACPSWASFWCGG)和13b(SACFQFYPAACGG),与钥孔嘁血蓝蛋白或蓝载体交联,ELISA鉴定合成肽-载体交联物与抗LPS抗体的反应性,竞争ELISA鉴定游离的合成肽对抗LPS抗体与LPS、表达LPS模拟位的阳性噬菌体克隆结合的抑制。结果合成肽-载体交联物可与LPS抗体结合;游离环七肽13a可抑制抗LPS单克隆抗体与LPS结合(IC50=125μg/mL)及抗LPS单克隆抗体与阳性噬菌体克隆K1的结合(IC50=15.6μg/mL);游离十二肽P12抑制抗LPS单克隆抗体与LPS结合(IC50=550μg/mL)及阳性噬菌体克隆P12与抗LPS单克隆抗体结合(IC50=375μg/mL);游离环七肽13b可抑制噬菌体克隆P4和LPS多克隆抗体的结合(IC50=31.25μg/mL)。结论模拟LPS表位的合成肽可模拟LPS表位的抗原性,环肽优于线性肽。; 郑山根文维延刘北一朱平富宁; 关键词：脂多糖模拟肽抗原性

鼠伤寒脂多糖表位模拟位的筛选被引量：2: 2003年; 目的获得模拟脂多糖抗原表位的噬菌体环状展示肽.方法用抗鼠伤寒菌脂多糖单克隆抗体2F4为靶分子,亲和筛选噬菌体随机环七肽库,双夹心ELISA及特异性抗原抑制试验鉴定阳性克隆.结果经三轮筛选,随机挑选38个克隆,其中34个克隆显示与2F4结合.鼠伤寒沙门氏菌脂多糖可抑制噬菌体克隆与2F4结合,所有克隆的半数抑制浓度为(0.125～0.250)μg/ml.挑选10个克隆测序并推导氨基酸序列,其中7个克隆出现P-X-WAS-X-W保守序列;10个序列中非极性氨基酸含量平均值为71.4%.结论噬菌体展示环七肽可模拟鼠伤寒沙门氏菌脂多糖抗原表位.; 郑山根朱平刘北一富宁; 关键词：脂多糖噬菌体内毒素休克鼠伤寒沙门氏菌

交叉保护性抗LPS多克隆抗体的制备与LPS多表位模拟肽的筛选被引量：7: 2003年; 目的　获得具交叉保护性的抗细菌脂多糖 (LPS)多克隆抗体与模拟LPS多表位的噬菌体展示环肽克隆。方法　制备具交叉反应性的兔抗鼠伤寒沙门菌抗血清 ,鉴定抗血清对大肠杆菌和铜绿假单胞菌攻击小鼠的交叉保护性。以亲和纯化的多克隆抗体为靶 ,亲和筛选噬菌体随机环七肽库。双夹心ELISA和竞争抑制ELISA鉴定阳性噬菌体克隆。结果　兔抗血清能与多种来源的LPS反应 ,对用大肠杆菌和铜绿假单胞菌攻击的小鼠有显著的保护性。用亲和层析纯化的多克隆抗体为靶分子进行 3轮筛选 ,随机挑选 4 6个克隆 ,其中 2 0个克隆显示与多抗结合。鼠伤寒沙门菌LPS可抑制阳性噬菌体克隆与多抗结合 ,所有克隆的IC50 (达到 5 0 %抑制率的LPS浓度 )为 12 5ng ml。挑选其中10个克隆测序并推导氨基酸序列 ,其中 5个克隆具X QFYP X A保守序列 ;3个克隆具LFTFAHY序列 ;2个克隆具YQYYPAA序列 ,所有序列非极性氨基酸含量平均值为 80 .0 %。结论　获得能与多种LPS反应且具交叉保护作用的兔多克隆抗体 ,筛选得到可模拟鼠伤寒沙门菌LPS多表位噬菌体展示环七肽。; 郑山根刘北一朱平富宁

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国家自然科学基金(30070769)