云南省自然科学基金(2004C0025Q)
- 作品数：9 被引量：28H指数：4
- 相关作者：丁玉梅孙茂林杨正安张绍松周晓罡更多>>
- 相关机构：云南农业大学云南省农业科学院云南省农业生物技术重点实验室更多>>
- 发文基金：云南省自然科学基金国家自然科学基金云南省科技攻关计划更多>>
- 相关领域：农业科学生物学更多>>
- 一种利用植物病毒载体表达外源蛋白的新平台——Magnifection被引量：1
- 2007年
- 本文介绍国内外在利用植物病毒表达载体生产药物蛋白的研究现状,并对这一领域取得的最新突破进行重点阐述,包括Magnifection的原理、技术流程及利用其生产重组药用蛋白的优势、存在的问题等。最后,结合相关经验介绍利用植物病毒表达载体生产药物蛋白的应用前景及对该技术改进的建议。
- 杨正安丁玉梅张应华刘飞虎
- 关键词：植物病毒载体
- 马铃薯质体表达载体构建及遗传转化初报
- ＜正＞随着植物基因工程研究的深入,人们发现胞内细胞器也可进行外源基因转化。质体转化与核转化相比有以下优势:外源基因表达效率高,表达稳定,不存在因基因失活和随机插入而造成的位置效应;外源基因不会随花粉扩散而转移到近缘物种中...
- 丁玉梅吴毅歆杨正安周晓罡张绍松孙茂林
- 文献传递
- 马铃薯质体表达载体构建及GFP基因在块茎中的瞬时表达被引量：7
- 2008年
- 利用高等植物质体基因组在进化中高度保守的特点,根据烟草质体基因组全序列设计合成引物,PCR扩增并克隆了马铃薯质体的trnI-trnA基因片段。将测序正确的trnI基因和trnA基因作为定点整合外源基因的同源重组片段,构建成包含Prrn-gfp-aadA-TpsbA表达盒的马铃薯质体定点转化载体pBMLSIA-GFP,酶切鉴定表明,所构建载体符合预期设计。采用该载体对马铃薯块茎进行基因枪法转化,结果表明,GFP基因可在质体特异性启动子Prrn及终止子TpsbA的调控下在马铃薯块茎中瞬时高量表达,经基因枪轰击后马铃薯块茎在紫外投射仪下产生很强的绿色荧光,在距离为6cm,压力1100psi轰击2枪的条件下产生的绿色荧光最强。马铃薯块茎可溶性蛋白SDS-PAGE电泳分析表明,GFP蛋白表达量约占总可溶性蛋白的15.4%-30.2%,均达到了较高的表达水平。该载体对后期马铃薯质体转化体系的建立和其他功能基因导入马铃薯质体进行性状改良具有重要应用价值。
- 丁玉梅杨正安周晓罡张绍松孙茂林
- 关键词：马铃薯质体GFP基因
- 农杆菌介导的Bt基因转化马铃薯的研究被引量：3
- 2008年
- 马铃薯块茎蛾的危害极为严重,通过植物基因工程将Bt基因的Cry1Ab类型导入马铃薯,以期获得抗虫性提高的马铃薯基因工程植株.以马铃薯品种‘会-2’为受体材料,对影响转化效率的因素进行了优化,结果表明:3号(1/2MSO+50μLAs+2 mL农杆菌悬浮液)浸染液有利于抗性芽的分化,乙酰丁香酮可以提高叶片的转化率,共培养3 d的分化率较高.共获得经过卡那霉素筛选的114个转化植株,对初筛株系进行PCR分子鉴定,结果有55%的植株扩增出目的条带,初步证明Cry1Ab基因已整合到马铃薯的基因组中.转化植株的抗虫性鉴定正在进行中.
- 丁玉梅包文梅周晓罡张绍松孙茂林
- 关键词：农杆菌CRY1AB基因基因转化马铃薯
- 植物病原细菌(Ralstonia solanacearum)染色体基因组分泌信号肽计算机分析被引量：1
- 2008年
- 应用SignalP 3.0、TMHMM 2.0、THUMBUP、big-PI、TargetP1.01、Lipop 1.0、TatP 1.0等7种软件对植物病原细菌Ralstonia solanacearum GMI1000染色体基因组3448个氨基酸序列进行预测分析。结果表明,该物种染色体基因组分泌信号肽ORFs有178个,占其基因组编码ORFs的5.2%,其中有150个ORFs属于Ⅰ型分泌信号肽,28个ORFs属于Ⅱ型分泌信号肽。在178个ORFs中具RR-motif信号肽结构的有13个,其中11个属于Ⅰ型信号肽,2个属于Ⅱ型信号肽。通过软件预测未发现Comc型信号肽与细菌素-信息素型信号肽结构。在染色体分泌信号肽ORFs中,有116个具可预测功能,其余62个为功能未知的推定蛋白。已知功能主要集中于细胞代谢、细胞调控及转运、细胞膜结构等领域,这些功能是该物种在长期进化过程中与环境中各种因子发生互作,相互适应的结果。
- 周晓罡丁玉梅张绍松孙茂林李建平
- 关键词：SOLANACEARUM
- Bt基因转入烟草叶绿体获得转化植株的研究被引量：3
- 2007年
- 构建了苏云金杆菌晶体毒蛋白基因Cry1Ab的烟草叶绿体表达载体pCTBt,该载体以烟草叶绿体基因组trnI-trnA为同源重组片段,含有壮观霉素抗性筛选标记基因aadA、质体特异性启动子Prrn和终止子TpsbA.利用基因枪转化法,将pCTBt导入栽培烟草红花大金元叶绿体,经过4次继代筛选,获得9个抗壮观霉素的转化株系,转化频率为0.3～0.6株/枪,其中有5个株系PCR检测结果为阳性,初步确定Cry1Ab基因已整合到烟草叶绿体中.转基因烟草抗斜纹夜蛾试验表明,幼虫死亡率为10%～75%,转基因烟草植株具有较好的杀虫活性.
- 丁玉梅杨正安周晓罡张绍松孙茂林
- 关键词：CRY1AB基因烟草叶绿体转化转基因植株
- 马铃薯青枯病(Ralstonia solanacearum)质粒基因组分泌蛋白信号肽初步分析被引量：1
- 2008年
- 应用SignalP 3.0,TMHMM 2.0,THUMBUP,big-PI,TargetP 1.01,Lipop 1.0,TatP 1.0等7种软件分别对马铃薯青枯病菌Ralstonia solanacearum GMI1000质粒基因组1 681个氨基酸序列进行预测分析.结果表明,该物种质粒基因组分泌蛋白有85个,占其基因组编码蛋白的5.1%.通过对质粒分泌蛋白切割位点信号肽类型分析后发现具Ⅰ型信号肽的分泌蛋白有73个,Ⅱ型的有12个,所有分泌蛋白中具RR-motif信号肽结构的有3个,且均为Ⅰ型信号肽.质粒分泌蛋白中,59个具可预测功能,26个为未知功能蛋白.已知功能的分泌蛋白主要集中于细胞代谢,细胞调控及转运,细胞膜结构等领域.在质粒分泌蛋白中发现3个Ⅲ型信号肽分泌蛋白,该类蛋白是由hip基因编码产生,在植物及动物病原细菌中相当保守,负责将效应蛋白分子转运到寄主细胞中从而产生致病作用.这些功能是该物种在长期进化过程中与环境中各种因子发生互作,相互适应的结果.
- 周晓罡丁玉梅张绍松孙茂林李建平
- 关键词：RUM信号肽
- 用于叶绿体基因组转化的马铃薯高效再生体系的建立被引量：5
- 2006年
- 云南马铃薯不同品种、不同外植体类型的植株再生能力差异极大。阿诗洋芋、K-18、287、丽薯3号、丽薯4号和紫依的分化率较低，在0-27．8％。多数品种带叶柄的叶片再生能力大于叶盘，茎段分化率最低。会-2是最易诱导植株再生的品种，不同外植体的分化率在20．8％-92．2％，叶盘分化率最高，达92．9％，且平均分化芽数达8．2个，适合于会-2的壮观霉素浓度为100mg／L。筛选出了用于叶绿体转化的马铃薯会-2的高效再生体系和壮观霉素浓度，为Bt基因导入马铃薯叶绿体基因组奠定了基础。
- 丁玉梅杨正安吴毅歆周晓罡张绍松孙茂林
- 关键词：马铃薯植株再生叶绿体转化外植体
- 一种经济高效的用Silica提取纯化质粒DNA的方法被引量：5
- 2007年
- 目的:为了达到批量提取质粒DNA的目的,在多次实验的基础上,建立一种经济、高效的质粒提取方法。方法:以pUC18、pET28b、pCAMBIA1304等3种质粒为材料,分别采用silica法和碱裂解法提取质粒DNA,通过质粒DNA浓度的紫外分光光度法定量测定、电泳分析和Hind Ⅲ酶切鉴定,对两种质粒提取方法的效果进行了比较与评价;对silica法进行了改进和优化,进行大批量重组子的提取和验证。结果:silica法和碱裂解法提取质粒DNA效果相当,都可进行后续实验,但silica法具有经济、高效、无毒的优势。结论:silica法是一种简单、经济、高效的质粒提取方法,可用于批量质粒DNA提取。
- 周国雁郭凤根张应华杨正安孙茂林丁玉梅
- 关键词：质粒DNA碱裂解法SILICA
- gfP基因甘蓝质体表达载体构建及原核表达分析被引量：4
- 2008年
- 以甘蓝自交系‘03097’为试材,PCR扩增并克隆了甘蓝质体的trnI-trnA基因区段,利用该基因区段作为定点整合外源基因的同源重组片段,构建了甘蓝质体定点转化载体,并进行了原核表达分析。结果表明,所扩增的基因区段大小为2.7 kb。进行序列分析后,经酶切、连接和转化,构建成含Prrn-gfp-aadA-TpsbA表达盒的质体表达载体,酶切鉴定表明,所构建载体符合预期设计;gfp基因能够在质体特异性启动子Prrn及终止子TpsbA的调控下高水平表达,表达量约占总可溶性蛋白的41.0%,包涵体占菌体蛋白的38.0%。该载体的构建为后期甘蓝质体转化体系的建立和其它功能基因导入甘蓝质体进行性状改良奠定了基础。
- 杨正安丁玉梅许彬张应华
- 关键词：甘蓝质体GFP基因
